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1、分析化学分析化学1第十三章 高效液相色谱法 学习目的学习目的 知识要求知识要求 能力要求能力要求 进入章节学习请点这里进入章节学习请点这里第1节第2节第3节第4节第5节第6节2学习目的学习目的u通过通过学习高效液相色谱法的特点、类型、速率理论、学习高效液相色谱法的特点、类型、速率理论、分离条件和高效液相色谱仪的主要部件及工作流程，分离条件和高效液相色谱仪的主要部件及工作流程，加深对高效液相色谱法的分离原理、条件的理解，熟加深对高效液相色谱法的分离原理、条件的理解，熟悉主要类型特别是化学键合相色谱法的特点和应用，悉主要类型特别是化学键合相色谱法的特点和应用，能利用高效液相色谱仪对待测组分进行分离

2、与分析。能利用高效液相色谱仪对待测组分进行分离与分析。为学习药物分析、天然药物化学等专业课程奠定基础为学习药物分析、天然药物化学等专业课程奠定基础。3知识要求知识要求1.熟悉高效液相色谱法的主要类型，化学键合相色谱法熟悉高效液相色谱法的主要类型，化学键合相色谱法及其流动相、固定相的选择；高效液相色谱法速率理及其流动相、固定相的选择；高效液相色谱法速率理论的特点及分离条件的选择，高效液相色谱仪的主要论的特点及分离条件的选择，高效液相色谱仪的主要部件，定性与定量分析方法。部件，定性与定量分析方法。2.了解高效液相色谱法与经典液相色谱法、气相色谱法了解高效液相色谱法与经典液相色谱法、气相色谱法的区别

3、，其他类型高效液相色谱法在分析中的应用。的区别，其他类型高效液相色谱法在分析中的应用。4能力要求能力要求u掌握高效液相色谱仪的基本结构及仪器的基本操作掌握高效液相色谱仪的基本结构及仪器的基本操作方法，学会使用高效液相色谱仪对药物进行分离与方法，学会使用高效液相色谱仪对药物进行分离与分析的操作技术。分析的操作技术。5第一节概 述 第一节第一节 概概 述述 u高效液相色谱法（高效液相色谱法（HPLC）的特点：）的特点：以经典液相色谱法为基础以经典液相色谱法为基础引入气相色谱法的理论和实验技术引入气相色谱法的理论和实验技术高压输送流动相高压输送流动相高效固定相及高灵敏度检测器高效固定相及高灵敏度检测

4、器现代液相色谱分析方法（具有分离、分析双重作用）现代液相色谱分析方法（具有分离、分析双重作用）6第一节概 述一、与经典液相色谱法相比一、与经典液相色谱法相比 颗粒极细（一般为颗粒极细（一般为1010 m m以下）、规则均匀的固定相，传以下）、规则均匀的固定相，传质阻抗小，柱效高，分离效率高；质阻抗小，柱效高，分离效率高；高压输液泵输送流动相，流速快，分析速度快；高压输液泵输送流动相，流速快，分析速度快；高灵敏度检测器，灵敏度大大提高。紫外检测器最小检高灵敏度检测器，灵敏度大大提高。紫外检测器最小检测限可达测限可达1010 9 9g g，而荧光检测器最小检测限可达，而荧光检测器最小检测限可达10

5、10 1212g g。7第一节概 述二、与气相色谱法相比二、与气相色谱法相比不受试样的挥发性和热稳定性的限制，应用范围广；不受试样的挥发性和热稳定性的限制，应用范围广；流动相的选择范围宽，使分离的选择性高；流动相的选择范围宽，使分离的选择性高；一般在室温条件下进行分离，不需要高柱温。一般在室温条件下进行分离，不需要高柱温。分析化学分析化学8课堂互动课堂互动第一节概 述9第二节 高效液相色谱法的主要类型及原理 第二节第二节 高效液相色谱法的主要类型及原理高效液相色谱法的主要类型及原理 一、主要类型一、主要类型u化学键合相色谱法化学键合相色谱法离子抑制色谱法离子抑制色谱法离子对色谱法离子对色谱法离

6、子色谱法离子色谱法亲合色谱法亲合色谱法10第二节 高效液相色谱法的主要类型及原理二、化学键合相色谱法二、化学键合相色谱法u以化学键合相为固定相的色谱法，简称键合相色谱法以化学键合相为固定相的色谱法，简称键合相色谱法(bonded phase chromatography(bonded phase chromatography；BPC)BPC)。u化学键合相：采用化学反应的方法将官能团键合在载化学键合相：采用化学反应的方法将官能团键合在载体表面所形成的固定相。体表面所形成的固定相。11第二节 高效液相色谱法的主要类型及原理u键合相色谱法的优点键合相色谱法的优点：固定相的均一性和稳定性好，使用过程

7、中不易流失，使固定相的均一性和稳定性好，使用过程中不易流失，使用周期长；用周期长；柱效高；重现性好；柱效高；重现性好；能使用的流动相和键合相的种类多，分离的选择性高。能使用的流动相和键合相的种类多，分离的选择性高。u根据化学键合相与流动相极性的相对强弱分类：分根据化学键合相与流动相极性的相对强弱分类：分为正相（为正相（normal phasenormal phase，NPNP）和反相（）和反相（reversed reversed phasephase，RPRP）键合相色谱法。）键合相色谱法。12第二节 高效液相色谱法的主要类型及原理（一）正相键合相色谱法（一）正相键合相色谱法（固定相极性大于流

8、动相极性固定相极性大于流动相极性）u固定相：极性键合相固定相：极性键合相 如氰基（如氰基（CNCN）、氨基（）、氨基（NHNH2 2）或二羟基键合硅胶。）或二羟基键合硅胶。u流动相：非极性或弱极性溶剂加极性调节剂流动相：非极性或弱极性溶剂加极性调节剂如烷烃加醇类（正己烷如烷烃加醇类（正己烷-甲醇）。甲醇）。u适用范围：溶于有机溶剂的极性至中等极性的分子型化合适用范围：溶于有机溶剂的极性至中等极性的分子型化合物。物。13第二节 高效液相色谱法的主要类型及原理u分离机制：分离机制：分配：把有机键合层看作一层液膜，溶质在两相间溶解。分配：把有机键合层看作一层液膜，溶质在两相间溶解。u极性强的组分极性

9、强的组分k k大，保留时间（大，保留时间（t tR R）长）长,后洗脱出柱。后洗脱出柱。14第二节 高效液相色谱法的主要类型及原理（二）反相键合相色谱法（二）反相键合相色谱法（固定相极性小于流动相极性固定相极性小于流动相极性）u固定相：非极性键合相固定相：非极性键合相如十八烷基硅烷（如十八烷基硅烷（C18，ODS）、辛烷基（）、辛烷基（C8）键合硅胶。）键合硅胶。u流动相：水为基础溶剂，加入一定量与水混溶的极性调节剂，流动相：水为基础溶剂，加入一定量与水混溶的极性调节剂，常用甲醇常用甲醇-水、乙腈水、乙腈-水等。水等。u应用范围：较广泛，适用于非极性至中等极性的组分分离。应用范围：较广泛，适用

10、于非极性至中等极性的组分分离。15第二节 高效液相色谱法的主要类型及原理u分离机制分离机制保留行为保留行为 主要是利用非极性溶质分子或溶质分子中主要是利用非极性溶质分子或溶质分子中非极性基团与极性溶剂接触时产生排斥力，而从非极性基团与极性溶剂接触时产生排斥力，而从溶剂中被溶剂中被“挤出挤出”，即产生疏溶剂作用，促使溶，即产生疏溶剂作用，促使溶质分子与键合相表面的非极性的烷基发生疏水缔质分子与键合相表面的非极性的烷基发生疏水缔合，而使溶质分子保留在固定相中。合，而使溶质分子保留在固定相中。16第二节 高效液相色谱法的主要类型及原理u保留行为的主要影响因素保留行为的主要影响因素溶质的分子结构（极性

11、）溶质的分子结构（极性）极性越弱极性越弱，疏水性越强，疏水性越强，k k越大，越大，t tR R也越大；反之亦然也越大；反之亦然。固定相固定相 键合烷基的疏水性随碳链的延长而增加，溶质的键合烷基的疏水性随碳链的延长而增加，溶质的k k也也增大。增大。硅胶表面键合烷基的浓度越大，则溶质的硅胶表面键合烷基的浓度越大，则溶质的k k越大。越大。17第二节 高效液相色谱法的主要类型及原理流动相流动相 极性越强，洗脱能力越弱，使溶质的极性越强，洗脱能力越弱，使溶质的k k越大越大溶剂种类：水（洗脱能力弱）为弱溶剂，醇溶剂种类：水（洗脱能力弱）为弱溶剂，醇（洗脱能力强）为强溶剂（洗脱能力强）为强溶剂溶剂比

12、例：水的比例增加，使溶剂比例：水的比例增加，使k k增大增大分析化学分析化学18第二节 高效液相色谱法的主要类型及原理19第二节 高效液相色谱法的主要类型及原理三、其他高效液相色谱法三、其他高效液相色谱法（一）离子抑制色谱法（一）离子抑制色谱法（ion suppression chromatographyion suppression chromatography；ISC ISC）u通过调节流动相的通过调节流动相的pHpH，抑制组分的解离，增加组，抑制组分的解离，增加组分在固定相中的溶解度，改善峰形，以达到分离分在固定相中的溶解度，改善峰形，以达到分离有机弱酸、弱碱的目的，有机弱酸、弱碱的目的

13、，u适用于适用于3p3pK Ka a77的弱酸、的弱酸、7p7pK Kb b88的弱碱。的弱碱。20第二节 高效液相色谱法的主要类型及原理（二）离子对色谱法（二）离子对色谱法 （ion pair chromatography；IPC）u把离子对试剂加入到含水流动相中，组分离子在流动相中把离子对试剂加入到含水流动相中，组分离子在流动相中与离子对试剂的反离子（与离子对试剂的反离子（counter ion）生成中性离子对，增）生成中性离子对，增加溶质与非极性固定相的作用，使加溶质与非极性固定相的作用，使k增加，改善分离效果。增加，改善分离效果。u该方法适用于分离可离子化或离子型的化合物，如生物碱该方

14、法适用于分离可离子化或离子型的化合物，如生物碱类、儿茶酚氨类、有机酸类、维生素类、抗生素类药物等。类、儿茶酚氨类、有机酸类、维生素类、抗生素类药物等。21第二节 高效液相色谱法的主要类型及原理-u离子对模型离子对模型以通式表示为：以通式表示为：22第二节 高效液相色谱法的主要类型及原理分析酸类或带负电荷的物质，一般用季铵盐；如分析酸类或带负电荷的物质，一般用季铵盐；如四丁基铵磷酸盐；四丁基铵磷酸盐；分析碱类或带正电荷的物质，一般用烷基磺酸盐分析碱类或带正电荷的物质，一般用烷基磺酸盐或硫酸盐。或硫酸盐。u适用范围和离子对试剂的选择适用范围和离子对试剂的选择23（三）离子色谱法（ion chrom

15、atography，IC）离子交换色谱法对许多正、负离子可实现分离。但由于一些常见的无机离子在可见或近紫外区没有吸收，因此难用紫外-可见检测器进行检测。1975年Small提出了将离子交换与电导检测器相结合分析各种离子的方法并称为离子色谱法。适用于分离阴、阳离子，以及氨基酸、糖类、DNA和DNA水解物等。第二节 高效液相色谱法的主要类型及原理24（四）亲和色谱法（affinity chromatography，AC）亲和色谱法是将具有生物活性的配位基键合到载体或基质表面形成固定相，利用蛋白质和生物大分子与固定相表面上配位基的专属性亲和力进行分离的色谱方法。是生物大分子分离和分析的重要方法。第二

16、节 高效液相色谱法的主要类型及原理25第二节 高效液相色谱法的主要类型及原理26 牛黄解毒片中黄芩苷（弱酸性）含量测定条件如下：固定相：C18，流动相：甲醇-水-磷酸（4555:0.2）请分析：该试验采用的是哪一种色谱方法？流动相中为何加入磷酸？第二节 高效液相色谱法的主要类型及原理27第三节高效液相色谱法的固定相和流动相及选择一、固定相一、固定相uHPLC的固定相多采用化学的固定相多采用化学键合相。键合相。u键合相的特点：键合相的特点：使用过程中不流失；化学稳定性好；适用梯度使用过程中不流失；化学稳定性好；适用梯度洗脱；载样量大。洗脱；载样量大。第三节高效液相色谱法的固定相和流动相及选择第三

17、节高效液相色谱法的固定相和流动相及选择28第三节高效液相色谱法的固定相和流动相及选择（一）非极性键合相（一）非极性键合相 非极性烃基，如非极性烃基，如C18C8等键合在硅胶表面；等键合在硅胶表面；用于反相色谱；用于反相色谱；长链烷基可使溶质的长链烷基可使溶质的k k增大，载样量提高，稳增大，载样量提高，稳定性更好。定性更好。29第三节高效液相色谱法的固定相和流动相及选择键合反应键合反应 硅氧烷（硅氧烷（SiSiO OSiSiC C）型：氯硅烷与硅胶进行）型：氯硅烷与硅胶进行硅烷化反应硅烷化反应 22SiOHClCH+SiSiSiClH18OR118HC3737RRR130第三节高效液相色谱法的

18、固定相和流动相及其选择（二）中等极性键合相（二）中等极性键合相醚基键合相醚基键合相用于反相或正相色谱用于反相或正相色谱（三）极性键合相（三）极性键合相常用氨基（常用氨基（NHNH2 2）氰基（氰基（CNCN）键合相）键合相一般用于正相色谱一般用于正相色谱31第三节高效液相色谱法的固定相和流动相及其选择不与固定相发生反应。不与固定相发生反应。对试样有适宜的溶解度，要求对试样有适宜的溶解度，要求k在在110范围内。范围内。与检测器相匹配，例如用紫外检测器时，不能选与检测器相匹配，例如用紫外检测器时，不能选用对紫外光有吸收的溶剂。用对紫外光有吸收的溶剂。纯度高，黏度小。常使用低黏度的甲醇、乙腈，纯度

19、高，黏度小。常使用低黏度的甲醇、乙腈，可以降低柱压，提高柱效。可以降低柱压，提高柱效。二、化学键合相的流动相二、化学键合相的流动相u对流动相的要求：对流动相的要求：32第三节高效液相色谱法的固定相和流动相及其选择 u流动相对分离的影响：流动相对分离的影响：溶剂的配比影响流动相的洗脱能力，改变保留时间；溶剂的配比影响流动相的洗脱能力，改变保留时间；溶剂种类影响流动相的选择性，改变分离效果。溶剂种类影响流动相的选择性，改变分离效果。正相色谱法：溶剂的极性越强，洗脱能力越强。正相色谱法：溶剂的极性越强，洗脱能力越强。反相色谱法：溶剂的极性强，洗脱能力弱。反相色谱法：溶剂的极性强，洗脱能力弱。33第三

20、节高效液相色谱法的固定相和流动相及其选择例如：例如：水的极性大于甲醇，所以在反相色谱法中，甲醇水的极性大于甲醇，所以在反相色谱法中，甲醇的洗脱能力比水强，增大甲醇的比例，流动相的的洗脱能力比水强，增大甲醇的比例，流动相的洗脱能力增强，洗脱能力增强，k与与tR减小。减小。34第三节高效液相色谱法的固定相和流动相及其选择35第三节高效液相色谱法的固定相和流动相及其选择36第三节高效液相色谱法的固定相和流动相及其选择正相键合相色谱法常选用乙醚、氯仿和二氯正相键合相色谱法常选用乙醚、氯仿和二氯甲烷为极性调节剂，正己烷为底剂。甲烷为极性调节剂，正己烷为底剂。37第三节高效液相色谱法的固定相和流动相及其选

21、择38第四节分离条件的选择第四节分离条件的选择第四节分离条件的选择一、一、高效液相色谱中的速率理论高效液相色谱中的速率理论uGC中的速率理论方程式：中的速率理论方程式：uHPLC中的速率理论方程式：中的速率理论方程式：H H=A A+C Cm mu u +C Csmsmu u 39第四节分离条件的选择u涡流扩散项涡流扩散项(A A)A A=2=2ddp p 减少固定相颗粒的直径减少固定相颗粒的直径（d dp p）；采用球形、粒度均匀的固定相，用匀浆法装柱，采用球形、粒度均匀的固定相，用匀浆法装柱，以减小填充因子以减小填充因子（同（同GC）。40第四节分离条件的选择u纵向扩散项纵向扩散项(B/u

22、)该项可忽略该项可忽略 B=2rDm 溶质在流动相中的扩散系数（溶质在流动相中的扩散系数（Dm）很小，室）很小，室温操作，且温操作，且u大于大于u最佳最佳。u传质阻力项（传质阻力项（Cu）固定相传质阻力：固定相传质阻力：CS可以忽略可以忽略，因，因df（固定液膜厚度）（固定液膜厚度）极小。极小。41第四节分离条件的选择流动相传质阻力：流动相传质阻力：Cm与固定相颗粒粒度（与固定相颗粒粒度（dp）及组分分子在流动相中的扩散）及组分分子在流动相中的扩散系数系数 Dm有关。有关。Dp越小，越小，Cm越小；越小；Dm越大，越大，Cm越小。越小。要求：要求：dp小，小，Dm大。大。静态流动相传质阻力：静

23、态流动相传质阻力：由部分流动相在固定相微孔内的滞留而产生。由部分流动相在固定相微孔内的滞留而产生。静态流动相传质阻抗系数静态流动相传质阻抗系数Csm Csm dp2，Csm 1/Dm，DmT/要求要求:固定相粒度（固定相粒度（dp2）、）、流动相黏度（流动相黏度（）都小。）都小。42第四节分离条件的选择uHPLC中的速率理论可表示为：中的速率理论可表示为：H=A+Cmu+Csmu 原因：原因：HPLC中流动相为液体，固定相为化中流动相为液体，固定相为化学键合相。学键合相。结果：结果：HPLC的实验条件应该是：小而均匀的实验条件应该是：小而均匀的球形化学键合相；低粘度的流动相，流速的球形化学键合

24、相；低粘度的流动相，流速不宜过快；柱温适当。不宜过快；柱温适当。43第四节分离条件的选择 44第四节分离条件的选择二、正相键合相色谱法的分离条件二、正相键合相色谱法的分离条件u固定相固定相极性键合相如氰基、氨基键合相等极性键合相如氰基、氨基键合相等u流动相流动相烷烃加适量极性调节剂（正己烷烷烃加适量极性调节剂（正己烷-甲醇）甲醇）45第四节分离条件的选择三、反相键合相色谱法的分离条件三、反相键合相色谱法的分离条件u固定相非极性键合相固定相非极性键合相 如如C18u流动相以水为基础溶剂，加入甲醇、乙腈流动相以水为基础溶剂，加入甲醇、乙腈 等极性调节剂。等极性调节剂。46第五节高效液相色谱仪第五节

25、高效液相色谱仪第五节高效液相色谱仪输液系统输液系统进样系统进样系统分离系统分离系统检测系统检测系统数据记录处理系统数据记录处理系统 u组成：组成：47进样口进样口检测器检测器色谱图色谱图色谱柱色谱柱溶剂溶剂高压泵高压泵混合器混合器高效液相色谱仪示意图高效液相色谱仪示意图第五节高效液相色谱仪48u输液泵应具备的性能：输液泵应具备的性能：流量精度高且稳定流量精度高且稳定流量范围宽且可调流量范围宽且可调能在高压下连续工作能在高压下连续工作液缸容积小液缸容积小密封性能好，耐腐蚀密封性能好，耐腐蚀第五节高效液相色谱仪一、输液系统（高压输液泵）一、输液系统（高压输液泵）49第五节高效液相色谱仪u高压输液泵

26、：高压输液泵：恒流泵：在输送流动相过程中流量恒定，常恒流泵：在输送流动相过程中流量恒定，常用柱塞往复泵。用柱塞往复泵。双泵：为了克服流量的脉动，常用串联式。双泵：为了克服流量的脉动，常用串联式。50 柱塞往复泵结构示意图柱塞往复泵结构示意图1.转动凸轮转动凸轮 2.柱塞柱塞 3.密封垫密封垫 4.液缸液缸 5.入口单向阀入口单向阀6.出口单向阀出口单向阀 7.流动相入口流动相入口 8.流动相出口流动相出口第五节高效液相色谱仪51泵1泵2阻尼器单向阀串联式柱塞往复泵示意图串联式柱塞往复泵示意图第五节高效液相色谱仪52等强度洗脱等强度洗脱 在同一分析周期内流动相的组成保持恒定，适在同一分析周期内流

27、动相的组成保持恒定，适合于组分数目少，性质差别小的试样。合于组分数目少，性质差别小的试样。梯度洗脱梯度洗脱 在一个分析周期内，程序控制改变流动相的组在一个分析周期内，程序控制改变流动相的组成，如溶剂的极性、离子强度、成，如溶剂的极性、离子强度、pHpH值等。分析组值等。分析组分数目多、性质差别大的复杂试样。分数目多、性质差别大的复杂试样。u洗脱方式：洗脱方式：第五节高效液相色谱仪53第五节高效液相色谱仪u进样器进样器进样阀（六通阀），进样阀（六通阀），常用带有定量管的六通阀常用带有定量管的六通阀自动进样装置自动进样装置二、进样系统二、进样系统54充样位置（充样位置（load)load)进样位置

28、进样位置(inject)(inject)来自泵来自泵至色谱柱至色谱柱 来自泵来自泵至色谱柱至色谱柱废废液液废废液液六通阀进样示意图六通阀进样示意图 第五节高效液相色谱仪55u色谱柱（色谱柱（column）由柱管和固定相组成由柱管和固定相组成可重复使用可重复使用实验结束，要用经过滤和脱气的适当溶剂冲洗实验结束，要用经过滤和脱气的适当溶剂冲洗色谱系统色谱系统 第五节高效液相色谱仪56第五节高效液相色谱仪u对检测器（对检测器（detector）的要求）的要求：灵敏度（灵敏度（sensitivity）高（检测限低）高（检测限低）噪音（噪音（noise）低）低线性范围（线性范围（linear range

29、）宽）宽重复性（重复性（repeatability）好）好适用范围广（通用型、专属型）适用范围广（通用型、专属型）四、检测系统四、检测系统57第五节高效液相色谱仪u检测原理：朗伯检测原理：朗伯-比尔定律：比尔定律：A=EClu特点：特点：紫外检测器的灵敏度、精密度及线性范围好，紫外检测器的灵敏度、精密度及线性范围好，不易受温度和流速的影响，可用于梯度洗脱。不易受温度和流速的影响，可用于梯度洗脱。u局限：局限：只能检测有紫外吸收的物质，流动相的截止波只能检测有紫外吸收的物质，流动相的截止波长应小于检测波长。长应小于检测波长。u为专属型、浓度型检测器。为专属型、浓度型检测器。（一）紫外检测器（一）

30、紫外检测器(ultraviolet detector)58固定波长检测器固定波长检测器 ：254nm可变波长检测器：可变波长检测器：200400（800）nm，光电二极管阵列检测器光电二极管阵列检测器(photodiode array detector；PDAD)：一系列光电二极管，可以进行波长快速扫描，同一系列光电二极管，可以进行波长快速扫描，同时获得样品的色谱图和每个色谱组分的光谱图。时获得样品的色谱图和每个色谱组分的光谱图。吸收光谱用于组分的定性，色谱峰面积用于定量，吸收光谱用于组分的定性，色谱峰面积用于定量，判断峰纯度。判断峰纯度。第五节高效液相色谱仪u紫外检测器的紫外检测器的59第五

31、节高效液相色谱仪（二）荧光检测器（二）荧光检测器(fluorescence detector；FD)u特点：特点：选择性好，专属型检测器选择性好，专属型检测器灵敏度比紫外检测器高（检测限灵敏度比紫外检测器高（检测限10-10 g/ml）60第五节高效液相色谱仪u微机采集和分析色谱数据微机采集和分析色谱数据61第五节高效液相色谱仪62第六节定性与定量分析方法一、定性分析方法一、定性分析方法二、定量分析方法（同二、定量分析方法（同GCGC）：）：外标法、内标法外标法、内标法第六节第六节 定性与定量分析方法定性与定量分析方法63 一、学习内容一、学习内容 1.1.化学键合相色谱法化学键合相色谱法正相

32、化学键合相色谱法：固定相极性大于流动相极性反相化学键合相色谱法：固定相极性小于流动相极性 2.其他高效液相色谱法其他高效液相色谱法 离子抑制色谱法；离子对色谱法 离子色谱法；亲和色谱法3.高效液相色谱法（化学键合相色谱法）中速率理论方程表达高效液相色谱法（化学键合相色谱法）中速率理论方程表达式式：H=A+Cmu+Csmu。学习小结644.4.化学键合相色谱法的固定相、流动相及化学键合相色谱法的固定相、流动相及分离条件的选择分离条件的选择正相键合相色谱法：固定相为极性，常用氰基、氨基键合相 流动相为非极性，常用甲醇-水 分离溶于有机溶剂的极性至中等极性化合物 反相键合相色谱法：固定相为非极性，常

33、用C18流动相为极性，常用甲醇-水分离非极性至中等极性的分子型化合物学习小结655 5.高效液相色谱仪的组成高效液相色谱仪的组成输液系统输液系统输 液 系 统 进 样 系 统 分 离 系 统 检 测 系 统 数据记录及处理系统6 6HPLCHPLC定性与定量分析同定性与定量分析同GCGC 学习小结66 一、选择题一、选择题1.1.HPLCHPLC与与GCGC比较，可忽略纵向扩散项，主要原因是：（比较，可忽略纵向扩散项，主要原因是：（）A.A.系统压力较高系统压力较高 B.B.流速比流速比GCGC的快的快C.C.流动相黏度大流动相黏度大 D.D.柱温低柱温低2.2.在反相键合相色谱法中固定相与流

34、动相的极性关系是：（在反相键合相色谱法中固定相与流动相的极性关系是：（）A.A.固定相的极性流动相的极性固定相的极性流动相的极性 B.B.固定相的极性流动相的极性固定相的极性流动相的极性 C.C.固定相的极性流动相的极性固定相的极性流动相的极性 D.D.不一定，视组分性质而定不一定，视组分性质而定 673.3.在反相键合相色谱法中，流动相常用（在反相键合相色谱法中，流动相常用（）A A甲醇甲醇-水水 B.B.正己烷正己烷 C.C.水水 D.D.正己烷正己烷-水水4.4.在正相键合相色谱法中，流动相常用（在正相键合相色谱法中，流动相常用（）A.A.甲醇甲醇-水水 B.B.烷烃加醇类烷烃加醇类 C

35、.C.水水 D.D.缓冲盐溶液缓冲盐溶液685.在反相键合相色谱法中，流动相的极性增大，在反相键合相色谱法中，流动相的极性增大，洗脱能力（洗脱能力（）。）。A.A.降低降低 B.B.增强增强 C.C.不变化不变化 D.D.不能确定不能确定6.6.用用ODSODS柱分析一弱极性物质，以某一比例甲醇柱分析一弱极性物质，以某一比例甲醇-水为流动相时，样品的水为流动相时，样品的K K值较小，若想增大值较小，若想增大K K值应值应（）。）。A.A.增加甲醇的比例增加甲醇的比例 B.B.增加水的比例增加水的比例 C.C.增加流速增加流速 D.D.降低流速降低流速697.7.下列对反相键合相色谱法的描述，不

36、正确的是（下列对反相键合相色谱法的描述，不正确的是（）A.A.流动相为极性流动相为极性 C.C.适于分离非水溶性的弱极性物质适于分离非水溶性的弱极性物质B.B.固定相为非极性固定相为非极性 D.D.流动相极性变大，洗脱能力变大流动相极性变大，洗脱能力变大8.8.在反相键合相色谱法中，若以甲醇在反相键合相色谱法中，若以甲醇-水为流动相，增加甲醇水为流动相，增加甲醇的比例时，组分的容量因子的比例时，组分的容量因子k k与保留时间与保留时间t tR R将有何变化？将有何变化？（）A.A.k k与与t tR R增大增大 B.B.k k与与t tR R减小减小 C.C.k k与与t tR R不变不变 D.D.k k增大，增大，t tR R减小减小70本章结束！谢谢！