选择聚丙烯酰胺凝胶浓度参考值课件.ppt
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- 选择 聚丙烯酰胺 凝胶 浓度 参考值 课件
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1、第八章第八章 电泳分离技术电泳分离技术第一节第一节 电泳的基本理论及分类电泳的基本理论及分类 一、原理一、原理(一)概念及原理1、电泳:是指带电粒子在电场中向与其自身带相反电荷的电极移动的现象。2、原理 电泳技术就是利用在电场作用下,由于待分离样品中各种分子带点性质以及分子本身大小、性状等性质的差异,使带电分子产生不同的迁移速度,从而对样品进行分离、鉴定或提纯。迁移率与带电分子所带净电荷成正比,与分子的大小和缓冲液的黏度成反比(二)影响电泳的主要因素 1、大分子的性质 2、电场强度 3、溶液的pH 4、溶液的离子强度 5、电渗 6、温度 7、支持物的影响 二、分类(一)按分离原理分类(一)按分
2、离原理分类 1、区带电泳、区带电泳 2、自由界面电泳、自由界面电泳 3、等速电泳、等速电泳 4、等电聚焦电泳、等电聚焦电泳 1、按有无固体支持物可以分为两类:自由电泳和支持物电泳。(二)按有无固体支持物分类 2、支持物电泳根据所用的支持物不同又可分为纸电泳、醋酸纤维薄膜电泳、琼脂凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)、SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳 第二节 常用电泳分离技术一、聚丙烯酰胺凝胶电泳(一)基本原理1、凝胶的聚合及孔径2、电泳效应 (1)连续性电泳系统的凝胶浓度一致,凝胶中的pH值及离子强度与电泳槽液的相同。(2)不连续电泳系统存在4个不连续性:凝胶层的不连续性;缓冲液离子成分的不连续性
3、;pH值的不连续性;电位梯度的不连续性。4种不连续性,电泳时会产生3种物理效应,即样品的浓缩效应、凝胶的分子筛效应以及电荷效应。(二)影响凝胶聚合的因素 1、试剂质量 2、凝胶浓度 3、温度和氧气的影响(三)聚丙烯酰胺胶体的制备 制胶模制胶模1 梳形样品槽模板 2 长玻璃板(后面)3 短玻璃板(前面)4 U形橡胶框(四)聚丙烯酸胺凝胶电泳的特点与用途 1、电渗作用比较小 2、凝胶孔径可调 3、电泳分辨率高 4、化学稳定性和热稳定性好 5、机械强度高二、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(一)基本原理 在聚丙烯酰胺凝胶中加入阴离子去污剂十二烷基硫酸钠(SDS),不影响凝胶的形成,不影响蛋白质的电泳迁移率
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