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1、基因工程公开课基因工程公开课黏性末端黏性末端黏性末端黏性末端EcoRIEcoRI限制酶的切割限制酶的切割(3)限制酶切割的是什么化学键？限制酶切割的是什么化学键？磷酸磷酸二酯二酯键键切割位点切割位点 (3)限制酶切割的是脱氧核苷酸之间的磷酸二酯键，而不是碱基之间的氢键 （注意与解旋酶的区别）(4)切割的结果：一般能产生黏性末端，也可能产生平末端。GAATTCCGTAGAATTCGGATT 尝试写出下列序列受尝试写出下列序列受EcoRI限制酶作用后的黏性末端限制酶作用后的黏性末端CTTCATGAATTCCCTAA GAAGTACTTAAGGGATT CTTAAGGCATCTTAAGCCTAA C

2、TTCATG AATTCCCTAA GAAGTACTTAA GGGATT 练一练GGCATCTTAAAATTCCGTAG G A A T T CC T T A A GG A A T T CC T T A A GG C T T A A A A T T C GG C T T A A A A T T C GG C T T A A A A T T C G用同种限制酶切割用同种限制酶切割2、基因的针线、基因的针线DNA连接酶连接酶黏性末端的黏合：黏性末端的黏合：连接位置：连接位置：磷酸与脱氧核糖间的化学键磷酸与脱氧核糖间的化学键磷酸二酯键磷酸二酯键互补的碱基形成氢键连接互补的碱基形成氢键连接黏性末端的连

3、接：黏性末端的连接：DNA连接酶连接酶连接缺口连接缺口两两DNADNA片段要具有片段要具有互补互补的黏性末端的黏性末端才能拼起来才能拼起来DNADNA连接酶的缝合作用连接酶的缝合作用DNADNA连接酶与连接酶与DNADNA聚合酶有什么不一样？聚合酶有什么不一样？A A T T GA A T T GC CA AA AT TT TA AA AT TT TDNA聚合酶聚合酶DNA聚合酶聚合酶DNA聚合酶聚合酶DNA聚合酶聚合酶DNA聚合酶聚合酶DNA聚合酶的作用聚合酶的作用DNA连接酶与连接酶与DNA聚合酶比较聚合酶比较不同点：作用对象：DNA连接酶是在两个DNA片段之间形成磷酸二酯键；DNA聚合酶

4、是在单个脱氧核苷酸与DNA片段之间形成磷酸二酯键。作用条件：DNA连接酶不需要模板；DNA聚合酶需要模板（以DNA的一条链为模板）相同点：都催化形成磷酸二酯键；化学本质均为 蛋白质。3、基因的运载体：、基因的运载体：常用的运载体主要有两类：常用的运载体主要有两类：1 1）质粒质粒 2 2）噬菌体噬菌体或某些动植物或某些动植物病毒病毒 原理：原理：利用运载体侵染宿主细胞的能力，将目的基因导入宿主细胞。利用运载体侵染宿主细胞的能力，将目的基因导入宿主细胞。将外源基因送入受体细胞。将外源基因送入受体细胞。质粒：质粒：质粒是基因工程质粒是基因工程最常用最常用的运载体。的运载体。质粒存在于细菌、酵母菌等

5、生物中，是细胞拟核质粒存在于细菌、酵母菌等生物中，是细胞拟核或细胞核外能够进行或细胞核外能够进行自主复制自主复制的很小的的很小的环状环状DNADNA分分子。子。(1)(1)能在宿主细胞中能在宿主细胞中复制复制并并稳定保存；稳定保存；(2)(2)具有具有多个限制酶的切点，多个限制酶的切点，便于与外源基因连接；（用便于与外源基因连接；（用切割目的基因的同一种限制酶切割运载体，以获得相同切割目的基因的同一种限制酶切割运载体，以获得相同的黏性末端）的黏性末端）(3)(3)具有某些具有某些标记基因标记基因，便于筛选成功导入的受体细胞。，便于筛选成功导入的受体细胞。运载体的特点运载体的特点1)提取目的基因

6、提取目的基因2)目的基因与运载体结合目的基因与运载体结合3)目的基因导入受体细胞目的基因导入受体细胞4)目的基因的检测和表达目的基因的检测和表达（三）基因工程的步骤（三）基因工程的步骤第一步：提取目的基因第一步：提取目的基因（1）目的基因：人们所需要的特定基因 直接分离法：从自然界已有的物种中分离出来 （2）途径 mRNA 单链DNA 双链DNA 人工合成法：氨基酸序列 mRNA序列 DNA序列 合成DNA 第二步：目的基因与运载体结合第二步：目的基因与运载体结合（1）用一定的限制酶切割质粒（2）用同一种限制酶切割目的基因（3）加入DNA连接酶（4）质粒和目的基因结合成重组DNA分子第三步：将

7、目的基因导入受体细胞第三步：将目的基因导入受体细胞 主要是借鉴细菌或病毒侵染细胞的方法主要是借鉴细菌或病毒侵染细胞的方法（1）受体细胞常选用微生物（2）培育转基因动物时，受体细胞一般选用受 精卵；（3）培育转基因植物时，受体细胞可选用受精卵或其他高度分化的体细胞。第四步：目的基因的检测与鉴定第四步：目的基因的检测与鉴定（1）检测：根据受体细胞是否具有某些标记性基因，判断目的基因是否导入；（2）鉴定：受体细胞是否表现出特定的性状，如棉花抗虫性状。本节主要内容本节主要内容1 1）基因工程的概念）基因工程的概念2 2）基因操作的工具）基因操作的工具3 3）基因工程的基本步骤）基因工程的基本步骤1 1

8、、在基因工程中，切割运载体和含有目、在基因工程中，切割运载体和含有目的基因的的基因的DNADNA片段，需使用（片段，需使用（）同种限制酶同种限制酶 B.B.两种限制酶两种限制酶同种连接酶同种连接酶 D.D.两种连接酶两种连接酶3、（多选）、（多选）4、下列四条、下列四条DNA片段，彼此间能被连接酶缝合的一组是片段，彼此间能被连接酶缝合的一组是 A B C D（）5、以下说法正确的是、以下说法正确的是 （）A、所有的限制酶只能识别一种特定的核苷、所有的限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列酸序列 B、质粒是基因工程中唯一的运载体、质粒是基因工程中唯一的运载体 C、运载体必须具备的条件之一是：具有多、运载体必须具备的条件之一是：具有多个限制酶切点，以便与外源基因连接个限制酶切点，以便与外源基因连接 D、基因控制的性状都能在后代表现出来、基因控制的性状都能在后代表现出来C41 结束语结束语