医科大学精品课件：实验五-胰岛素、肾上腺素对血糖浓度的影响.ppt

1、实验五实验五. 胰岛素和肾上腺素胰岛素和肾上腺素 对血糖浓度的影响对血糖浓度的影响 ( (一一) )基本原理基本原理激素对血糖浓度的调节 激素是调节机体血糖浓度的重要因素。激素是调节机体血糖浓度的重要因素。 胰岛素能促进肝脏及肌肉合成糖原，同时又可加强糖胰岛素能促进肝脏及肌肉合成糖原，同时又可加强糖 的氧化利用，故可降低血糖；的氧化利用，故可降低血糖； 肾上腺素能促进糖原分解而升高血糖。肾上腺素能促进糖原分解而升高血糖。 实验五实验五. 胰岛素、肾上腺素胰岛素、肾上腺素 对血糖浓度的影响对血糖浓度的影响 ( (一一) )基本原理基本原理葡萄糖氧化酶法(GOD)测血糖浓度 样品中的葡萄糖通过葡萄

2、糖氧化酶（样品中的葡萄糖通过葡萄糖氧化酶（GOD）及过氧化物酶）及过氧化物酶 （POD）催化的偶联反应生成红色醌类化合物。通过标准管）催化的偶联反应生成红色醌类化合物。通过标准管 法比色即可测定样品（血清）中葡萄糖的含量。法比色即可测定样品（血清）中葡萄糖的含量。(P18) ( (一一) )基本原理基本原理实验设计 实验五实验五. 胰岛素、肾上腺素胰岛素、肾上腺素 对血糖浓度的影响对血糖浓度的影响 本实验给两只小鼠分别注射胰岛素或肾上腺素，本实验给两只小鼠分别注射胰岛素或肾上腺素， 取注射前、后鼠尾静脉血，分别测定血糖含量，观察取注射前、后鼠尾静脉血，分别测定血糖含量，观察 注射前后血糖浓度变

3、化。从而了解胰岛素和肾上腺素注射前后血糖浓度变化。从而了解胰岛素和肾上腺素 对血糖浓度的影响。对血糖浓度的影响。 【步骤步骤1】注射动物注射动物取血取血血浆的制备血浆的制备 每实验组取两只小鼠，分别将其套入红、蓝两色套筒中，每实验组取两只小鼠，分别将其套入红、蓝两色套筒中， 尾部伸出。尾部伸出。红色套筒中的小鼠用于胰岛素实验红色套筒中的小鼠用于胰岛素实验，而蓝色套筒而蓝色套筒 中的小鼠用于肾上腺素实验中的小鼠用于肾上腺素实验； 取两只取两只EP管，在管盖处做标记（如：胰岛素管，在管盖处做标记（如：胰岛素In-/肾上腺素肾上腺素 Ad-），每管加入），每管加入5ul肝素肝素(0.5-10ul枪枪

4、)抗凝剂，用于小鼠取血；抗凝剂，用于小鼠取血； 每只小鼠尾部每只小鼠尾部2cm处剪刀断尾，用移液枪（处剪刀断尾，用移液枪（20-200ul）吸取）吸取 小鼠断尾处的血液，移入小鼠断尾处的血液，移入EP管中，并轻柔弹击管中，并轻柔弹击EP管壁混匀。管壁混匀。 每只小鼠取血量在每只小鼠取血量在100ul以上。以上。 取血后在小鼠断尾处涂抹少量凡士林止血。取血后在小鼠断尾处涂抹少量凡士林止血。 将上述抗凝全血将上述抗凝全血In-及及Ad-放放4冰箱冷藏备用。（可室温）冰箱冷藏备用。（可室温） 1 1、注射前取血：、注射前取血： 【步骤步骤1】注射动物注射动物取血取血血浆的制备血浆的制备 正确抓取小鼠

5、，腹腔注射正确抓取小鼠，腹腔注射1.0ml的胰岛素及的胰岛素及1.0ml的肾上的肾上 腺素。腺素。 注射后将小鼠放回套管中，尾部露出。注射后将小鼠放回套管中，尾部露出。(可置入鼠笼内可置入鼠笼内) 2 2、注射动物：、注射动物： 3 3、注射后取血：、注射后取血：（取血时间（取血时间：肾上腺素：肾上腺素30min30min，胰岛素胰岛素40min40min） 取两只取两只EP管，在管盖处做标记（管，在管盖处做标记（In+/Ad+），每管加），每管加 入入5ul肝素抗凝剂备用；肝素抗凝剂备用； 按前述方法再次断尾取血。每只小鼠取血量在按前述方法再次断尾取血。每只小鼠取血量在100ul以上。以上。

6、 取血后颈椎脱臼法处死小鼠，放入有塑料袋的小红桶内。取血后颈椎脱臼法处死小鼠，放入有塑料袋的小红桶内。 【步骤步骤1】注射动物注射动物取血取血血浆的制备血浆的制备 4 4、血浆的制备：、血浆的制备： 将上述抗凝全血（将上述抗凝全血（In-、In+/Ad-、Ad+），），3000r/min离离 心心5min，小心收集上清，即血浆。，小心收集上清，即血浆。 注意：血浆制备过程应防止溶血，移动或操作全血尽量避注意：血浆制备过程应防止溶血，移动或操作全血尽量避 免剧烈震荡。免剧烈震荡。 血浆或血清血浆或血清 （l） 葡萄糖标准葡萄糖标准 液液（l） 磷酸盐缓磷酸盐缓 冲液冲液（l） 酶酚混合试酶酚混合

7、试 剂剂（ml） 试剂试剂 取小试管取小试管6只，分别标号，按下表配制溶液：只，分别标号，按下表配制溶液： 20 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 注射胰注射胰 岛素前岛素前 测定管测定管 注射胰注射胰 岛素后岛素后 注射肾上注射肾上 腺素前腺素前 注射肾上注射肾上 腺素后腺素后 【步骤步骤2】血糖浓度的测定血糖浓度的测定 20 20 20 20 20 混匀后混匀后37水浴水浴15min，冷却后以，冷却后以505nm比色，空白管调零，记录各管吸光度。比色，空白管调零，记录各管吸光度。 标准管标准管 空白管空白管 原始数据记录原始数据记录 日期，室温，仪器，重要参数日期，室温，仪器

8、，重要参数 实验项目实验项目 【步骤步骤2】血糖浓度的测定血糖浓度的测定 测定管测定管 标准管标准管 管号管号 5 注射胰注射胰 岛素前岛素前 注射胰注射胰 岛素后岛素后 注射肾上注射肾上 腺素前腺素前 注射肾注射肾 上腺素后上腺素后 葡萄糖溶液葡萄糖溶液 A A值值 血糖浓度血糖浓度 1 2 3 4 Cx = Ax As Cs 标准管标准管: As = K Cs L 待测管待测管: Ax = K Cx L 空白管：空白管： 根据根据Lambert-beer定律：定律： 因上述公式缺乏实用性，因上述公式缺乏实用性，在实际操作中，常使待测管体积与标准管体积相等在实际操作中，常使待测管体积与标准管

9、体积相等 (以以X代表测定管含量，代表测定管含量，S代表标准管含量代表标准管含量)则：则： Cx *V = Ax As Cs*V X = Ax As S 稀释液浓度 稀释液浓度 【步骤3】结果计算：标准管法 1 1、计算注射胰岛素或肾上腺素前后血糖的浓度：、计算注射胰岛素或肾上腺素前后血糖的浓度： 【步骤3】结果计算：标准管法 Cx = Ax As Cs Vs Vx 计算待测溶液浓度时，可根据测定时计算待测溶液浓度时，可根据测定时实际吸取实际吸取的的标准液的体积标准液的体积(Vs)和和 待测样品的体积待测样品的体积(Vx)，将上式演变为：，将上式演变为： X = Ax As S = Ax As

10、 S X VX VX 1 VS VS 测试母液浓度 标准母液浓度 吸取的标准及测 试母液的体积 2 2、计算注射胰岛素后血糖降低或注射肾上腺素后血糖、计算注射胰岛素后血糖降低或注射肾上腺素后血糖 升高的百分率：升高的百分率： 【步骤3】结果计算：标准管法 血糖变化百分率血糖变化百分率= = 注射后血糖浓度注射前血糖浓度 注射前血糖浓度 X100% 1 1、实验原理（清晰，全面）、实验原理（清晰，全面） 2 2、原始数据记录、原始数据记录 3 3、实验结果计算（数据带入的过程）、实验结果计算（数据带入的过程） 4 4、实验讨论（讨论实验成败的原因，实验、实验讨论（讨论实验成败的原因，实验 可改良的地方等）可改良的地方等） 日期、室温 实验项目实验项目 【步骤步骤4】实验报告实验报告