第六章工业微生物产生菌的分离筛选课件.ppt

1、第六章第六章 工业微生物产生菌工业微生物产生菌的分离筛选的分离筛选 菌株分离：菌株分离：就是将一个混杂着各种微生物的样品通就是将一个混杂着各种微生物的样品通过分离技术区分开，并按照实际要求和菌株的特性采取过分离技术区分开，并按照实际要求和菌株的特性采取迅速、准确、有效方法对它们进行分离、筛选，进而得迅速、准确、有效方法对它们进行分离、筛选，进而得到所需微生物的过程。到所需微生物的过程。工业微生物产生菌的筛选包括两部分：工业微生物产生菌的筛选包括两部分：（1 1）从自然界分离）从自然界分离（2 2）野生菌株进一步纯化并进行代谢产物的鉴定）野生菌株进一步纯化并进行代谢产物的鉴定收集和筛选的途径：收

2、集和筛选的途径：（1）向菌种保藏机构索取有关的菌株，从中筛选所需）向菌种保藏机构索取有关的菌株，从中筛选所需菌株。菌株。（2）由自然界采集样品，从中进行分离筛选。）由自然界采集样品，从中进行分离筛选。（3）从一些发酵制品中分离目的菌株）从一些发酵制品中分离目的菌株。1.国内重要菌种保藏机构国内重要菌种保藏机构2.国外重要菌种保藏机构国外重要菌种保藏机构白霉奶酪 法国蓝纹绵羊奶酪大孔奶酪其臭不亚于臭袜子的“戈达”菌种的分离和筛选一般可分为菌种的分离和筛选一般可分为采样、富集、分离、采样、富集、分离、产物鉴别产物鉴别这几个步骤。这几个步骤。分离的目的分离的目的n新菌种的分离是要从混杂的各类微生物中

3、依照生产的要求、新菌种的分离是要从混杂的各类微生物中依照生产的要求、菌种的特性，采用各种筛选方法，快速、准确地把菌种的特性，采用各种筛选方法，快速、准确地把所需要的所需要的菌种挑选出来菌种挑选出来。n实验室或生产用菌种若不慎污染了杂菌，也必须重新进行实验室或生产用菌种若不慎污染了杂菌，也必须重新进行分分离纯化离纯化。污染的芽孢杆菌污染的芽孢杆菌 第一节第一节 含微生物样品的采集含微生物样品的采集采样对象：采样对象：以采集以采集土壤土壤为主。一般园田土和耕作过的沼泽土中，为主。一般园田土和耕作过的沼泽土中，以细菌和放线菌为主，富含碳水化合物的土壤和沼泽地以细菌和放线菌为主，富含碳水化合物的土壤和

4、沼泽地中，酵母和霉菌较多，如一些野果生长区和果园内。采中，酵母和霉菌较多，如一些野果生长区和果园内。采样的对象也可以是植物，腐败物品，某些水域等。样的对象也可以是植物，腐败物品，某些水域等。一、土壤中采样一、土壤中采样 土壤是人类最丰富的菌种资源库。土壤是人类最丰富的菌种资源库。一般情况下，土壤中含细菌数量最多，且每克土壤的一般情况下，土壤中含细菌数量最多，且每克土壤的含菌量大体有如下的递减规律：含菌量大体有如下的递减规律：细菌（细菌（108）放线菌放线菌（107）霉菌（霉菌（106）酵母菌（酵母菌（105）藻类（藻类（104）原原生动物（生动物（103），），（一）根据土壤特点（一）根据土壤

5、特点1、土壤有机质含量和通气状况、土壤有机质含量和通气状况 耕作土、菜园土、津郊土壤；森林土，采土样最好耕作土、菜园土、津郊土壤；森林土，采土样最好的的土层是土层是525cm。一般每克土中含菌数约几十万到几。一般每克土中含菌数约几十万到几十亿个，并且各种类型的细菌和放线菌几乎都能分离十亿个，并且各种类型的细菌和放线菌几乎都能分离到。到。2、酸碱度和植被状况、酸碱度和植被状况 偏碱的土壤（偏碱的土壤（pH7.07.5）环境，适合于细菌、放）环境，适合于细菌、放线菌生长。反之在偏酸的土壤（线菌生长。反之在偏酸的土壤（pH7.0以下）环境下，以下）环境下，霉菌、酵母菌生长旺盛。霉菌、酵母菌生长旺盛。

6、3地理条件地理条件 南方土壤比北方土壤中的微生物数量和种类都要多，南方土壤比北方土壤中的微生物数量和种类都要多，特别是热带和亚热带地区的土壤。特别是热带和亚热带地区的土壤。4季节条件季节条件 夏季到秋季，约有夏季到秋季，约有710个月处在较高的温度和丰富个月处在较高的温度和丰富的植被下，土壤中微生物数量比任何时候都多，因此，的植被下，土壤中微生物数量比任何时候都多，因此，秋季采土样最为理想。秋季采土样最为理想。（二）采样方法（二）采样方法 用取样铲，将表层用取样铲，将表层5cm左左右的浮土除去，取右的浮土除去，取525cm处处的土样的土样1025g，装入事先准，装入事先准备好的塑料袋内扎好。北

7、方土备好的塑料袋内扎好。北方土壤干燥，可在壤干燥，可在1030cm处取样。给塑料袋编号并记录处取样。给塑料袋编号并记录地点、土壤质地、植被名称、地点、土壤质地、植被名称、时间及其他环境条件时间及其他环境条件。一般样。一般样品取回后应马上分离，以免微品取回后应马上分离，以免微生物死亡。生物死亡。二根据微生物生理特点采样二根据微生物生理特点采样1.根据微生物营养类型根据微生物营养类型u 森林土森林土 纤维素酶产生菌纤维素酶产生菌；u 肉类加工厂附近和饭店排水沟肉类加工厂附近和饭店排水沟 蛋白酶和脂肪酶蛋白酶和脂肪酶的产生菌；的产生菌；u 面粉加工厂、糕点厂、酒厂及淀粉加工厂面粉加工厂、糕点厂、酒厂

8、及淀粉加工厂 蛋白蛋白酶、糖化酶的菌株酶、糖化酶的菌株；u 蜂蜜、蜜饯蜂蜜、蜜饯、甜果、甜果 酵母；酵母；.根据微生物的生理特性根据微生物的生理特性u高温酶高温酶产生菌时，通常到温度较高的南方，或温泉、产生菌时，通常到温度较高的南方，或温泉、火山爆发处及北方的堆肥中采集样品；火山爆发处及北方的堆肥中采集样品；u分离分离低温酶低温酶产生菌时可到寒冷的地方，如南北极地区、产生菌时可到寒冷的地方，如南北极地区、冰窖、深海中采样；冰窖、深海中采样；u分离分离耐压菌耐压菌则通常到海洋底部采样。则通常到海洋底部采样。三、特殊环境下采样三、特殊环境下采样1局部环境条件的影响局部环境条件的影响u海鞘、海参体内

9、的微生物可产生具有细菌毒性和杀菌活性海鞘、海参体内的微生物可产生具有细菌毒性和杀菌活性的化合物。的化合物。u从海绵体内的共生或共栖的细菌中分离到抗白血病、鼻咽从海绵体内的共生或共栖的细菌中分离到抗白血病、鼻咽癌的抗癌物质。癌的抗癌物质。u深海鱼类肠道内的嗜压古细菌，深海鱼类肠道内的嗜压古细菌，80%以上的菌株可以生产以上的菌株可以生产EPA 和和DHA；u从鳕鱼肠道中分离到一株从鳕鱼肠道中分离到一株pj20细菌，产细菌，产EPA14.78mg/L；得克萨斯州中南部的一得克萨斯州中南部的一个岩洞中存在着大量嗜碱性个岩洞中存在着大量嗜碱性的，能进行氨氧化和产几丁的，能进行氨氧化和产几丁质酶的微生物

10、，其原因是这质酶的微生物，其原因是这里生活这里生活这2000万只蝙蝠，万只蝙蝠，其排泄物造成了洞内其排泄物造成了洞内10m深深的丰富营养层，这种特殊的的丰富营养层，这种特殊的环境对该种微生物起了选择环境对该种微生物起了选择和富集的作用。和富集的作用。从考拉从考拉(Koala)熊熊肠中也曾分离到萜烯肠中也曾分离到萜烯分解酶的产生菌分解酶的产生菌 2极端环境条件的影响极端环境条件的影响 生活在极端环境中的微生物具有不同与一般微生物的生活在极端环境中的微生物具有不同与一般微生物的遗传特性、特殊结构和生理机能遗传特性、特殊结构和生理机能，可以产生一些特殊的，可以产生一些特殊的代谢产物和酶制剂。代谢产物

11、和酶制剂。如如嗜冷菌嗜冷菌低温酶；低温酶；嗜热菌嗜热菌高温酶；高温酶；嗜碱菌嗜碱菌碱性蛋白酶碱性蛋白酶 海洋海洋是新抗生素的重要来源。许多海洋生物体内都含是新抗生素的重要来源。许多海洋生物体内都含有微生物，这些微生物为宿主抵御病害起着关键作用。有微生物，这些微生物为宿主抵御病害起着关键作用。因此，从鱼组织和虾消化道里分离筛选抗癌药物和抗炎因此，从鱼组织和虾消化道里分离筛选抗癌药物和抗炎症药物是一个有效地途径。症药物是一个有效地途径。第二节第二节 含微生物样品的富集培养含微生物样品的富集培养 富集培养：富集培养：是在目的微生物含量较少时，根据微生物是在目的微生物含量较少时，根据微生物的生理特性设

12、计一种的生理特性设计一种选择性培养基选择性培养基，创造有利的生长条件，创造有利的生长条件，使目的微生物在最适环境下迅速生长繁殖，数量增加，由使目的微生物在最适环境下迅速生长繁殖，数量增加，由自然条件下的劣势种变成人工环境下的优势种以利分离到自然条件下的劣势种变成人工环境下的优势种以利分离到所需要的菌株。所需要的菌株。富集培养主要根据微生物的富集培养主要根据微生物的碳、氮源、碳、氮源、pH、温度、温度、需氧等生理因素需氧等生理因素加以控制。一般可从以下几个方面来进加以控制。一般可从以下几个方面来进行富集。行富集。一、控制培养基的营养成分一、控制培养基的营养成分 在增殖培养基中人为加入相应的底物作

13、在增殖培养基中人为加入相应的底物作惟一碳源或惟一碳源或氮源氮源。那些能分解利用的菌株因得到充足的营养而迅速。那些能分解利用的菌株因得到充足的营养而迅速繁殖，其他微生物则由于不能分解这些物质，生长受到繁殖，其他微生物则由于不能分解这些物质，生长受到抑制。抑制。如如:分离水解酶产生菌分离水解酶产生菌以相应底物为惟一碳源以相应底物为惟一碳源。分离耐高渗酵母菌分离耐高渗酵母菌培养基中培养基中30%40%葡萄糖葡萄糖 连续富集培养连续富集培养 如以如以苯胺苯胺作惟一碳源对样品进行富集培养，待底物作惟一碳源对样品进行富集培养，待底物完全降解后，再以一定接种量转接到新鲜的含苯胺的富完全降解后，再以一定接种量

14、转接到新鲜的含苯胺的富集培养液中，如此连续移接培养数次。同时将苯胺浓度集培养液中，如此连续移接培养数次。同时将苯胺浓度逐步提高，便可得到降解苯胺占优势的菌株培养液，采逐步提高，便可得到降解苯胺占优势的菌株培养液，采用稀释涂布法或平板划线法进一步分离，即可得到能降用稀释涂布法或平板划线法进一步分离，即可得到能降解解高浓度苯胺高浓度苯胺的微生物。的微生物。二、控制培养条件二、控制培养条件u 控制控制pH：中性中性细菌细菌；酸性；酸性酵母，霉菌酵母，霉菌u 控制培养温度；控制培养温度；低温低温嗜冷菌；嗜冷菌；高温高温嗜热菌；嗜热菌；u 控制氧气；控制氧气；通气培养通气培养好氧菌；好氧菌；静置培养静置

15、培养厌氧菌。厌氧菌。三、抑制不需要的菌类三、抑制不需要的菌类 通过通过高温、高压、加入抗生素高温、高压、加入抗生素等方法减少非目的等方法减少非目的微生物的数量，使目的微生物的比例增加，同样能微生物的数量，使目的微生物的比例增加，同样能够达到富集的目的。够达到富集的目的。u 高温处理高温处理抑制不产芽孢菌抑制不产芽孢菌；u 胆盐和十二烷基磺酸钠胆盐和十二烷基磺酸钠抑制革兰阳性菌抑制革兰阳性菌；u 硫乙醇酸钠硫乙醇酸钠 抑制好氧菌；抑制好氧菌；u 四环素等抗生素四环素等抗生素抑制细菌抑制细菌；1.重铬酸钾重铬酸钾抑制土壤真菌、细菌抑制土壤真菌、细菌。第三节第三节 微生物的分离微生物的分离 虽然在进

16、行富集以后，目的微生物得到了增殖，占虽然在进行富集以后，目的微生物得到了增殖，占了优势，但其他微生物只是数量上的减少，并未死亡，了优势，但其他微生物只是数量上的减少，并未死亡，也非纯种。也非纯种。一、好气微生物的分离一、好气微生物的分离粗放：粗放：菌落纯菌落纯细化：细化：菌株纯、细胞纯菌株纯、细胞纯（一）（一）稀释涂布法稀释涂布法（二）划线分离法（二）划线分离法（三）利用平皿的生化反应进行分离（三）利用平皿的生化反应进行分离1 1、透明圈法、透明圈法 混浊底物被分解后形成透明圈。如脂肪酶、淀粉酶、混浊底物被分解后形成透明圈。如脂肪酶、淀粉酶、蛋白酶、核酸酶、有机酸等。蛋白酶、核酸酶、有机酸等。

17、2、变色圈法：直接用显色剂或指示剂、变色圈法：直接用显色剂或指示剂淀粉酶变色圈试验变色圈大的为淀粉酶高产菌落果胶酶：果胶酶：刚果红（绛红色水解圈）刚果红（绛红色水解圈）谷氨酸：谷氨酸：溴百里酚兰（溴百里酚兰（pH 6.2以下为黄色，以下为黄色，pH 7.6以上以上为蓝色）为蓝色）内肽酶：内肽酶：吲羟乙酸酯被产酶菌落水解为吲羟乙酸酯被产酶菌落水解为3-羟基吲哚，后羟基吲哚，后者氧化成蓝色物质）者氧化成蓝色物质）乙醇：乙醇：蓝色的盐类物质在醇脱氢酶和蓝色的盐类物质在醇脱氢酶和NAD作用下反应作用下反应产生电子脱色，形成淡白色晕圈。产生电子脱色，形成淡白色晕圈。3 3、生长圈法、生长圈法 用于分离筛

18、选用于分离筛选氨基酸、核苷酸和维生素氨基酸、核苷酸和维生素的产生菌。的产生菌。利用某些具有特殊营养要求的微生物（营养缺陷型菌利用某些具有特殊营养要求的微生物（营养缺陷型菌株）作为工具菌，要分离的微生物能在一般培养条件下株）作为工具菌，要分离的微生物能在一般培养条件下生长而合成该营养物而使工具菌能生长，形成生长圈生长而合成该营养物而使工具菌能生长，形成生长圈 。如如嘌呤营养缺陷型大肠杆菌嘌呤营养缺陷型大肠杆菌与不含嘌呤的琼脂混合与不含嘌呤的琼脂混合倒平板，在其上涂布含菌样品保温培养，周围出现生长倒平板，在其上涂布含菌样品保温培养，周围出现生长圈的菌落即为嘌呤产生菌。圈的菌落即为嘌呤产生菌。4.抑

19、菌圈法抑菌圈法 常用于抗生素产生菌的常用于抗生素产生菌的 分离筛选。分离筛选。如青霉素菌种选育。如青霉素菌种选育。检验菌：检验菌：枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌。枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌。（四）组织分离（四）组织分离1.1.对一般有病组织的分离方法对一般有病组织的分离方法 清洗组织表面清洗组织表面0.10.1升汞表面消毒升汞表面消毒无菌水冲洗无菌水冲洗适适宜温度培养宜温度培养挑取菌落挑取菌落2.2.食用菌孢子分离方法食用菌孢子分离方法（1 1）组织块分离法：）组织块分离法：组织块组织块切小块，斜面直接培养。切小块，斜面直接培养。（2 2）多孢子分离：）多孢子分离：表面消毒，表面消毒，孢子采集

20、。孢子采集。（3 3）单孢子分离：）单孢子分离：收集到的收集到的孢子稀释涂布培养。孢子稀释涂布培养。（五）单细胞或单孢子分离法（五）单细胞或单孢子分离法 采取显微分离法从混杂采取显微分离法从混杂群体中直接分离单个细胞或群体中直接分离单个细胞或单个个体进行培养以获得纯单个个体进行培养以获得纯培养培养。1、显微挑取法、显微挑取法2.小滴分离纯化培养法小滴分离纯化培养法（六）特殊菌类（六）特殊菌类环保降解菌的分离环保降解菌的分离 多环芳烃、有机染料和颜料、表面活性剂、农药、多环芳烃、有机染料和颜料、表面活性剂、农药、酚类和卤代烃。分离筛选这类物质的降解微生物时，酚类和卤代烃。分离筛选这类物质的降解微

21、生物时，通常采用以该物质为通常采用以该物质为唯一碳源或氮源唯一碳源或氮源的培养基进行富的培养基进行富集培养。集培养。注意有些有毒污染物降解菌因本身对微生物生长注意有些有毒污染物降解菌因本身对微生物生长就有抑制作用，所以应该根据不同情况设计合理的筛就有抑制作用，所以应该根据不同情况设计合理的筛选模型。选模型。加拿大加拿大16岁的高中生丹尼尔岁的高中生丹尼尔伯德伯德 加拿大年仅加拿大年仅16岁的岁的高中生丹尼尔高中生丹尼尔伯德通伯德通过潜心研究，发现通过潜心研究，发现通过一种神奇的假单细过一种神奇的假单细胞菌，可以将塑料袋胞菌，可以将塑料袋的自然降解过程从最的自然降解过程从最多上千年缩至短短多上千

22、年缩至短短3个个月！月！二、通过控制营养和培养条件进行分离二、通过控制营养和培养条件进行分离1 1、营养成分、营养成分 各种微生物对碳源、氮源的需求不同。各种微生物对碳源、氮源的需求不同。分离放线菌，使用分离放线菌，使用HV（腐殖酸维生素）琼脂培养基、（腐殖酸维生素）琼脂培养基、土豆土豆-胡萝卜水汁液培养基和淀粉琼脂培养基。胡萝卜水汁液培养基和淀粉琼脂培养基。筛选水解酶产生菌时，通常利用以底物为惟一碳、筛选水解酶产生菌时，通常利用以底物为惟一碳、氮源的平板进行分离。氮源的平板进行分离。2 2、pHpH 细菌放线菌偏碱、霉菌酵母偏酸。细菌放线菌偏碱、霉菌酵母偏酸。培养基种碳氮比（培养基种碳氮比（

23、C/NC/N）偏高，则培养后倾向于酸性，）偏高，则培养后倾向于酸性，偏低则倾向于碱性。偏低则倾向于碱性。例如，分离例如，分离柠檬酸产生菌的黑曲霉柠檬酸产生菌的黑曲霉，就是利用调节，就是利用调节培养基的酸碱度获得成功的。其分离方法是：取红芋粉培养基的酸碱度获得成功的。其分离方法是：取红芋粉醪醪20%、柠檬酸、柠檬酸10%20%配成培养液，调节配成培养液，调节pH2.02.5，以一定量的培养基和土样均匀混合，用毛细吸管点，以一定量的培养基和土样均匀混合，用毛细吸管点种在平皿内事先覆盖的无菌滤纸上（种在平皿内事先覆盖的无菌滤纸上（23层），于层），于30培养，这样可以分离到产生柠檬酸的黑曲霉。培养，

24、这样可以分离到产生柠檬酸的黑曲霉。3、排除不需要的菌类、排除不需要的菌类 细菌：细菌：加制霉菌素加制霉菌素 放线菌：放线菌：加加SDS；氟哌酸；氟哌酸+制霉菌素制霉菌素+青霉素青霉素 霉菌和酵母：霉菌和酵母：青霉素、链霉素、四环素青霉素、链霉素、四环素 根霉和毛霉：根霉和毛霉：加去氧胆酸钠或山梨醇防止菌丝蔓延加去氧胆酸钠或山梨醇防止菌丝蔓延4、控制温度、控制温度 高温微生物（高温微生物（5060）；）；中温微生物（中温微生物（2040）；低温微生物（低温微生物（15 或更低）或更低）三、厌气菌的分离三、厌气菌的分离（一）加还原剂：（一）加还原剂：分离培养基内加入还原剂，如半胱氨酸、分离培养基内

25、加入还原剂，如半胱氨酸、D型维型维生素生素C、硫化钠等。培养皿于置于事先已抽真空密闭、硫化钠等。培养皿于置于事先已抽真空密闭的容器内（充的容器内（充CO2或或N2也可）培养。也可）培养。（二）焦性没食子酸法（二）焦性没食子酸法 焦性没食子酸和焦性没食子酸和NaOH互相反应除去氧气。互相反应除去氧气。除去除去100ml空气中的氧气需要焦性没食子酸固体空气中的氧气需要焦性没食子酸固体1g和和10%NaOH溶液溶液10ml。（三）平皿厌气培养法（三）平皿厌气培养法 无菌培养皿一套，在无菌培养皿一套，在皿盖内皿盖内到上分离培养基，凝固到上分离培养基，凝固后，后，皿底皿底一侧放焦性没食子酸固体，另一侧放

26、一侧放焦性没食子酸固体，另一侧放10%NaOH溶液，使二者不相接触。分离操作后，摇动平皿溶液，使二者不相接触。分离操作后，摇动平皿使焦性没食子酸固体和使焦性没食子酸固体和NaOH溶液混合，发生化学反应，溶液混合，发生化学反应，除去皿内的氧气。除去皿内的氧气。培养基培养基焦性没焦性没食子酸食子酸NaOH（四）试管厌气培养法（四）试管厌气培养法1.穿刺培养法：穿刺培养法：用两头开口的试管，接种后密封培养，用两头开口的试管，接种后密封培养，分离时用无菌玻璃棒将橡皮塞和固体培养基一起挤分离时用无菌玻璃棒将橡皮塞和固体培养基一起挤出来。出来。2.滚管法：滚管法：用橡胶塞密封的试管，通入氮气除氧，然后用橡

27、胶塞密封的试管，通入氮气除氧，然后加入将培养基融化，冷却到加入将培养基融化，冷却到45，将分离样品混入，将分离样品混入，在冷水中滚管，管内壁形成培养层，长出菌落后挑在冷水中滚管，管内壁形成培养层，长出菌落后挑出。出。（五）玻璃板隔绝空气培养法（五）玻璃板隔绝空气培养法 平板培养基接种后，立即用比培养皿小的无菌玻璃平板培养基接种后，立即用比培养皿小的无菌玻璃板盖上，培养基与玻璃板贴紧，形成缺氧区域。板盖上，培养基与玻璃板贴紧，形成缺氧区域。（六）生物吸氧法（六）生物吸氧法 利用植物，如发芽旺盛的燕麦、大麦的呼吸，消耗利用植物，如发芽旺盛的燕麦、大麦的呼吸，消耗培养容器中的氧气。培养容器中的氧气。

28、第四节第四节 野生菌株的筛选和目的产物的鉴别野生菌株的筛选和目的产物的鉴别 在目的菌株分离的基础上，进一步通过筛选，选在目的菌株分离的基础上，进一步通过筛选，选择具有目的产物合成能力相对较高的菌株。择具有目的产物合成能力相对较高的菌株。一、初筛一、初筛 是从大量分离到的微生物中将具有合成目的产物是从大量分离到的微生物中将具有合成目的产物的微生物筛选出来的过程。的微生物筛选出来的过程。1.平板筛选平板筛选 2.摇瓶发酵筛选摇瓶发酵筛选 1.平板筛选平板筛选（1）筛选）筛选碱性蛋白酶碱性蛋白酶，可点样接种至平板培养基上，可点样接种至平板培养基上，培养后测量水解圈和菌落直径的比值来衡量酶活培养后测量

29、水解圈和菌落直径的比值来衡量酶活力的大小。力的大小。（2）筛选）筛选谷氨酸谷氨酸产生菌，将分离的菌落用打孔器转移产生菌，将分离的菌落用打孔器转移到灭菌过的滤纸上，放置一段时间，菌落产生的到灭菌过的滤纸上，放置一段时间，菌落产生的谷氨酸会渗透到滤纸上，移走菌落后，喷上茚三谷氨酸会渗透到滤纸上，移走菌落后，喷上茚三酮显色，出现的色圈以及大小可判断是否产谷氨酮显色，出现的色圈以及大小可判断是否产谷氨酸以及产量高低。酸以及产量高低。2.摇瓶发酵筛选摇瓶发酵筛选 经过平板定性筛选的菌种可以进行摇瓶培养，一般一经过平板定性筛选的菌种可以进行摇瓶培养，一般一个菌株接种个菌株接种一个三角瓶一个三角瓶，在一定的

30、转速和稳定的的摇床，在一定的转速和稳定的的摇床上振荡培养，得到发酵滤液后再进行活性测定。上振荡培养，得到发酵滤液后再进行活性测定。活性测定最好采用简便的方法，如琼脂薄板法。活性测定最好采用简便的方法，如琼脂薄板法。二、复筛二、复筛 通过初筛淘汰通过初筛淘汰8590不符合要求的微生物，剩下不符合要求的微生物，剩下较好的菌株用摇瓶培养复筛时，通常要较好的菌株用摇瓶培养复筛时，通常要35个瓶的重复，个瓶的重复，发酵液用精确的分析方法测定。发酵液用精确的分析方法测定。精确测定法筛选可信度大，但工作量大，因而在摇瓶精确测定法筛选可信度大，但工作量大，因而在摇瓶复筛中，也可以把平板粗筛和精确的检测筛选相结

31、合，复筛中，也可以把平板粗筛和精确的检测筛选相结合，对粗筛结果比较满意的摇瓶再进行精确检测筛选。对粗筛结果比较满意的摇瓶再进行精确检测筛选。第六章第六章 思考题思考题什么是菌株分离和筛选？什么是菌株分离和筛选？分离筛选的基本步骤有哪些？分离筛选的基本步骤有哪些？抑制不需要菌类的常用方法有哪些？抑制不需要菌类的常用方法有哪些？好气微生物分离的常用方法有哪些？它们的原理好气微生物分离的常用方法有哪些？它们的原理如何如何?平皿生化反应分离有哪些主要方法？原理如何？平皿生化反应分离有哪些主要方法？原理如何？如何用焦性没食子酸法分离厌气菌？如何用焦性没食子酸法分离厌气菌？初筛和复筛的要求有什么不同？初筛和复筛的要求有什么不同？