6第六章外源化学物的一般毒性作用解读课件.ppt

1、1/30/20231 第六章第六章 一般毒性作用一般毒性作用第六章、一般毒性作用&1 概述概述&2 急性毒性作急性毒性作用用&3 局部毒性作用局部毒性作用&4 短期、短期、亚慢性和慢性毒性作用亚慢性和慢性毒性作用 掌握一般毒性作用的概念、实验目的掌握一般毒性作用的概念、实验目的 熟悉一般毒性试验方法要点熟悉一般毒性试验方法要点1/30/20233 急性毒作用：概念、试验目的、试验方法急性毒作用：概念、试验目的、试验方法的要点、分级和评价的要点、分级和评价 局部刺激：试验目的、试验类型局部刺激：试验目的、试验类型 短期、亚慢性和慢性毒性作用：概述、研短期、亚慢性和慢性毒性作用：概述、研究方法、结

2、果评价究方法、结果评价毒性作毒性作用用一般毒性作用一般毒性作用-基础毒性基础毒性（急性毒性、重复剂量毒性、亚慢性毒（急性毒性、重复剂量毒性、亚慢性毒性、慢性毒性）性、慢性毒性）特殊毒性作用特殊毒性作用（致突变作用、致癌（致突变作用、致癌作用、致畸作用、生殖发育毒性）作用、致畸作用、生殖发育毒性）第一节、概述第一节、概述基本概念基本概念 一般毒性作用一般毒性作用(general toxicity)(general toxicity)，又称基础毒性，又称基础毒性(basic toxicity)(basic toxicity)，是指外源化学物在一定剂量、一定接，是指外源化学物在一定剂量、一定接触时间

3、和接触方式下对试验动物产生的触时间和接触方式下对试验动物产生的综合毒效应综合毒效应。根据接触毒物的时间长短，可分为：根据接触毒物的时间长短，可分为：急性毒性急性毒性 急性毒性实验急性毒性实验 亚急性毒性（亚急性毒性（重复剂量毒性重复剂量毒性）重复剂量毒性重复剂量毒性实验实验 亚慢性毒性亚慢性毒性 亚慢性毒性实验亚慢性毒性实验 慢性毒性慢性毒性 慢性毒性实验慢性毒性实验重要一般毒性试验项目一般毒性试验项目一般毒性测试一般毒性测试污染物理化特性污染物理化特性了解毒性大小和特征了解毒性大小和特征确定阈和阈下剂量确定阈和阈下剂量了解对机体毒作用了解对机体毒作用靶点和指标靶点和指标急性毒性试验急性毒性试

4、验亚慢性毒性试验亚慢性毒性试验慢性毒性试验慢性毒性试验重复剂量毒重复剂量毒性试验性试验致死试验致死试验非致死试验非致死试验3个月及以内个月及以内3-6个月个月6个月至终身个月至终身一般毒性评价一般毒性评价n一般毒性评价一般毒性评价的主要目的：的主要目的：确定受试物毒作用表现和性质确定受试物毒作用表现和性质确定受试物毒作用的剂量确定受试物毒作用的剂量-反应关系反应关系确定毒作用的靶器官确定毒作用的靶器官确定损害的可逆性确定损害的可逆性n一般毒性评价一般毒性评价：(evaluation for general(evaluation for general toxicity)toxicity)按接触

5、化学毒物时间长短按接触化学毒物时间长短而而进行哺乳动进行哺乳动物试验以观察毒效应、评价化学毒物综合毒性的物试验以观察毒效应、评价化学毒物综合毒性的试验，根据试验，根据试验结果对化学毒物的毒性进行评价试验结果对化学毒物的毒性进行评价称为一般毒性评价。称为一般毒性评价。一般毒性评价的意义一般毒性评价的意义1 1是毒理学工作中非常重要的内容；是毒理学工作中非常重要的内容；2 2是化学物毒理学安全性评价和危险度评定是化学物毒理学安全性评价和危险度评定的基础；的基础；3 3对防治化学毒物急、慢性中毒，制订卫生对防治化学毒物急、慢性中毒，制订卫生标准以及管理毒理学的决策方面有重要意义。标准以及管理毒理学的

6、决策方面有重要意义。重要 一、急性毒性和急性毒性试验的目的一、急性毒性和急性毒性试验的目的 二、急性毒性试验方法、要点二、急性毒性试验方法、要点 经典急性毒性试验经典急性毒性试验 急性毒性替代实验急性毒性替代实验 急性毒作用观察急性毒作用观察 三、急性毒性分级三、急性毒性分级1/30/202310第二节 急性毒性作用 急性毒性急性毒性(acute toxicity)(acute toxicity)：是指机体是指机体(人或试人或试验动物验动物)一次接触或一次接触或2424小时内多次接触小时内多次接触化学物后化学物后在在短期短期(最长到最长到1414天天)内所发生的内所发生的毒性效应毒性效应，包，

7、包括一般行为、外观改变、大体形态变化以及死括一般行为、外观改变、大体形态变化以及死亡效应，亡效应，最主要的观察指标是最主要的观察指标是LD50。2424小时多次：国内规定小时多次：国内规定24h24h内一般不超过内一般不超过3 3次。次。1/30/202311重要1.1.急性接触的次数：急性接触的次数：一次或一次或2424小时内多次小时内多次u“一次接触一次接触”是含有时间因素的。是含有时间因素的。经口经口接触和各种接触和各种注射注射接触，接触，“一次接触一次接触”，是指，是指在瞬间将受试化合物输入实验动物的体内；在瞬间将受试化合物输入实验动物的体内；而而经呼吸道经呼吸道吸入与吸入与经皮肤经皮

8、肤接触，接触，“一次接触一次接触”是是指在一个特定期间内实验动物持续地接触受试化指在一个特定期间内实验动物持续地接触受试化合物的过程合物的过程;u“多次多次”是指当化学物是指当化学物毒性很低毒性很低，需要给予动，需要给予动物较大剂量时，可在物较大剂量时，可在2424小时内分多次给予小时内分多次给予(一般不一般不超过超过3 3次次)。2.2.中毒效应出现的时间中毒效应出现的时间:短期内短期内 “一次或一次或2424小时内多次接触小时内多次接触”后后所产生的毒性效应。所产生的毒性效应。观察时间一般为观察时间一般为7 7天天-14-14天天，如有，如有必要可延长至必要可延长至1414天以上。天以上。

9、3.3.中毒效应的强度中毒效应的强度：与亚慢性、慢性中毒相比，与亚慢性、慢性中毒相比，一般一般行为、外观、大体形态的改变十行为、外观、大体形态的改变十分明显，中毒症状严重，常常发分明显，中毒症状严重，常常发生死亡。生死亡。求出求出LDLD5050以及其它的以及其它的急性毒性参数急性毒性参数，了解，了解急性毒作用强度。急性毒作用强度。通过观察动物中毒表现和死亡的情况，初通过观察动物中毒表现和死亡的情况，初步评价受试物对动物的毒性和对人体产生步评价受试物对动物的毒性和对人体产生损害的危险性大小、毒效应特征、靶器官损害的危险性大小、毒效应特征、靶器官和和剂量剂量反应关系反应关系等急性中毒资料。等急性

10、中毒资料。为为亚慢性、慢性亚慢性、慢性毒性作用试验的染毒剂量毒性作用试验的染毒剂量设计提供参考依据。设计提供参考依据。为毒理学为毒理学机制机制研究提供初步线索。研究提供初步线索。1/30/202314急性毒性急性毒性试验的目的试验的目的:重要 常用的急性毒性参数：常用的急性毒性参数：LD50/LC50急性毒作用带（急性毒作用带（Zac=LD50/Limac）LD100100/LD0101(或或LC100100LC0101)剂量剂量反应曲线斜率反应曲线斜率 1/30/202315（一）（一）LDLD5050 (或或LCLC5050)：是急性毒性评价中：是急性毒性评价中重要的参数，是比较不同化学毒

11、物急性毒重要的参数，是比较不同化学毒物急性毒性的重要基础。性的重要基础。局限：局限：LDLD5050(或或LCLC5050)的测定受许多因素的测定受许多因素的影响；不能反映化学毒物致死作用的中的影响；不能反映化学毒物致死作用的中毒特征；毒特征；LDLD5050波动性很大。波动性很大。（二）其他指标（二）其他指标 1.1.急性毒作用带急性毒作用带 （Zac=LDZac=LD5050/Lim/Limacac）：）：可反应可反应急性阈剂量急性阈剂量距离距离LDLD5050的宽窄，即表示的宽窄，即表示引起实验动物的死亡剂量与最低毒作用剂量之间引起实验动物的死亡剂量与最低毒作用剂量之间剂量范围的宽窄。其

12、越剂量范围的宽窄。其越大大，表示化学物引起急性，表示化学物引起急性死亡的死亡的危险性越小危险性越小。2.LD2.LD8484/LD/LD1616(或或LCLC8484/LC/LC1616)：灵敏性好、重复性强而且容易求。灵敏性好、重复性强而且容易求。3.LD3.LD100100、LDLD0101 4.4.剂量反应曲线斜率剂量反应曲线斜率 死亡率死亡率 死亡率死亡率%（概率（概率 100单位）单位）A B C 50 剂量（剂量（mg/kg）图图 两种化学物的毒性比较两种化学物的毒性比较 LD50只能说明某毒物引起受试动物半数死只能说明某毒物引起受试动物半数死亡的剂量，亡的剂量，不能反应不能反应毒

13、物致死作用的毒物致死作用的中毒中毒特征特征。当两种毒物当两种毒物LD50相等时，要正确评价毒物相等时，要正确评价毒物致死中毒特征，需利用剂量致死中毒特征，需利用剂量-死亡曲线死亡曲线斜率斜率。A和和B的的LD50相等，但剂量相等，但剂量-反应曲线斜率不反应曲线斜率不同，在同，在低浓度剂量下，低浓度剂量下，B毒性大；高剂量下，毒性大；高剂量下，A毒性大。毒性大。C毒性最低毒性最低急性毒性试验可以得到的毒性参数：急性毒性试验可以得到的毒性参数：绝对致死剂量或浓度绝对致死剂量或浓度(LD100或或LCl00)半数致死剂量或浓度半数致死剂量或浓度(LD50或或LC50)最小致死剂量或浓度最小致死剂量或

14、浓度(MLD，LD01或或MLC，LC01)最大耐受剂量或浓度最大耐受剂量或浓度(MTD，LD0或或MTC，LC0)或称为最大非致死剂量或称为最大非致死剂量(MNLD)急性毒性急性毒性LOAEL(观察到有害作用的最低剂量观察到有害作用的最低剂量)急性毒性急性毒性NOAEL(未观察到有害作用的剂量未观察到有害作用的剂量)急性毒性的下限参数急性毒性的下限参数非致死性非致死性急性毒性急性毒性作用为终点作用为终点急性毒性的上限参数急性毒性的上限参数以死亡为终点以死亡为终点通过病理组织学和中毒症状观察等手段测定通过病理组织学和中毒症状观察等手段测定 1.1.试验动物试验动物的选择原则的选择原则化学毒物的

15、化学毒物的代谢和毒效应表现代谢和毒效应表现与与人的反应尽可能一致的试验动物。人的反应尽可能一致的试验动物。动物易于获得动物易于获得品系纯化品系纯化价格较低和易于饲养等条件。价格较低和易于饲养等条件。检疫检疫1/30/202321(一一)经典的急性毒性试验经典的急性毒性试验 1 1）试验动物的）试验动物的种属和品系种属和品系最好用两最好用两个个种属的动物种属的动物啮齿类（为主）啮齿类（为主）:小鼠、大鼠、豚鼠或家兔小鼠、大鼠、豚鼠或家兔非啮齿类：非啮齿类：狗或猴狗或猴。急性急性皮肤皮肤毒性试验：成年大鼠、豚鼠或家兔，毒性试验：成年大鼠、豚鼠或家兔，优先考虑白色家兔。优先考虑白色家兔。急性急性吸入

16、和经口吸入和经口急性毒性试验：大鼠（优急性毒性试验：大鼠（优先）、小鼠先）、小鼠1/30/202322经典的急性毒性试验经典的急性毒性试验 2 2）试验动物的）试验动物的年龄和体重年龄和体重：急性试验动物不宜过老或过幼，通常急性试验动物不宜过老或过幼，通常未曾交未曾交配和受孕的刚成年动物配和受孕的刚成年动物：大鼠大鼠180180240g240g、小、小鼠鼠181825g25g、家兔、家兔2 22.5kg2.5kg、豚鼠、豚鼠200200250g250g、BeagleBeagle犬犬4-6kg4-6kg、杂种犬、杂种犬8-15kg8-15kg。（。（年龄与体年龄与体重一般是呈正比关系，因此常根据

17、体重来推算重一般是呈正比关系，因此常根据体重来推算其年龄其年龄）同一批试验动物同一批试验动物体重变异范围体重变异范围不应超过该批不应超过该批动物动物平均体重的平均体重的2020。1/30/202323经典的急性毒性试验经典的急性毒性试验 3 3）试验动物的）试验动物的性别性别：一般一般急性毒性试验对动物性别要求为急性毒性试验对动物性别要求为雌雄各半雌雄各半。如果在预试验时发现化学毒物如果在预试验时发现化学毒物(如农药如农药)对雌、对雌、雄动物毒效应的敏感性有明显差异，则应单独雄动物毒效应的敏感性有明显差异，则应单独分别求出雌性与雄性动物各自的分别求出雌性与雄性动物各自的LDLD5050。如果试

18、验是为致畸试验作准备，也可仅作雌性如果试验是为致畸试验作准备，也可仅作雌性动物的动物的LDLD5050测试。测试。1/30/202324经典的急性毒性试验经典的急性毒性试验 4）动物数量与随机分组：）动物数量与随机分组：至少至少3 3个剂量组，一般个剂量组，一般5-75-7剂量组剂量组 大、小鼠等大、小鼠等小动物小动物 每组每组10只只 狗等狗等大动物大动物 每组每组6只只 分组原则分组原则随机化随机化原则原则 5）禁食：）禁食：经消化道染毒（如灌胃）时，要求试验前对动物禁食经消化道染毒（如灌胃）时，要求试验前对动物禁食 大鼠、小鼠大鼠、小鼠隔夜进食；染毒后禁食隔夜进食；染毒后禁食4h 大动物

19、大动物每日上午喂食前染毒每日上午喂食前染毒 染毒后继续禁食染毒后继续禁食24h，但在，但在禁食时要保障饮水禁食时要保障饮水。6）实验动物的预检：）实验动物的预检：选择健康动物选择健康动物 12周的检疫期，周的检疫期，动物在实验前需饲养观察动物在实验前需饲养观察3-5d3-5d。25经典的急性毒性试验经典的急性毒性试验 2.试验动物的饲养环境试验动物的饲养环境 恒定的温度：恒定的温度：223 湿度：湿度：3070%照度：昼夜各半照度：昼夜各半 饲料合格、饮水合格、垫料合格饲料合格、饮水合格、垫料合格1/30/2023263.受试物及处理 检索与检索与受试物受试物化学结构和理化性质相似的化学物毒性

20、化学结构和理化性质相似的化学物毒性资料资料 一次备齐全部实验用量一次备齐全部实验用量 应以同一批号为宜应以同一批号为宜 受试物成分和配方稳定不变受试物成分和配方稳定不变 急性毒性试验受试物配制的急性毒性试验受试物配制的常用剂型常用剂型：水溶液、混悬液、油溶液。水溶液、混悬液、油溶液。水溶性受试物的溶剂通常用蒸馏水或去离子水水溶性受试物的溶剂通常用蒸馏水或去离子水 注射等胃肠道外染毒需用生理盐水，保持与体内渗透压一致注射等胃肠道外染毒需用生理盐水，保持与体内渗透压一致 水不溶性受试物应溶于或悬浮于有机溶剂中，常用水不溶性受试物应溶于或悬浮于有机溶剂中，常用0.5%0.5%羟甲羟甲基纤维素钠，基纤

21、维素钠，10%10%阿拉伯乳胶，天然植物油阿拉伯乳胶，天然植物油 受试物一般应临用新鲜配制受试物一般应临用新鲜配制4.染毒途径的选择染毒途径的选择:染毒途径（染毒途径（exposure routesexposure routes）的选择需）的选择需考虑：考虑：模拟人在生活和生产环境中实际模拟人在生活和生产环境中实际接触受试物的途径和方式接触受试物的途径和方式；有利于不同有利于不同化学物之间急性毒性大小的比较化学物之间急性毒性大小的比较；受试受试物的性质和用途；各种受试物毒性评价物的性质和用途；各种受试物毒性评价程序的要求等。程序的要求等。n最常用的染毒途径为最常用的染毒途径为经口经口(胃肠道胃

22、肠道)经呼吸道经呼吸道经皮经皮注射途径注射途径 1/30/202328经口经口(胃肠道胃肠道)接触接触:（oral exposureoral exposure）灌胃法、喂饲法、吞咽胶囊灌胃法、喂饲法、吞咽胶囊 n 灌胃灌胃:（准确控制剂量，最常用，（准确控制剂量，最常用，等容量灌胃法等容量灌胃法）小鼠小鼠0.20.2 1.0ml/1.0ml/只或只或0.10.1 0.0.2 2（0.40.4）ml/10gml/10g 大鼠不超过大鼠不超过5ml/5ml/只或只或1.0(2.0)ml/100g1.0(2.0)ml/100g体重体重 家兔不超过家兔不超过10ml/2kg10ml/2kg 狗不超过狗

23、不超过50ml/10kg50ml/10kg 1/30/202329染毒途径的选择染毒途径的选择:经呼吸道接触经呼吸道接触（inhalation）:研究生产条件下以气体、蒸气、粉尘、烟、雾等研究生产条件下以气体、蒸气、粉尘、烟、雾等形式存在的化学毒物和评价环境空气污染物以及形式存在的化学毒物和评价环境空气污染物以及吸入给药途径的药物。吸入给药途径的药物。n静式吸入静式吸入n动式吸入动式吸入 n气管注入法气管注入法染毒途径的选择染毒途径的选择:n静式吸入：静式吸入：将一定量的易挥发的静态化学毒物将一定量的易挥发的静态化学毒物或一定体积的气态化学毒物加入到具有一定体积或一定体积的气态化学毒物加入到具

24、有一定体积的密闭容器内，使实验动物吸入染毒。的密闭容器内，使实验动物吸入染毒。优点：优点：设备简单、操作方便、受试物消耗量设备简单、操作方便、受试物消耗量少，尤其适合于小鼠接触易挥发的液态或气态化少，尤其适合于小鼠接触易挥发的液态或气态化学物的急性毒性试验。学物的急性毒性试验。缺点：缺点：随时间延长氧含量下降、随时间延长氧含量下降、COCO2 2增加；毒增加；毒物浓度不易长期保持稳定，实验动物有经皮吸收物浓度不易长期保持稳定，实验动物有经皮吸收的可能。故一般仅用于急性实验。的可能。故一般仅用于急性实验。经呼吸道接触经呼吸道接触 n动式吸入：动式吸入：染毒柜装备有补充新鲜空气和排出含化学染毒柜装

25、备有补充新鲜空气和排出含化学毒物之空气的动力系统以及随时补充化学毒物毒物之空气的动力系统以及随时补充化学毒物的配气系统。的配气系统。优点：优点：染毒过程中受试物浓度和氧分压较染毒过程中受试物浓度和氧分压较稳定。稳定。缺点：缺点：设备昂贵，操作复杂，耗费毒物量设备昂贵，操作复杂，耗费毒物量较多。较多。经呼吸道接触经呼吸道接触 经呼吸道接触经呼吸道接触 n气管注入法：气管注入法：经喉插入法、气管穿刺法。经喉插入法、气管穿刺法。优点：优点：1 1、染毒剂量较准确，用毒物量少；染毒剂量较准确，用毒物量少；2 2、形成中毒模型速度快。形成中毒模型速度快。缺点：缺点：1 1、操作易造成损伤，引起动物死亡；

26、操作易造成损伤，引起动物死亡；2 2、不能发挥上呼吸道的防卫作用，与自然不能发挥上呼吸道的防卫作用，与自然吸入有差异。吸入有差异。染毒途径的选择染毒途径的选择:经皮肤染毒经皮肤染毒（dermal exposuredermal exposure）：）：液态、固态的化学毒物液态、固态的化学毒物。首选大鼠，也可选用家兔和豚鼠。首选大鼠，也可选用家兔和豚鼠。试验开始前试验开始前24h24h，采用动物脊柱两侧皮肤，采用动物脊柱两侧皮肤脱毛脱毛（剪毛法、剃毛法、化学脱毛法）。（剪毛法、剃毛法、化学脱毛法）。局部涂敷局部涂敷受试化学毒物并以塑料薄膜或玻璃受试化学毒物并以塑料薄膜或玻璃纸和两层纱布覆盖，再用无

27、刺激性胶布或绷带加纸和两层纱布覆盖，再用无刺激性胶布或绷带加以固定。以固定。24h24h后取下固定物和覆盖物，用温水或适后取下固定物和覆盖物，用温水或适当的溶剂洗去皮肤上残留的受试样品。当的溶剂洗去皮肤上残留的受试样品。经注射途径染毒经注射途径染毒（ingestioningestion）：）：腹腔注射、静脉注射、肌内注射、皮下注射。腹腔注射、静脉注射、肌内注射、皮下注射。5.染毒剂量与分组染毒剂量与分组:了解化学毒物的理化特性，纯度，杂质成分与含量等。了解化学毒物的理化特性，纯度，杂质成分与含量等。有相关毒性资料可供参考者有相关毒性资料可供参考者 没有毒性资料可供查阅者没有毒性资料可供查阅者

28、限量试验限量试验 预试验预试验 找出大致致死范围找出大致致死范围 (即死亡率从即死亡率从0-10%0-10%至至90-100%)90-100%)设计正式试验的剂量和分组设计正式试验的剂量和分组 近似化学物的近似化学物的LDLD5050值作预期毒性的中值作预期毒性的中间剂量，上下各设间剂量，上下各设计计1-21-2个剂量组进行个剂量组进行预实验预实验LD10、LD90LD0、LD100 1 1查阅文献查阅文献 了解化学毒物的结构式、分子量、常温常压了解化学毒物的结构式、分子量、常温常压下的状态、熔点、沸点、密度、闪点、挥发度、下的状态、熔点、沸点、密度、闪点、挥发度、蒸气压、水溶性和脂溶性等理化

29、特性，生产批蒸气压、水溶性和脂溶性等理化特性，生产批号及纯度，杂质成分与含量等。号及纯度，杂质成分与含量等。确定使用哪一种计算方法求确定使用哪一种计算方法求LDLD5050，然后再设，然后再设计剂量分组。计剂量分组。LDLD5050的计算方法的计算方法常用常用寇氏法、概寇氏法、概率单位法、霍恩法等。率单位法、霍恩法等。找出与受试化学毒物结构与理化性质近似的找出与受试化学毒物结构与理化性质近似的化学物的毒性资料，并以文献资料中相同的动化学物的毒性资料，并以文献资料中相同的动物物种系种系和相同和相同接触途径接触途径所测得的所测得的LDLD5050(LC(LC5050)值值作为受试化学物的作为受试化

30、学物的预期毒性中值预期毒性中值。1/30/202336染毒剂量与分组染毒剂量与分组:2 2预试验预试验 设定以此预期值作为待测化学物的中间剂量组，并在设定以此预期值作为待测化学物的中间剂量组，并在该剂量的上下各设计该剂量的上下各设计l l一一2 2个剂量组作为预试验剂量。个剂量组作为预试验剂量。根据确定的剂量组进行染毒。根据确定的剂量组进行染毒。如采用如采用1010，100100，10001000mg/kgmg/kg的剂量的剂量 LDLD5050可能在可能在100-1000mg/kg 100-1000mg/kg 不见死亡不见死亡 全部死亡全部死亡 根据预试验的死亡资料确定组距。根据预试验的死亡

31、资料确定组距。可根据以下公式可根据以下公式计算计算出出剂量分组：剂量分组：i=(lgLDi=(lgLD9090-lgLD-lgLD1010)(n-1)(n-1)或：或：i=(lgLDi=(lgLD100100-lgLD-lgLD0 0)(n-1)(n-1)i i为组距为组距(相邻的两个剂量组对数剂量之差相邻的两个剂量组对数剂量之差)；n n为设计的剂量组数。为设计的剂量组数。1/30/2023373 3正式试验正式试验 一般根据试验设计所选用的一般根据试验设计所选用的LDLD5050计算方法来确定计算方法来确定组数组数。例如。例如几率单位法几率单位法、寇氏法寇氏法一般设一般设6 61010个个

32、剂量组；剂量组；霍恩法霍恩法固定设固定设4 4个个剂量组。求得剂量组。求得i i值值后以最低剂量组后以最低剂量组(LD(LD0 0或或LDLD1010)的对数剂量加上一的对数剂量加上一个个i i值，即是第二个剂量组的对数剂量，依此类值，即是第二个剂量组的对数剂量，依此类推直至最高剂量组，查各自的反对数即得出各组推直至最高剂量组，查各自的反对数即得出各组剂量的真实值。剂量的真实值。1 2 3 4 5 6 1 2 3 4 5 6 LgLD0 i+LgLD0 2i+LgLD0 3i+LgLD0 4i+LgLD0 1/30/202338在实际工作中，除有特殊规定外，均不设立对照组。在实际工作中，除有特

33、殊规定外，均不设立对照组。6.试验周期与毒效应观察试验周期与毒效应观察毒效应（毒作用）观察：毒效应（毒作用）观察：1）.中毒症状和发生过程中毒症状和发生过程 观察动物出现的中毒症状、发生的时间、症状发观察动物出现的中毒症状、发生的时间、症状发展的经过、死亡前的特征以及死亡时间等。展的经过、死亡前的特征以及死亡时间等。2）.体重体重3 3）.病理检查及其他指标病理检查及其他指标:4）.死亡情况和时间分布死亡情况和时间分布毒作用观察时间和周期：毒作用观察时间和周期：通常通常14天天在实际工作中，对速杀型化学毒物可以仅计算在实际工作中，对速杀型化学毒物可以仅计算24h内的死亡率，求其内的死亡率，求其

34、LD501/30/202339啮齿类动物急性毒性试验主要的观察项目啮齿类动物急性毒性试验主要的观察项目器官系统器官系统观察项目或中毒后的一般表现观察项目或中毒后的一般表现中枢神经系统中枢神经系统和躯体系统和躯体系统行为：姿态改变、叫声异常。不安、活动增多或少动行为：姿态改变、叫声异常。不安、活动增多或少动动作：痉挛、震颤、运动失调、麻痹、惊厥、强制性动作动作：痉挛、震颤、运动失调、麻痹、惊厥、强制性动作刺激反应：易兴奋，对外界刺激反应过敏或迟钝刺激反应：易兴奋，对外界刺激反应过敏或迟钝肌肉张力：强直，迟缓肌肉张力：强直，迟缓血液循环系统血液循环系统心动过速或过缓、心律不齐、血管收缩或舒张心动过

35、速或过缓、心律不齐、血管收缩或舒张呼吸系统呼吸系统呼吸深缓、呼吸过速、喘息、张口和腹式呼吸呼吸深缓、呼吸过速、喘息、张口和腹式呼吸胃肠系统胃肠系统恶心、呕吐、腹泻；便血、尿血、大小便失禁，便秘；粪便恶心、呕吐、腹泻；便血、尿血、大小便失禁，便秘；粪便不成型，呈黑色或灰色不成型，呈黑色或灰色生殖泌尿系统生殖泌尿系统阴户、乳腺膨胀、分泌物增多；阴茎突出、遗精；会阴部污阴户、乳腺膨胀、分泌物增多；阴茎突出、遗精；会阴部污秽有分泌物秽有分泌物眼眼 瞳孔放大或缩小，瞳孔对光反射；流泪，上眼脸下垂；眼球瞳孔放大或缩小，瞳孔对光反射；流泪，上眼脸下垂；眼球突出、充血，眼球震颤；角膜浑浊突出、充血，眼球震颤；

36、角膜浑浊 皮肤和被毛皮肤和被毛 出现红斑、皮疹、水肿、坏死、脱毛、竖毛、松驰出现红斑、皮疹、水肿、坏死、脱毛、竖毛、松驰粘膜粘膜 结膜或口腔中分泌物增多，充血、苍白、黄疸结膜或口腔中分泌物增多，充血、苍白、黄疸其它其它 直肠或脚爪部皮肤温度降低或升高；姿势异常，消瘦等直肠或脚爪部皮肤温度降低或升高；姿势异常，消瘦等 1）.中毒症状中毒症状 2）体重）体重 体重可以反映动物中毒后的整体变化。体重可以反映动物中毒后的整体变化。体重改变的原因体重改变的原因很多，很多，若化学毒物刺激或损伤消化道可出现试验动物饮若化学毒物刺激或损伤消化道可出现试验动物饮食减少甚至拒食，表现为体重减轻。食减少甚至拒食，表

37、现为体重减轻。若化学毒物引起腹泻，将影响食物吸收和利用，若化学毒物引起腹泻，将影响食物吸收和利用，体重也会减轻。体重也会减轻。化学毒物影响水的摄取或肾功能急性损伤，也可化学毒物影响水的摄取或肾功能急性损伤，也可能在体重上反映出来。能在体重上反映出来。所以，对存活动物尤其是对低于所以，对存活动物尤其是对低于LDLD5050剂量组的存活剂量组的存活动物动物应在观察期应在观察期1414天内称量其体重的变化以便天内称量其体重的变化以便了解受试物引起毒效应的持续时间。了解受试物引起毒效应的持续时间。1/30/202341试验周期与毒效应观察试验周期与毒效应观察:3 3）.病理检查及其他指标病理检查及其他

38、指标:对死亡的动物，均应及时进行大体解剖和病理组织对死亡的动物，均应及时进行大体解剖和病理组织学检查学检查。肉眼观察主要脏器的大体病理变化，如脏。肉眼观察主要脏器的大体病理变化，如脏器大小、外观、色泽的变化，有无充血、出血、水器大小、外观、色泽的变化，有无充血、出血、水肿或其它改变，对有改变的脏器进行取材做组织病肿或其它改变，对有改变的脏器进行取材做组织病理学检查理学检查 对存活动物，在观察期结束时进行大体病理检对存活动物，在观察期结束时进行大体病理检查查必要时做组织病理学检查。根据试验需要可进必要时做组织病理学检查。根据试验需要可进一步扩大观察项目如体温、心电图、脑电图或进一步扩大观察项目如

39、体温、心电图、脑电图或进行某些生化指标测定等。行某些生化指标测定等。1/30/202342试验周期与毒效应观察试验周期与毒效应观察:4）.死亡和死亡时间死亡和死亡时间 重点观察和记录重点观察和记录每只动物死亡的时间，特别是每只动物死亡的时间，特别是最早出现死亡的时间以及各个剂量组动物的死最早出现死亡的时间以及各个剂量组动物的死亡数。亡数。分析中毒死亡时间的规律分析中毒死亡时间的规律也可为深人研究化学也可为深人研究化学物的毒作用机制提供参考。物的毒作用机制提供参考。1/30/202343试验周期与毒效应观察试验周期与毒效应观察:7.经典急性毒性试验的局限性经典急性毒性试验的局限性 1.消耗的动物

40、量大消耗的动物量大 2.获得的信息有限获得的信息有限 3.测得的测得的LD50仅仅是一个近似值仅仅是一个近似值 4.在安全性评价中仅评价动物死亡和简单的在安全性评价中仅评价动物死亡和简单的症状观察是不够的，更需要的是生理学、血症状观察是不够的，更需要的是生理学、血液学及其它化验检查所提供的深入细致的毒液学及其它化验检查所提供的深入细致的毒性信息。性信息。1/30/202344重要重要 各种急性毒性分级标准是以各种急性毒性分级标准是以LDLD5050/LC/LC5050值为基础划分值为基础划分的，以往没有统一标准。的，以往没有统一标准。如如19941994年颁布实施的食品安全性毒理学评价程序年颁

41、布实施的食品安全性毒理学评价程序和方法中提出急性毒性分级的和方法中提出急性毒性分级的六级标准六级标准(表表6-2)6-2)。20032003年联合国世界卫生组织年联合国世界卫生组织(WHO)(WHO)推荐了一个五级推荐了一个五级标准。标准。1/30/202346我国食品毒理急性毒性分级法我国食品毒理急性毒性分级法(1994)急性毒性分级急性毒性分级大鼠经口大鼠经口LD50(mg/kg)大致相当于大致相当于70kg人的致死量人的致死量6级级(极毒极毒)1稍尝稍尝,150001050克克GB15193.3食品安全性毒理学评价程序和方法食品安全性毒理学评价程序和方法急性毒性评价急性毒性评价1/30/

42、202347外源化学物急性毒性分级（外源化学物急性毒性分级（世界卫生组织世界卫生组织 WHO，2003）毒性毒性分级分级大鼠一次经大鼠一次经口口LD50 (mg/kg)6只大鼠吸入只大鼠吸入4小时，死亡小时，死亡24只的浓度只的浓度(ppm)兔经皮兔经皮LD50(/mg/kg)对人可能致死的估计量对人可能致死的估计量g/kg总量总量(g/60kg)剧毒剧毒1105151000急性毒性评价急性毒性评价 WHOWHO于于20032003年公布年公布全球化学品统一分类和标签制全球化学品统一分类和标签制度度（GHSGHS），20052005年修订，年修订，20082008年全面实施。年全面实施。急性毒

43、性评价急性毒性评价急性毒性试验报告急性毒性试验报告 受试样品名称、理化性状、配制方法、所用浓度。受试样品名称、理化性状、配制方法、所用浓度。试验动物的种属、品系和来源。试验动物的种属、品系和来源。所用剂量和动物分组、每组所用动物性别、数量级所用剂量和动物分组、每组所用动物性别、数量级体重范围。体重范围。染毒后动物中毒表现和死亡情况及出现时间，大体染毒后动物中毒表现和死亡情况及出现时间，大体解剖及病理所见。解剖及病理所见。计算计算LDLD50 50 值的方法及其值的方法及其LDLD5050和和95%95%可信限。可信限。结论。结论。“3R“3R原则原则”：替代、减少、优化：替代、减少、优化 OC

44、ED OCED（经济合作和发展组织）推荐（经济合作和发展组织）推荐（20012001年）：年）：固定剂量法固定剂量法 急性毒性分级法急性毒性分级法 上下移动法上下移动法 USEPAUSEPA（美国环境保护局）（美国环境保护局）三种三种+限量试验限量试验（并不算真正的替代法，受试物毒性很（并不算真正的替代法，受试物毒性很低时使用）低时使用）1.固定剂量法固定剂量法（fixed dose procedure）：不以动不以动物死亡作为观察终点，而是利用预先选定的或固定物死亡作为观察终点，而是利用预先选定的或固定的一系列剂量染毒，从而观察化学物的毒性反应来的一系列剂量染毒，从而观察化学物的毒性反应来对

45、化学物的毒性进行分级。对化学物的毒性进行分级。剂量范围5、50、300mg/kg，最高位2000mg/kg。EEC欧共体分级标准为：高毒（LD502000mg/kg）观察终点：观察终点：明显毒性（明显毒性（clear sign on toxicityclear sign on toxicity）：）：明确的明确的毒作用表现，可作为危险度评价的充分依据，预期毒作用表现，可作为危险度评价的充分依据，预期随着染毒剂量的增加可发展为严重的中毒症状直至随着染毒剂量的增加可发展为严重的中毒症状直至死亡。死亡。固定法的实验结果与经典方法相比，一致性为80.2%，使用动物少，大鼠平均14.8只。51急性毒性替

46、代试验急性毒性替代试验预试验：预试验：选择选择5 5、5050、300300和和2000mg/kg 42000mg/kg 4个固定剂量，特殊个固定剂量，特殊情况下可增加情况下可增加1 1个个5000mg/kg5000mg/kg剂量。剂量。采用单性别（一般为雌性）采用单性别（一般为雌性）1 1只只动物动物循序进行，根循序进行，根据受试物的有关资料，从上述剂量中选择据受试物的有关资料，从上述剂量中选择1 1个作为个作为初始剂量；如没有相关资料可参考，可用初始剂量；如没有相关资料可参考，可用300mg/kg300mg/kg作为初始剂量进行预试验。作为初始剂量进行预试验。根据预试验结果选择根据预试验结

47、果选择一个一个能产生能产生明显毒性效应明显毒性效应但不但不引起死亡的剂量进行正式试验。引起死亡的剂量进行正式试验。注：注：A A死亡；死亡；B B明显毒性；明显毒性；C C无毒性无毒性 WHOWHO于于20032003年公布年公布全球化学品统一分类和标签制全球化学品统一分类和标签制度度（GHSGHS），20052005年修订，年修订，20082008年全面实施。年全面实施。急性毒性评价急性毒性评价注：注：A A死亡；死亡；B B明显毒性；明显毒性；C C无毒性无毒性正式试验正式试验 每个剂量组每个剂量组5 5只动物（包括预试验在该水平做过的只动物（包括预试验在该水平做过的动物）。一般只需一个剂

48、量。动物）。一般只需一个剂量。如果正式试验选择的如果正式试验选择的起始剂量未见明显毒性起始剂量未见明显毒性，应接，应接着进行下一个较高剂量的染毒。如正式试验选择的着进行下一个较高剂量的染毒。如正式试验选择的起始剂量出现动物起始剂量出现动物死亡或严重毒性死亡或严重毒性反应时，应从保反应时，应从保护动物免受痛苦出发，选择下一个较低剂量进行。护动物免受痛苦出发，选择下一个较低剂量进行。出现下列情况出现下列情况结束试验结束试验：当出现：当出现明显的毒性明显的毒性反应或反应或已确认不多于一只动物死亡；最高剂量未出现毒性已确认不多于一只动物死亡；最高剂量未出现毒性反应；最低剂量动物出现死亡。反应；最低剂量

49、动物出现死亡。应在确认前一个剂量组的动物存活后，才可进行下应在确认前一个剂量组的动物存活后，才可进行下一个剂量试验。一般两个剂量组试验之间要间隔一个剂量试验。一般两个剂量组试验之间要间隔3 34d4d。如果有相关的资料表明受试物如果有相关的资料表明受试物可能无毒可能无毒，可进行，可进行限量试验。限量试验。染毒剂量为染毒剂量为2000mg/kg2000mg/kg（5000mg/kg5000mg/kg），选择另外），选择另外4 4只动物进行。只动物进行。预试验和正式试验都不出现中毒体征，试验终止。预试验和正式试验都不出现中毒体征，试验终止。结果判定：结果判定：GHSGHS类别。类别。注：注：A A

50、死亡数大于或等于死亡数大于或等于2 2只（只（计量计量=LD=LD5050）；）；B B观察到明显毒观察到明显毒性，大于或等于性，大于或等于1 1只，或者只，或者1 1只死亡只死亡（计量（计量LD=1只动物死亡）WHOWHO于于20032003年公布年公布全球化学品统一分类和标签制全球化学品统一分类和标签制度度（GHSGHS），20052005年修订，年修订，20082008年全面实施。年全面实施。急性毒性评价急性毒性评价 2.急性毒性分级法急性毒性分级法（acute toxic class method）：是基于生物统计法，是基于生物统计法，以死亡为终点以死亡为终点的的分阶段分阶段试验试验法