水稻组织培养课件.ppt
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- 关 键 词:
- 水稻 组织培养 课件
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1、水稻组织培养实验原理植物组织培养主要利用了植物细胞的全能性,细胞全能性(toti potency)就是指每个生活的细胞中都包含有产生一个完整机体的全套基因,在适宜的条件下,细胞具有形成一个新的个体的潜在能力。材料选取水稻种子(干种子或是湿种子均可)作为植物组织培养的外植体仪器电子天平、酸度计、微量移液器、电炉、培养瓶、培养皿、烧杯、量筒、移液管、容量瓶、玻璃棒、试剂瓶、超净工作台、剪刀、镊子、照度计、摇床、灭菌锅培养基母液配置大量元素母液配制:母液 A1(浓缩10倍):称取KNO3 19g、NH4NO3 16.5g、MgSO47H2O 3.7g、KH2PO4 1.7g,分别溶解后混合并定容至
2、1000ml,4保存备用;母液A2(浓缩10倍):称取CaCl22H2O 4.4g 定容至1000ml,4保存备用。微量元素母液配制(母液 B,浓缩 100 倍)称取 MnSO44H2O 2.23g、ZnSO47H2O 860mg、H3BO3 620mg、KI 83mg、NaMO42H2O 25mg、CuSO45H2O 2.5mg、CoCl6H2O 2.5mg,分别溶解并混合后定容至1000ml,4保存备用。铁盐母液配制(母液C 浓缩 100 倍):称取Na2-EDTA 3.77g、FeSO47H2O 2.78g、分别溶解并混合后定容至 1000ml,4保存备用。有机物质母液配制(母液 D,浓
3、缩50倍):称取甘氨酸 100mg、盐酸硫胺素20mg、盐酸吡哆素25mg、烟酸E25mg、肌醇 5000mg,分别溶解后混合并定容至 500ml,4保存备用。生长调节物质母液配制:为了操作方便,生长调节剂也可先配制成母液(药品在配制时若不溶于水,可用少量溶剂先溶解,如萘乙酸(NAA),吲哚乙酸(IAA)、赤霉素(GA3),2,4-D等生长素和玉米素(ZT)可先用少量 95 酒精溶解,然后加水,若溶解不完全再加热;激动素(KT)和6-苄基嘌呤(BA)可溶于少量 1mol/L 的 HCL 中,叶酸需用少量稀氨水溶解称取 50mg 生长调节物质,溶解后,蒸馏水定容至 100ml,配制的母液每毫升则
4、含有生长调节物质0.5mg,4保存备用。MSMS固体培养基的配制及灭菌取 1000ml烧杯一只,加 500ml 水,然后加琼脂 10g,放至电炉子上(铺有石棉网)加热,边加热边搅拌至琼脂完全溶解(然后加蔗糖或白糖)30g 搅拌至其溶解;分别称取母液 A1 100ml、母液 A2 100ml、母液 B 10ml、母液C 10ml、母液D 10ml,到此烧杯中,搅拌均匀后用 0.5mol/L HCL 或 0.5mol/L 的 NaOH将培养基 PH 调至 5-8左右。不同培养阶段所需要的生长调节物质有很大的不同,因此不同阶段的培养基中要加入的生长调节物质是不一样的,如愈伤组织诱导培养基(MS+2,
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