体外抗菌实验课件.pptx

1、 第十九章第十九章 药物的体外抗菌试验药物的体外抗菌试验 药物的体外抗菌试验药物的体外抗菌试验 antimicrobialtestinvitro 药物的体外抗菌试验是在体外测定微生物对药物的体外抗菌试验是在体外测定微生物对药物敏感程度的试验，药物敏感程度的试验，已广泛地应用于科研、生产和临床。如抗菌药物的已广泛地应用于科研、生产和临床。如抗菌药物的筛选、提取过程中的追踪、抗菌谱的定、药物含量的测筛选、提取过程中的追踪、抗菌谱的定、药物含量的测定、药物血浓度测定、指导临床用药的药敏试验等。定、药物血浓度测定、指导临床用药的药敏试验等。抗菌试验包括抑菌试验和杀菌试验。抗菌试验包括抑菌试验和杀菌试验

2、。抑菌：抑菌：即抑制微生物的生长繁殖，但不能杀死微即抑制微生物的生长繁殖，但不能杀死微 生物，生物，在药物除去后微生物又能生长在药物除去后微生物又能生长.杀菌：杀菌：即能杀死微即能杀死微 生物，当药物除去后，微生生物，当药物除去后，微生 物也不物也不能再生长繁殖。能再生长繁殖。第一节第一节 常用的体外抑菌试验常用的体外抑菌试验连续稀释法色连续稀释法色serial dilution test可用于测定药物的最低抑菌浓度可用于测定药物的最低抑菌浓度(MIC)和最低杀和最低杀菌浓度菌浓度(MBC)。可以用液体培养基，也可用固体培。可以用液体培养基，也可用固体培养基。养基。1液体培养基连续稀释法液体培

3、养基连续稀释法(见下图见下图)2固体培养基连续稀释法固体培养基连续稀释法 分平板法和斜面分平板法和斜面 法。法。琼脂扩散法琼脂扩散法agar diffusion test是利用药物可以在琼脂培养基中扩散，在药是利用药物可以在琼脂培养基中扩散，在药物有效浓度的范围内形成抑菌圈或抑菌距离，以物有效浓度的范围内形成抑菌圈或抑菌距离，以抑菌圈直径或抑菌距离的大小来评价药物抗菌作抑菌圈直径或抑菌距离的大小来评价药物抗菌作用强弱。用强弱。inhibition zones1、滤纸片法、滤纸片法适用于新药的初筛试验适用于新药的初筛试验。2打孔法打孔法适于药物血浓度的监测。适于药物血浓度的监测。3挖沟法挖沟法适

4、用于在一个平板上试验一种药物对几种试验适用于在一个平板上试验一种药物对几种试验菌的抗菌作用。菌的抗菌作用。第二节第二节 杀菌试验杀菌试验用以评价药物对微生物的致死活性用以评价药物对微生物的致死活性。最低杀菌浓度：最低杀菌浓度：指该药物能杀死细菌的最低浓度。从对微生指该药物能杀死细菌的最低浓度。从对微生物广义而言，也可称之为最低致死浓度物广义而言，也可称之为最低致死浓度(MLC)。是将待检药物先以合适的液体培养基在试管内进行连续稀释，每管内再加入一定量的试验菌液，培养后可得该药物的MIC，取MIC终点以上未长菌的各管培养液，分别移种于另一无菌平板上，培养后凡平板上无菌生长的药物最低浓度即为该药物

5、的MBC(或MLC)。活菌计数法活菌计数法是在一定浓度的定量药物内加入定量的试验菌，是在一定浓度的定量药物内加入定量的试验菌，作用一定时间后，取样进行活菌计数，从存活的微生作用一定时间后，取样进行活菌计数，从存活的微生物数计算出药物对微生物的致死率。物数计算出药物对微生物的致死率。石炭酸系数（又称酚系数）石炭酸系数（又称酚系数）是以石炭酸为标准，在规定的试验条件下，作用是以石炭酸为标准，在规定的试验条件下，作用一定时间，将待测的化学消毒剂与石炭酸对伤寒沙门一定时间，将待测的化学消毒剂与石炭酸对伤寒沙门菌或金黄色葡萄球菌的杀菌效力相比较，菌或金黄色葡萄球菌的杀菌效力相比较，所得杀菌所得杀菌效力的

6、比值。效力的比值。棋盘格法棋盘格法是由于在试验时，含两种不同浓度是由于在试验时，含两种不同浓度药物的试管排列呈棋盘状而得名，药物的试管排列呈棋盘状而得名，用以用以评价两种药物同时用不同浓度进行联合评价两种药物同时用不同浓度进行联合试验时的抗菌活性。试验时的抗菌活性。第三节第三节 联合抗菌试验联合抗菌试验在药学上作中，常需检查两种抗菌药物在药学上作中，常需检查两种抗菌药物在联合应用时的相互作用以及抗菌药物与不在联合应用时的相互作用以及抗菌药物与不同同pH值或不同离子溶液的相互影响。如加强值或不同离子溶液的相互影响。如加强药物抗菌作用的为药物抗菌作用的为协同协同(synergism)；减弱药；减弱

7、药物作用的为物作用的为拮抗拮抗(antagonism)；相互无影响的；相互无影响的为为无关无关(indjfference)；作用为二者之和的为；作用为二者之和的为累累加加(addition)。纸条试验纸条试验即在已接种试验菌的平板表面垂直放置两条各浸有即在已接种试验菌的平板表面垂直放置两条各浸有一种药液的滤纸条，培养后根据抑菌区的加强、减弱或一种药液的滤纸条，培养后根据抑菌区的加强、减弱或无影响来判断它们在联合应用时的效应。无影响来判断它们在联合应用时的效应。梯度平板纸条试验梯度平板纸条试验需先制备含药的梯度平板。将试验菌悬液涂布于需先制备含药的梯度平板。将试验菌悬液涂布于平板表面，取滤纸条浸

8、透另一待检药液，按梯度平板平板表面，取滤纸条浸透另一待检药液，按梯度平板中药物浓度递减的方向置于平板表面。培养后，如该中药物浓度递减的方向置于平板表面。培养后，如该待检药液对平板内的药物有加强作用，则可见沿纸条待检药液对平板内的药物有加强作用，则可见沿纸条两边的抑菌区被扩大。两边的抑菌区被扩大。第四节第四节 体外抗菌试验的影响因素体外抗菌试验的影响因素1试验菌试验菌 在抗菌试验中所用试验菌一般应该用标在抗菌试验中所用试验菌一般应该用标准菌株。准菌株。2培养基培养基 培养基的质量须加控制。培养基的质量须加控制。3抗菌药物抗菌药物 药物的浓度和总量直接影响抗菌试验的药物的浓度和总量直接影响抗菌试验

9、的结果，需要精确配制。结果，需要精确配制。第二十章第二十章药物制剂的微生物学检查药物制剂的微生物学检查药物制剂的微生物学检查药物制剂的微生物学检查 药物制剂的微生物学检查主要包括药物制剂的微生物学检查主要包括:规定灭菌药品规定灭菌药品-无菌检验无菌检验非规定灭菌药品非规定灭菌药品-微生物限度检查微生物限度检查第一节无菌检查 一、无菌检查的概念及应用范围（一）概念p333（二）无菌检查的基本原则采用严格的无菌操作方法，将被检查的药品取一定量分别接种于适合各种微生物生长的不同培养基中（通常为需氧菌培养基、厌氧菌培养基和真菌培养基），置适宜温度下培养一定时间后，观察有无微生物生长，以判断被检药品是否

10、合格。由于无菌检查是用部分样本的结果推断整体的含菌情况，故被检药品的取样及程序必须按照国家药典的规定进行。(三）应用范围1各种注射制剂2眼用及外伤用制剂3植入剂4可吸收的止血剂5外科用敷料及器材第二节第二节 无菌制剂的无菌检查无菌制剂的无菌检查（一）一般药品的无菌检查（一）一般药品的无菌检查一般药品的无菌检查法属于一般药品的无菌检查法属于直接接种法直接接种法，即，即将检品按规定量直接分别接种于适宜需氧菌、厌将检品按规定量直接分别接种于适宜需氧菌、厌氧菌和真菌生长繁殖的一定量的培养基中，同时氧菌和真菌生长繁殖的一定量的培养基中，同时以同样的培养基作以同样的培养基作阳性对照试验阳性对照试验。我国药

11、典规定以我国药典规定以金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌CMCC(B)26003、生袍梭状芽胞杆菌、生袍梭状芽胞杆菌CMCC(B)64941、白、白假丝酵母菌假丝酵母菌CMCC(F)98001作为需氧菌、厌氧作为需氧菌、厌氧菌和真菌的阳性对照菌株。菌和真菌的阳性对照菌株。然后分别按不同的需要条件培养一定时然后分别按不同的需要条件培养一定时间间,如需氧菌、厌氧菌在如需氧菌、厌氧菌在3035培养培养5天天,真菌在真菌在2025培养培养7天天.观察结果时观察结果时,阳阳性对照必须长菌性对照必须长菌,才能判定供试品是否合才能判定供试品是否合格格;若阳性对照管不长菌若阳性对照管不长菌,说明该药物可能说明该药物

12、可能有抗菌作用或是油剂等特殊制剂有抗菌作用或是油剂等特殊制剂,还应考还应考虑实验条件的合用性虑实验条件的合用性.（二）特殊药品的无菌检查法（二）特殊药品的无菌检查法如果阳性对照管不长菌，则必须进行特殊处如果阳性对照管不长菌，则必须进行特殊处理后方可按照一般药品的无菌检查法进行。理后方可按照一般药品的无菌检查法进行。1油类药物的无菌检查油类药物的无菌检查 一般油剂因与常规培养基不混溶，药品中的一般油剂因与常规培养基不混溶，药品中的微生物不易生长，所以一般可采用微生物不易生长，所以一般可采用吐温吐温(聚山梨酯聚山梨酯)培养基培养基，其余同一般药品无菌检查法。，其余同一般药品无菌检查法。2抗菌药物或

13、含防腐剂药物的无菌检查抗菌药物或含防腐剂药物的无菌检查 如果被检药品具有抗菌作用，阳性对照管及试验如果被检药品具有抗菌作用，阳性对照管及试验管均可能不长菌。因此在进行无菌检查前必须采用一管均可能不长菌。因此在进行无菌检查前必须采用一些方法除去药物本身的抗菌作用，然后再依上述方法些方法除去药物本身的抗菌作用，然后再依上述方法进行无菌检查。进行无菌检查。(1)加入灭活剂加入灭活剂:e.g.在青霉素的无菌检查时在青霉素的无菌检查时,加入足加入足够使青霉素灭活的无菌青霉素酶溶液够使青霉素灭活的无菌青霉素酶溶液,然后再按一般方然后再按一般方法进行无菌检查法进行无菌检查.(2)微孔滤膜法微孔滤膜法(3)稀

14、释法稀释法(4)离心沉淀法离心沉淀法 第三节第三节-口服药及外用药物的微生物学检查口服药及外用药物的微生物学检查1 概念概念2 应用范围应用范围3 供试品供试品 (1)供试品的一般要求供试品的一般要求 (2)供试液供试液p334 二二 常用微生物限度检查方法常用微生物限度检查方法 目前对口服药及外用药物的微生物学检验主目前对口服药及外用药物的微生物学检验主要是微生物限度检验，即要是微生物限度检验，即:(1)染菌量检查染菌量检查:包括细菌总数、霉菌总数测定。包括细菌总数、霉菌总数测定。(2)控制菌检查：大肠杆菌、沙门菌、金黄色葡控制菌检查：大肠杆菌、沙门菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌等。萄球菌

15、、铜绿假单胞菌等。我国规定的项目有：我国规定的项目有：细菌总数测定，霉菌总数测定。病原菌细菌总数测定，霉菌总数测定。病原菌(大肠埃希大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、沙门菌和破伤菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、沙门菌和破伤风梭菌风梭菌)的检验和活螨的检验的检验和活螨的检验等。等。判断合格与否的标准是：判断合格与否的标准是：口服药及外用药中微生物总量须低于规定限量外，口服药及外用药中微生物总量须低于规定限量外，并须在并须在口服药物每克或每毫升中不得含有大肠埃希菌、口服药物每克或每毫升中不得含有大肠埃希菌、沙门菌；外用药物每克或每毫升中不得含有铜绿假单沙门菌；外用药物每克或每毫升中不得含

16、有铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌和破伤风梭菌，此外均不得检胞菌、金黄色葡萄球菌和破伤风梭菌，此外均不得检出活螨出活螨。细菌总数的测定细菌总数的测定:是了解被检药品在单位重量或体积是了解被检药品在单位重量或体积(每克每克或每毫升或每毫升)内所含有的活菌数内所含有的活菌数(实际是需氧菌实际是需氧菌的活菌数的活菌数)，以判断供试药物被细菌污染的程，以判断供试药物被细菌污染的程度，是对该药品整个生产过程的卫生学总评度，是对该药品整个生产过程的卫生学总评价的一个重要依据。价的一个重要依据。方法方法:琼脂倾注平皿法琼脂倾注平皿法 方法：方法：取一定量的供试品药物以无菌生理盐水按比取一定量的供试品药物以无菌生

17、理盐水按比例进行系列稀释，加入定量的稀释液于无菌平皿例进行系列稀释，加入定量的稀释液于无菌平皿中，再加入一定量的已熔化的、温度在中，再加入一定量的已熔化的、温度在55 左左右的琼脂培养基混匀，凝固后于右的琼脂培养基混匀，凝固后于37 培养培养2448h,计数平板内菌落数。一般取菌落数在计数平板内菌落数。一般取菌落数在30300之间之间的平板进行计数，然后乘以稀释倍数即的平板进行计数，然后乘以稀释倍数即可得每毫克或每毫升供试药物中的活菌数。可得每毫克或每毫升供试药物中的活菌数。霉菌和酵母菌总数的测定：霉菌和酵母菌总数的测定：是考察供试药物中每克或每毫升所含的活霉是考察供试药物中每克或每毫升所含的

18、活霉菌和酵母菌的总数，以判明检品被真菌污染的程菌和酵母菌的总数，以判明检品被真菌污染的程度。度。测定方法基本同细菌总数的测定方法。测定方法基本同细菌总数的测定方法。虎红培养基虎红培养基.2528 72h（也可在（也可在24、48、72h分别计数）分别计数）选取菌落在选取菌落在550个范围内，个范围内，乘以稀释倍数即可得单乘以稀释倍数即可得单位重量（或体积）中的活真菌总数位重量（或体积）中的活真菌总数 病原菌检验的原则病原菌检验的原则：病原菌的病原菌的形态和培养特征的观察是鉴别的基形态和培养特征的观察是鉴别的基本要求本要求，对生化反应、血清学反应、动物毒力试，对生化反应、血清学反应、动物毒力试验

19、等项目的要求因菌而异，各有其侧重点验等项目的要求因菌而异，各有其侧重点。一般的检测程序为：一般的检测程序为：药物的准备或预处理药物的准备或预处理增菌培养增菌培养分离培养分离培养纯纯培养培养染色镜检、生化试验、血清学试验、动物染色镜检、生化试验、血清学试验、动物试验等试验等结果判断。结果判断。凡由检品中检出大肠埃希菌时，表明该药品可能凡由检品中检出大肠埃希菌时，表明该药品可能被粪便污染，患者服用后，有被粪便中可能存在的其被粪便污染，患者服用后，有被粪便中可能存在的其他肠道致病菌和寄生虫卵等病原体感染的危险。因此，他肠道致病菌和寄生虫卵等病原体感染的危险。因此，口服药品中不得检出大肠埃希菌。口服药

20、品中不得检出大肠埃希菌。检验要点：检验要点：(1)形态：革兰阴性短小无芽胞杆菌。形态：革兰阴性短小无芽胞杆菌。(2)分离培养：在伊红美兰（分离培养：在伊红美兰（EMB)培养基上分解乳培养基上分解乳 糖，产生紫黑色、有金属光泽的菌落。糖，产生紫黑色、有金属光泽的菌落。(3)生化反应：乳糖发酵试验：产酸产气或产酸不产气；生化反应：乳糖发酵试验：产酸产气或产酸不产气；IMViC试验：试验：+-，注意与产气杆菌相区别。，注意与产气杆菌相区别。1、大肠埃希菌、大肠埃希菌 检验要点：检验要点：(1)形态：形态：革兰阴性短小杆菌。革兰阴性短小杆菌。(2)分离培养：分离培养：SS琼脂上，沙门菌不分解乳糖，产琼

21、脂上，沙门菌不分解乳糖，产生生H2S，菌落无色、透明或半透明，圆形，边缘整，菌落无色、透明或半透明，圆形，边缘整齐，表面光滑湿润，菌落中心呈黑褐色。齐，表面光滑湿润，菌落中心呈黑褐色。EMB平平板上菌落呈无色或粉红色。三糖铁培养基上分解葡板上菌落呈无色或粉红色。三糖铁培养基上分解葡萄糖、产酸产气，不分解乳糖、蔗糖，有动力、产萄糖、产酸产气，不分解乳糖、蔗糖，有动力、产生黑色沉淀。生黑色沉淀。(3)生化反应生化反应：。：。(4)血清学反应血清学反应：用可疑菌作为抗原，沙门菌：用可疑菌作为抗原，沙门菌AF组的多价血清作为抗体进行玻片凝集反应，并以生组的多价血清作为抗体进行玻片凝集反应，并以生理盐水

22、做对照试验。理盐水做对照试验。2、沙门菌、沙门菌 3、铜绿假单胞菌、铜绿假单胞菌是条件致病菌，特别在大面积的烧伤、烫伤患者，眼科疾是条件致病菌，特别在大面积的烧伤、烫伤患者，眼科疾病和其它外伤后，常因感染该菌后病情加重，造成患者伤病和其它外伤后，常因感染该菌后病情加重，造成患者伤处化脓，严重的棵引起败血症，眼角膜溃疡甚至失明。因处化脓，严重的棵引起败血症，眼角膜溃疡甚至失明。因此，一般眼科制剂和外伤用药中不得检出该菌。此，一般眼科制剂和外伤用药中不得检出该菌。检验要点：检验要点：(1)形态形态：革兰阴性短杆菌。：革兰阴性短杆菌。(2)分离培养分离培养：在十六烷三甲基溴化铵琼脂平板上菌落扁：在十

23、六烷三甲基溴化铵琼脂平板上菌落扁平，圆形或无定形，湿润，周边扩散或略有蔓延，灰白色，平，圆形或无定形，湿润，周边扩散或略有蔓延，灰白色，培养基上扩散有水溶性绿色色素。培养基上扩散有水溶性绿色色素。(3)生化反应：生化反应：氧化酶试验阳性，绿脓菌素试验阳性，可氧化酶试验阳性，绿脓菌素试验阳性，可报告检出铜绿假单胞菌。如绿脓菌素阴性，必须明胶液化报告检出铜绿假单胞菌。如绿脓菌素阴性，必须明胶液化试验阳性，硝酸盐还原试验阳性，试验阳性，硝酸盐还原试验阳性，42生长试验阳性，才生长试验阳性，才可报告被检品检出铜绿假单胞菌。可报告被检品检出铜绿假单胞菌。4、金黄色葡萄球菌、金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌是

24、葡萄球菌属中致病力最强的一金黄色葡萄球菌是葡萄球菌属中致病力最强的一种菌，是人类食物中毒症的常见病原体，也常引种菌，是人类食物中毒症的常见病原体，也常引起人体局部化脓性感染，严重者可导致脓毒败血起人体局部化脓性感染，严重者可导致脓毒败血症。目前规定，凡外用药物和眼科制剂不得检出症。目前规定，凡外用药物和眼科制剂不得检出该菌。该菌。检验要点：检验要点：(1)形态：形态：革兰阳性球菌，葡萄状排列。革兰阳性球菌，葡萄状排列。(2)分离培养及生化试验分离培养及生化试验：见下表。：见下表。如分离培养的可疑菌甘露醇和血浆凝固酶试验均如分离培养的可疑菌甘露醇和血浆凝固酶试验均为阳性，则可判断为检出金黄色葡萄

25、球菌。为阳性，则可判断为检出金黄色葡萄球菌。金黄色葡萄球菌的培养及生化特征金黄色葡萄球菌的培养及生化特征 菌落特征生化试验卵黄高盐培养基甘露醇高盐培养基甘露醇血浆凝固酶金黄色,圆形,凸起,边缘整齐,外围有乳浊圈黑色,圆形,凸起,边缘整齐,外围有黄色环+5、破伤风梭菌、破伤风梭菌 以植物的根、茎为原料的药品，常含破伤风梭菌的污染。以植物的根、茎为原料的药品，常含破伤风梭菌的污染。如人体感染此菌后，可引起破伤风，其死亡率达如人体感染此菌后，可引起破伤风，其死亡率达50%。因。因此，用于深部组织、创伤和溃疡面的外用制剂不得检出破此，用于深部组织、创伤和溃疡面的外用制剂不得检出破伤风梭菌伤风梭菌检验要

26、点：检验要点：(1)形态：形态：革兰阳性芽胞梭菌，菌体细长，带芽胞的菌体革兰阳性芽胞梭菌，菌体细长，带芽胞的菌体呈鼓槌状。有周鞭毛，能运动，不形成荚膜。呈鼓槌状。有周鞭毛，能运动，不形成荚膜。(2)分离培养分离培养：葡萄糖庖肉培养基中生长，消化肉渣，使：葡萄糖庖肉培养基中生长，消化肉渣，使肉渣变黑，有特殊臭味。新霉素葡萄糖血平板上菌落蔓延肉渣变黑，有特殊臭味。新霉素葡萄糖血平板上菌落蔓延生长，雾状、细丝状或羽毛状，边缘不整齐，常有生长，雾状、细丝状或羽毛状，边缘不整齐，常有溶血溶血环。环。(3)毒力试验毒力试验：小白鼠皮下注射菌液，：小白鼠皮下注射菌液，648小时观察发病小时观察发病情况。出现

27、典型的破伤风病症的，判定为阳性。情况。出现典型的破伤风病症的，判定为阳性。螨：螨：是一种小形的节肢动物，可污染药物制剂，使之变是一种小形的节肢动物，可污染药物制剂，使之变质失效，并可直接危害人体健康，传染疾病，引起皮炎、质失效，并可直接危害人体健康，传染疾病，引起皮炎、过敏性疾患或消化道、泌尿道和呼吸道疾病。因此，口服过敏性疾患或消化道、泌尿道和呼吸道疾病。因此，口服药及外用药中均不得检出活螨药及外用药中均不得检出活螨。活螨的检查方法一般有活螨的检查方法一般有：直检法、漂浮法和分离法三种，最后都在显微镜下观直检法、漂浮法和分离法三种，最后都在显微镜下观察有否活动的螨，如有，即可判断检品检出活螨

28、。察有否活动的螨，如有，即可判断检品检出活螨。第十二章第十二章 药物的微生物污染与控制药物的微生物污染与控制 第一节药物微生物污染源 一生产环境 1厂房 2设备 3空气 二生产原料 1中草药 2动物性药 三、制药用水 四、生产人员第二节第二节 微生物引发的药物变质微生物引发的药物变质 一、药物的物理性状改变 二、药物的化学成分变化 三、药物变质引发的不良后果第三节第三节 防止药物微生物污染的措施防止药物微生物污染的措施 一、无菌技术应用 二、环境的无菌化1空气洁净技术要求2空气洁净常用技术三、原辅料的无菌处理1原辅料2制药用水3包装材料的灭菌 四、生产人员的无菌操作 1一般生产区 2洁净区 五

29、、中药原料与中成药的灭菌 六、中药原料与中成药的存储与养护（一）影响存储的因素（二）养护措施菌种的选育与保藏菌种的选育与保藏(一)菌种选育 1自然选育:不经过人工诱变处理,利用菌种的自发突变而进行菌种的选育。e.g.BCG 2诱变育种：利用各种诱变剂处理以提高基因的随即突变几率。诱变育种的三个环节：（1）出发菌株的准备：纯种、产量稳定、特性稳定、对诱变剂敏感等（2）突变的诱发：物理诱变剂：电离辐射（X射线、射线等）、紫外线等。化学诱变剂：烷化剂、嵌合剂、碱基类似物等。生物诱变剂：噬菌体（3）突变株的筛选：筛选方法：随机筛选 理性化筛选（四）突变基因的表达：研究最佳发酵条件 3 杂交育种杂交育种

30、（selectionbycrossing)选用已知性状的供体菌和受体菌株作为亲本，通过接合或原生质融合使遗传物质重新组合，再从中分离和筛选出具有新性状的菌株。（1）准性生殖）准性生殖(parasexualreproduction):是真菌的一种导致基因重组的过程，有别于有性生殖。（重组体细胞和一般的营养体细胞没有不同，而且并不产生在特殊的囊器中；染色体交换和染色体减少是不规则的而且不协调的）。准性生殖过程包括准性生殖过程包括异核体的形成、二倍体的形异核体的形成、二倍体的形成以及体细胞交换和单元化成以及体细胞交换和单元化。准性生殖过程中可出现很。准性生殖过程中可出现很多新的基因组合。多新的基因组

31、合。异核体异核体（heterocaryon）：如使一种类型细胞与另一种类型细胞融合，则可以形成一个同时含有二种以上基因型不同的核，但有一个共同的细胞质的细胞，这种细胞称为异核体。（2）原生质体融合）原生质体融合 4 基因工程技术改良菌种基因工程技术改良菌种（二）富集培养与菌种筛选（二）富集培养与菌种筛选 利用不同微生物间生命活动的特点，制定特定的环境使适应于该条件的微生物旺盛生长，从而使其在群落中的数量大大增加，便于人们从初筛菌种中分离到所需的特定微生物。e.g.营养缺陷型（营养缺陷型（auxotroph)菌株菌株：营养缺陷型是指某菌株经突变后,丧失了合成某营养素(如氨基酸、维生素、核苷酸等)

32、的功能,若在培养基上培养必须添加相应的营养素才能生长。原养型营养缺陷型 营养缺陷型菌株的用途：营养缺陷型菌株的用途：A.科学实验中的标记菌株科学实验中的标记菌株 B 发酵业的生产菌株：原理是：发酵业的生产菌株：原理是：该营养缺陷型该营养缺陷型菌株的分支代谢途径中，某一支合成途径发生酶菌株的分支代谢途径中，某一支合成途径发生酶缺陷，解除了协同反馈调节，可以有效的使另一缺陷，解除了协同反馈调节，可以有效的使另一分支途径中的终产物积累。分支途径中的终产物积累。（三）纯种分离（三）纯种分离（四）性能测定（四）性能测定 1 产生菌的性能测定产生菌的性能测定 2 目的药物的测定目的药物的测定三三 微生物与

33、基因工程微生物与基因工程（一）基因工程的基本过程（略）（一）基因工程的基本过程（略）（二）微生物在基因工程中的应用（二）微生物在基因工程中的应用 1 目的基因的主要目的基因的主要供体供体 2 目的基因的重要目的基因的重要载体载体 3 工具酶的来源工具酶的来源 4 克隆载体受体及目的基因表达体系克隆载体受体及目的基因表达体系 5 微生物工程微生物工程（三）基因工程在微生物学基础研究及菌种改造（三）基因工程在微生物学基础研究及菌种改造中的应用中的应用 1 基因工程在微生物基础中研究基因工程在微生物基础中研究 2基因工程在传统工业发酵菌种中的应用基因工程在传统工业发酵菌种中的应用（四）基因工程与微生

34、物制药（四）基因工程与微生物制药 1 基因工程疫苗基因工程疫苗（1）基因重组疫苗：乙肝、莱嫫病、口蹄疫等）基因重组疫苗：乙肝、莱嫫病、口蹄疫等疫苗。疫苗。（2）重组载体疫苗：目前使用最多的载体是痘）重组载体疫苗：目前使用最多的载体是痘苗病毒，已用于甲、乙型肝炎、麻疹、单纯疱疹苗病毒，已用于甲、乙型肝炎、麻疹、单纯疱疹等疫苗的研究。等疫苗的研究。（3）核酸疫苗：已有）核酸疫苗：已有HIV、疟疾、疟疾DNA疫苗在志疫苗在志愿者中试用的报道，但多在研制中。愿者中试用的报道，但多在研制中。（4）转基因植物口服疫苗：优点是易口服、易）转基因植物口服疫苗：优点是易口服、易被儿童接受、价廉等。已在动物中试验

35、成功。被儿童接受、价廉等。已在动物中试验成功。2 重组细胞因子及其可溶性受体（见表重组细胞因子及其可溶性受体（见表11-8，9）（1）重组干扰素）重组干扰素（2）重组白细胞介素）重组白细胞介素（3）肿瘤坏死因子）肿瘤坏死因子（4）可溶性细胞因子受体：）可溶性细胞因子受体：sTNFR,sIL-1,sIL-4,etc.3 基因工程抗体基因工程抗体(1)噬菌体展示技术：噬菌体展示技术：其基本原理是：一种基因表达产物和亲和选择相结合的其基本原理是：一种基因表达产物和亲和选择相结合的技术技术,它以改构的噬菌体为载体它以改构的噬菌体为载体,把待选基因片段定向插把待选基因片段定向插入噬菌体外壳蛋白质基因区入

36、噬菌体外壳蛋白质基因区,使外源多肽或蛋白质表达使外源多肽或蛋白质表达并展示于噬菌体表面并展示于噬菌体表面,进而通过亲和富集法表达有特异进而通过亲和富集法表达有特异肽或蛋白肽或蛋白.（2）基因工程抗体的表达系统）基因工程抗体的表达系统 A.原核细胞表达系统：细菌原核细胞表达系统：细菌 B.真核细胞表达系统：昆虫、酵母、哺乳动物真核细胞表达系统：昆虫、酵母、哺乳动物细胞等。细胞等。本节重点习题本节重点习题:1、MIC与与MBC的概念的概念2、常用的体外抑菌试验有哪些？、常用的体外抑菌试验有哪些？3、体外抗菌试验的影响因素有哪些？、体外抗菌试验的影响因素有哪些？4、口服药及外用药的微生物学检查的、口服药及外用药的微生物学检查的 项目有哪些？项目有哪些？