NDM1分子生物学检测方法课件.ppt

1、产NDM-1泛耐药肠杆菌科 细菌感染诊疗指南 实验室检测方法解读徐英春 北京协和医院 393552NDM-1 的检测方法pNDM-1，即新德里金属-内酰胺酶-1型，是由细菌质粒上携带的blaNDM-1基因编码的。目前，国际上已有十余篇关于NDM-1的研究性文章或相关部门报告发表。p 由blaNDM-1编码产生的碳青霉烯酶及因此产生的对碳青霉烯类耐药性可以通过现有推荐使用的表型鉴定方法准确、可靠的鉴定出来11 US CDC.MMWR Morb Mortal Wkly Rep.2010 Jun 25;59(24):750.2 Yong D et al.Antimicrob Agents Chemo

2、ther.2009 Dec;53(12):5046-54.CLSI M100-S20及CLSI M100-S20-U中碳青霉烯类的折点 抗菌药物纸片扩散法(mm)稀释法(mg/L)M100-S20M100-S20-UM100-S20M100-S20-US RS RS RS R多利培南-23 19-1 4厄他培南19 1523 192 80.25 1亚胺培南16 1323 194 16 1 4美罗培南16 1323 194 16 1 4（一）表型筛查试验 o纸片扩散法：n美罗培南（10ug）或亚胺培南（10ug）：o抑菌圈直径22mmo肉汤稀释法或Etest法n美罗培南或亚胺培南:MIC2ug/

3、mln亚胺培南适合于大肠埃希菌，克雷伯菌属，沙门菌属，肠杆菌属o变形杆菌属、普罗威登斯菌属和摩根菌属对亚胺培南敏感性下降是由产碳青霉烯酶外的其他机制引起，因此对这些菌株尚未建立用亚胺培南MIC法进行筛选和确认碳青霉烯酶，并且亚胺培南纸片法对所有肠杆菌科碳青霉烯酶的筛查效果都不好 1 Yong D et al.Antimicrob Agents Chemother.2009 Dec;53(12):5046-54.2 Kumarasamy KK et al.Lancet Infect Dis.2010 Sep;10(9):597-602.（二）表型确证试验o 纸片扩散法：o Etest法：o 双纸

4、片协同法：o 改良霍奇试验改良霍奇试验(modified Hodge test)(modified Hodge test)o 自动化鉴定与药敏仪器自动化鉴定与药敏仪器1 Yong D et al.Antimicrob Agents Chemother.2009 Dec;53(12):5046-54.2 Kumarasamy KK et al.Lancet Infect Dis.2010 Sep;10(9):597-602.（二）表型确证试验o 纸片扩散法：亚胺培南(10ug)/亚胺培南(10ug)+EDTA(500mM 10ul)复合纸片n结果判读：复合纸片比单药纸片抑菌环直径增大5mm图：图

5、：复合纸片法判定金属-内酰胺酶示意图(左纸片：亚胺培南/EDTA,右纸片：亚胺培南)1 Yong D et al.J Clin Microbiol.2002 Oct;40(10):3798-801.（二）表型确证试验Etest法：Etest MBL(IP/IPI、MP/MPI)结果判读：单药与复合制剂的MIC比值8图图：Etest MBL(IP/IPI)1 http:/www.biomerieux- MBL 试验示意图(亚胺培南/亚胺培南+抑制剂EDTA)1 Lee K et al.J Clin Microbiol.2005 Feb;43(2):942-4.（二）表型确证试验o 双纸片协同法：亚胺培南(10ug)、EDTA(0.5M x 10 l约0.5mg/片)，间距10mm(0.5McF）图：图：亚胺培南-EDTA双纸片协同试验示意图(图中菌种为铜绿假单胞菌)1 Lee K et al.J Clin Microbiol.J Clin Microbiol.2003 Oct;41(10):4623-9.（二）表型确证试验 改良霍奇试验改良霍奇试验(modified Hodge test)（二）表型确证试验 自动化鉴定药敏仪器自动化鉴定药敏仪器 BD凤凰凤凰100 Walkway MicroScan VITEK2 谢谢！