第章维生素类药物的分析课件.ppt

1、维生素：维生素：是维持人体正常代谢机能所是维持人体正常代谢机能所必需的微量营养物质。必需的微量营养物质。人体不能合成维生素人体不能合成维生素 VitA、D、E、K等等 脂溶性脂溶性水溶性水溶性 VitB VitC、叶酸、烟酸、叶酸、烟酸2020/11/31-H 维生素维生素A醇醇-COCH3 维生素维生素A醋酸酯醋酸酯-COC15H31 维生素维生素A棕榈酸酯棕榈酸酯R:第一节第一节 维生素维生素A2020/11/32溶解性溶解性（一）（一）不溶于水不溶于水易溶于有机溶剂和植物油等易溶于有机溶剂和植物油等性质性质一、一、2020/11/33为一个具有为一个具有共轭多烯侧链的共轭多烯侧链的 环己

2、烯环己烯（二）（二）v 具有具有UV吸收吸收 325-328nmv V VA A主要为全反式主要为全反式V VA,A,存在多种立体存在多种立体异构化合物异构化合物,如：新维生素如：新维生素A Aa a,新维新维生素生素A Ab b,新维生素新维生素A Ac c,异维生素异维生素A Aa a，异，异维生素维生素A Ab b 2020/11/34维生素维生素A 325.5 100%新维生素新维生素Aa 328 75%新维生素新维生素Ab 320.5 24%新维生素新维生素Ac 310.5 15%异维生素异维生素Aa 323 21%异维生素异维生素Ab 324 24%max 相对生物效价相对生物效价

3、2020/11/35VitA2VitA3v 易发生脱氢、脱水、聚合反应易发生脱氢、脱水、聚合反应2020/11/36鲸醇鲸醇2020/11/37酸酸醛醛环氧化物环氧化物、氧化剂、氧化剂紫外线、紫外线、VitAVitAVitAOO2v 或有金属离子存在时氧化或有金属离子存在时氧化维生素维生素A A醋酸酯在临床上较常用醋酸酯在临床上较常用共轭多烯侧链共轭多烯侧链 易被氧化易被氧化（三）（三）2020/11/38环氧化物环氧化物VitAVitA醛醛VitAVitA酸酸2020/11/39（四）（四）与三氯化锑发生呈色反应与三氯化锑发生呈色反应紫紫红红蓝蓝色色3SbClVitACHCl32020/11

4、/310三氯化锑反应三氯化锑反应（一）（一）紫红蓝色无水3SbClVitA无醇无醇CHCl3鉴别鉴别二、二、2020/11/311-RCOOSbCl5+CH2蓝色蓝色紫红紫红+C H2-RCOOSb C l5条件条件 无水无醇无水无醇三氯化锑水解生成氯化氧锑三氯化锑水解生成氯化氧锑乙醇可与乙醇可与C+作用而使正电荷消失作用而使正电荷消失2020/11/312方法方法 取维生素取维生素A A油溶液油溶液1d1d，加氯仿加氯仿10 ml10 ml，振摇溶解，取，振摇溶解，取出两滴，加氯仿出两滴，加氯仿2 ml2 ml，与，与25%25%三氯化锑氯仿液三氯化锑氯仿液0.5 ml0.5 ml反应，反应

5、，成蓝色，渐成紫红。成蓝色，渐成紫红。2020/11/313 BP BP（20052005）VitAVitAHCl去去水水无无水水乙乙醇醇max为为326nm一个吸收峰一个吸收峰UVUV法法（二）（二）max为为350390nm三个吸收峰三个吸收峰且在且在332nm的波长处的波长处有较低的吸收峰或拐点有较低的吸收峰或拐点2020/11/314去水去水VitA（VitA3）CH3CH3CH2ORCH3CH3CH3VitAHCl2020/11/315讨论讨论 维生素维生素 A A有五个共扼双有五个共扼双键，无水乙醇溶液在键，无水乙醇溶液在 326 nm326 nm处处有最大吸收，盐酸催化加热脱有最

6、大吸收，盐酸催化加热脱水，成水，成6 6个双键，故，波长红移，个双键，故，波长红移，同时在同时在350-390350-390之间出现之间出现3 3个吸个吸收峰。收峰。2020/11/316max为为326nm一个吸收峰一个吸收峰max为为350390nm三个吸收峰三个吸收峰2020/11/317USP 显色剂显色剂 磷钼酸磷钼酸 规定规定斑点颜色斑点颜色和和Rf值值BP 显色剂显色剂 三氯化锑三氯化锑（三）（三）TLC法法对照品法对照品法2020/11/318 (一一)UV法法三三.含量测定含量测定 (二二)HPLC法法2020/11/319（三）三氯化锑比色法（三）三氯化锑比色法标准曲线法标

7、准曲线法1.原理：维生素原理：维生素A与与三氯化锑的无水氯仿三氯化锑的无水氯仿溶液作用溶液作用,产生产生不稳定的蓝色不稳定的蓝色,在在618nm620nm波长处有最大吸收波长处有最大吸收,符合符合Beer定律定律.2.方法：取维生素方法：取维生素A A对照品，制成系列浓对照品，制成系列浓度的氯仿溶液，加入一定量的度的氯仿溶液，加入一定量的三氯化锑三氯化锑无水氯仿无水氯仿溶液，在溶液，在5s 10s内内,于于620nm波波长处测定吸收度，绘制标准曲线。按同法长处测定吸收度，绘制标准曲线。按同法测定供试液的吸收度，根据标准曲线计算测定供试液的吸收度，根据标准曲线计算含量。含量。2020/11/32

8、0NSCH3CH2CH2OHNNH3CNH2CH2+氨基嘧啶环氨基嘧啶环CH2噻唑环噻唑环(季铵碱季铵碱)连接而成的季铵类连接而成的季铵类化合物化合物HClCl-第二节第二节 维生素维生素B1的分析的分析(盐酸硫胺盐酸硫胺)2020/11/321 二二 、性质、性质（一）（一）溶解性：易溶于水，水溶液溶解性：易溶于水，水溶液呈酸性呈酸性（二）（二）硫色素反应：噻唑环在碱硫色素反应：噻唑环在碱性介质中开环，再与嘧啶环上的性介质中开环，再与嘧啶环上的氨基环合，经铁氰化钾等氧化剂氨基环合，经铁氰化钾等氧化剂氧化成具有荧光的硫色素。氧化成具有荧光的硫色素。蓝蓝色色荧荧光光硫硫色色素素正正丁丁醇醇 OO

9、H2020/11/322嘧啶环嘧啶环 伯氨伯氨噻唑环噻唑环 季铵季铵1、可与酸成盐、可与酸成盐2、与生物碱、与生物碱3、含量测定、含量测定 非水碱量法非水碱量法（四）（四）碱性碱性（三）（三）UVUV 共轭双键共轭双键maxmax=246=246nmnm2020/11/323荧荧光光消消失失蓝蓝色色荧荧光光硫硫色色素素正正丁丁醇醇）（环环合合 HCNFeKOHNaOHVitB6321O OHChP鉴别试验鉴别试验二、二、（一）（一）硫色素反应硫色素反应2020/11/3242020/11/325硫色素硫色素 环环合合 H2(O)2020/11/326方法方法 取本品约取本品约5mg5mg，加氢

10、氧化钠，加氢氧化钠2.5ml2.5ml，加铁氰化钠试液，加铁氰化钠试液0.5ml0.5ml与正与正丁醇丁醇5ml,5ml,强烈振摇强烈振摇2min,2min,放置分层，放置分层，上面醇层显强烈蓝色荧光。加酸消上面醇层显强烈蓝色荧光。加酸消失，再加碱又重现。失，再加碱又重现。专属性反应。专属性反应。2020/11/327(二二)沉淀反应沉淀反应 VitB1 4242HgIHBHgIK 淡淡黄黄H+2KIIIHIB2 红红色色H+白白色色硅硅钨钨酸酸 H+OH4WO12OHSiOB23222 白白色色扇扇形形苦苦酮酮酸酸 H+2020/11/328 PbSNaSVitBAcPbNaOH OHNHA

11、gNOAgCl白白3HNO HNO蓝蓝淀淀粉粉试试纸纸 KIMnOCl H S元素反应元素反应Cl-反应反应（三）其他反应（三）其他反应2020/11/329三、三、含量测定含量测定 44422HClOClOBHClOHClClBAcHg）（电位滴定法指示终点电位滴定法指示终点（一）（一）非水溶液滴定法非水溶液滴定法原理：维生素原理：维生素B B1 1分子含有分子含有2 2个碱性个碱性的已成盐的已成盐的的伯胺伯胺和和季铵季铵基团，在非水溶液中均与基团，在非水溶液中均与HClOHClO4 4作用，作用，根据消耗根据消耗HClOHClO4 4的量可以计算维生的量可以计算维生素素B B1 1的含量。

12、的含量。2020/11/330(二二)UV ChP片剂、注射剂片剂、注射剂=421%cmE11A=ECL2020/11/331（一）结构（一）结构 为为L-L-抗坏血酸，在化学结构上和糖类似。有抗坏血酸，在化学结构上和糖类似。有4 4种光学异构体，种光学异构体，L L构型的右旋体活性最强。具有构型的右旋体活性最强。具有二烯醇的结构，具有内酯环，具有两个手性碳二烯醇的结构，具有内酯环，具有两个手性碳（C C4 4，C C5 5），性质活泼。），性质活泼。L L抗坏血酸抗坏血酸第三节第三节 维生素维生素C C2020/11/332（二）性质（二）性质 溶解性溶解性 易溶于水，水溶液呈酸性；在乙醇易

13、溶于水，水溶液呈酸性；在乙醇 中略溶，在氯仿或乙醚中不溶。中略溶，在氯仿或乙醚中不溶。2020/11/333 2 2 酸性酸性C C3 3OHOH的酸性较的酸性较强。强。pKpK1 1=4.17=4.17，C C2 2OHOH的酸性较的酸性较弱弱pKpK2 2=11.57=11.57。故表现为一元酸故表现为一元酸的性质。能与碳的性质。能与碳酸氢钠成钠盐。酸氢钠成钠盐。2020/11/334二烯醇结构二烯醇结构二酮基结构二酮基结构 强还原性强还原性二烯醇结构的还原性极强。二烯醇结构的还原性极强。2020/11/335有活性有活性有活性有活性无活性无活性L L抗坏血酸抗坏血酸去氢抗坏血酸去氢抗坏血

14、酸二酮古洛糖酸二酮古洛糖酸2020/11/336OOHHOO C OHHCH2OH123456 光学活性光学活性手性手性C C（C C4 4、C C5 5）L(+)L(+)抗坏血酸活抗坏血酸活性最强性最强*2020/11/337单钠盐单钠盐32CONa酮酮酸酸盐盐水水解解 NaOH5 5 水解性水解性2020/11/338OHOO C OHHCH2OHHONaOH2020/11/339蓝蓝色色糠糠醛醛吡吡咯咯脱脱水水 HVitC506 6 具糖的性质具糖的性质 结构与糖类相似结构与糖类相似 有糖类的显色反应有糖类的显色反应水解、脱羧水解、脱羧2020/11/3407 7 紫外特征紫外特征nmn

15、mmaxOHmaxH 243nm243nm或中性或中性2020/11/341去去氢氢抗抗坏坏血血酸酸OVitCOHOO C OHHCH2OHHOCH2OHOOOO C OHH O二二.鉴别试验鉴别试验(一一)与氧化剂反应与氧化剂反应2020/11/342（银镜）黑AgAgNOVitC31、与、与AgNO3反应反应(ChP2005)2、与、与2，6-二氯靛酚反应二氯靛酚反应(ChP2005)无色的酚亚胺二氯靛酚，VitC62氧化型氧化型玫瑰红色玫瑰红色 H还原型还原型蓝色蓝色 OHOH2020/11/343（玫瑰色）玫瑰色）（无色）（无色）3、与碱性酒石酸铜反应、与碱性酒石酸铜反应 USP红红碱

16、碱性性酒酒石石酸酸铜铜 OCuVitC4、与、与KMnO4反应反应 MnKMnOVitC2020/11/344糖类的反应糖类的反应（二）（二）蓝蓝色色糠糠醛醛戊戊糖糖脱脱水水三三氯氯醋醋酸酸 VitC或盐酸或盐酸50吡咯吡咯USP2020/11/3452020/11/346OCHN（蓝色）（蓝色）OCHO(糠醛糠醛)OCHOH3CH2OHCH（戊糖）（戊糖）NNH50(吡咯吡咯)脱羧脱羧2020/11/347(三三)UV (BP)维生素维生素C 在在0.01mol/L HCl中中,在在243nm有最大吸收有最大吸收58554511E%cm 2020/11/348IIVitCH22去氢抗坏血酸指

17、示剂指示剂 淀粉指示液淀粉指示液三三 含量测定含量测定(一一)碘量法碘量法1.原理原理维生素维生素C C在在醋酸醋酸酸性条件下酸性条件下,可被可被碘定量氧碘定量氧化化.根据消耗碘的体积根据消耗碘的体积,可以计算维生素可以计算维生素C C的的含量含量2020/11/349OO C OHHOOCH2OHH+I2020/11/350 取本品约取本品约0.2g，精密称定，加，精密称定，加新沸过的冷水新沸过的冷水100ml与与稀醋酸稀醋酸10ml使溶使溶解，加解，加淀粉指示液淀粉指示液1ml，立即用，立即用碘滴定液碘滴定液（0.1mol/L）滴定）滴定，至溶液显蓝色，在至溶液显蓝色，在30秒内不褪秒内不

18、褪。每每1ml碘滴定液碘滴定液(0.1mol/L)相当相当于于8.806mg的的C6H8O62.方法方法2020/11/3513.讨论讨论（1）酸性环境）酸性环境 d.HAc 减慢减慢VitC被被O2氧化速度氧化速度（2）新沸冷新沸冷H2O 赶走水中赶走水中O2（3）立即滴定）立即滴定 减少减少O2的干扰的干扰2020/11/352酚酚亚亚胺胺二二氯氯靛靛酚酚，VitC(二)2，6-二氯靛酚滴定法二氯靛酚滴定法1.原理原理空空样样二二氯氯靛靛酚酚液液空空白白样样品品VVHAcHPO 3自身指示终点法自身指示终点法蓝蓝色色玫玫瑰瑰红红 OHH无无色色还还原原 终点：终点：显示过量的显示过量的2，

19、6-二氯靛酚的颜色二氯靛酚的颜色（粉红色）（粉红色）2.2.方法方法2020/11/3533.讨论讨论（1）酸性环境）酸性环境 HPO3-HAc 稳定稳定VitC（2）快速滴定）快速滴定 2min内内 防止其他还原性物质干扰防止其他还原性物质干扰2020/11/354（3）缺点）缺点不稳定不稳定 需经常标定需经常标定 贮备液贮备液 贮存贮存一周一周2020/11/355*第三节第三节 维生素维生素E的分析的分析苯并二氢吡喃醇的衍生物苯并二氢吡喃醇的衍生物苯环上有一个乙酰化的酚羟基，故又称生育苯环上有一个乙酰化的酚羟基，故又称生育酚醋酸酯酚醋酸酯主要有主要有，等异构体，其中以等异构体，其中以-异

20、构异构体的生理活性最强。体的生理活性最强。结构分结构分3 3部分：部分：苯环苯环+二氢吡喃环二氢吡喃环+饱和烃链饱和烃链OCH3CH3CH3CH3CH3CH3CH3CH3CH3COO123456781357911132020/11/356生物效价生物效价 右旋体右旋体 :消旋体消旋体 =1.4：10 （天然品）（天然品）（合成品）（合成品）dl生育酚醋酸酯生育酚醋酸酯2020/11/357一一、性质性质1、溶解性、溶解性 为微黄色或黄色透明的粘稠液体，为微黄色或黄色透明的粘稠液体，易溶于有机溶剂，不溶于水易溶于有机溶剂，不溶于水2、UV 苯环苯环3、酯键、酯键 易水解生成游离生育酚易水解生成游

21、离生育酚4、氧化性氧化性 维生素维生素E在无氧条件下对热稳定在无氧条件下对热稳定,加热加热200也不也不破坏，但对氧十分敏感，遇光、空气可被氧化。破坏，但对氧十分敏感，遇光、空气可被氧化。其氧化产物为其氧化产物为-生育醌或生育醌或-生育酚二聚体。生育酚二聚体。OorOHHVitE醌醌型型化化合合物物生生育育酚酚2020/11/358 3OHNOVitE生育红生育酚二、鉴别试验二、鉴别试验（一）硝酸反应（一）硝酸反应橙红色橙红色75,152020/11/359（橙红色）（橙红色）生育红生育红CH3HOOCH3C16H33CH3H3C生育酚生育酚HNO3强氧化剂强氧化剂2020/11/360 取本

22、品约取本品约30mg，加无水乙，加无水乙醇醇10ml溶解后，加硝酸溶解后，加硝酸2ml，摇匀，在摇匀，在75加热加热15分钟，溶分钟，溶液应显液应显橙红色橙红色。2020/11/361（二）三氯化铁联吡啶反应（二）三氯化铁联吡啶反应原理：原理：维生素维生素E在碱性条件下，水解生成游离在碱性条件下，水解生成游离的生育酚，生育酚经乙醚提取后，可的生育酚，生育酚经乙醚提取后，可被被FeCl3氧化生成对氧化生成对-生育醌，同时生育醌，同时Fe3+被还原为被还原为Fe2+，Fe2+与联吡啶生与联吡啶生成红色的配位离子。成红色的配位离子。2020/11/362CH3HOOCH3C16H33CH3H3C生育

23、酚生育酚对对-生育醌生育醌+3FeO弱氧化剂弱氧化剂Fe2+2020/11/363红色红色2020/11/364 =41.045.5%cmE11max=284nmmin=254nm(三三)UV法法VE0.01%无水乙醇溶液无水乙醇溶液2020/11/365薄层板薄层板 硅胶硅胶G展开剂展开剂 环己烷环己烷-乙醚（乙醚（4 ：1）显色剂显色剂 硫酸（硫酸（105 5）VitE Rf =0.7(四四)TLC)TLC法法2020/11/366游离生育酚游离生育酚 利用游离生育酚的还原性，可被硫酸利用游离生育酚的还原性，可被硫酸铈定量氧化。故在一定条件以铈定量氧化。故在一定条件以消耗消耗硫酸铈滴定液体

24、积来控制游离生育硫酸铈滴定液体积来控制游离生育酚的限量。酚的限量。检查检查 三、三、原理原理（一）（一）中国药典采用硫酸铈滴定法检查制备中国药典采用硫酸铈滴定法检查制备过程中未酯化的生育酚过程中未酯化的生育酚2020/11/367硫酸铈滴定液（硫酸铈滴定液（0.01mol/L）二苯胺（亮黄二苯胺（亮黄灰紫）灰紫）（二）试剂（二）试剂生生育育醌醌对对生生育育酚酚 3422CeCe2020/11/368nCMT （M生育酚生育酚=430.8）（ml/mg154.228.43001.0T 例例 取本品取本品0.10g，加无水乙醇，加无水乙醇5ml溶解后，加二苯胺试液溶解后，加二苯胺试液1滴，滴，用硫

25、酸铈液（用硫酸铈液（0.01mol/L）滴定，）滴定，消耗硫酸铈液（消耗硫酸铈液（0.01mol/L）不不得过得过 1.0ml。2020/11/369%100WTV%限量限量2.15%15.2%1001.0002154.00.1%限量限量限量限量（三）（三）2020/11/370药典规定药典规定消耗硫酸铈液（消耗硫酸铈液（0.01mol/L）1.0ml若硫酸铈液浓度不是若硫酸铈液浓度不是0.01mol/L，应重新计算硫酸铈的消耗量应重新计算硫酸铈的消耗量2020/11/371四、四、含量测定含量测定GC法（法（Ch.P、USP、BP）（一）（一）1、选择性好选择性好灵敏度高灵敏度高速度快速度快分离效能好分离效能好挥发性低、不稳定、挥发性低、不稳定、极性强的药物不适宜极性强的药物不适宜用用GC 法，法，VE沸点达沸点达350，但可以不经衍，但可以不经衍生化直接用生化直接用GC法法2020/11/372载气载气N2固定液固定液硅酮（硅酮（OV-17）担体担体硅藻土或高分子多孔小球硅藻土或高分子多孔小球柱温柱温265检测器检测器氢火焰离子化检测器氢火焰离子化检测器(FID)内标内标正三十二烷正三十二烷 R2VitE测定的色谱条件测定的色谱条件2、内标法加校正因子内标法加校正因子2020/11/3732020/11/374