医科大学精品课件:体外分析课件.ppt
- 【下载声明】
1. 本站全部试题类文档,若标题没写含答案,则无答案;标题注明含答案的文档,主观题也可能无答案。请谨慎下单,一旦售出,不予退换。
2. 本站全部PPT文档均不含视频和音频,PPT中出现的音频或视频标识(或文字)仅表示流程,实际无音频或视频文件。请谨慎下单,一旦售出,不予退换。
3. 本页资料《医科大学精品课件:体外分析课件.ppt》由用户(金钥匙文档)主动上传,其收益全归该用户。163文库仅提供信息存储空间,仅对该用户上传内容的表现方式做保护处理,对上传内容本身不做任何修改或编辑。 若此文所含内容侵犯了您的版权或隐私,请立即通知163文库(点击联系客服),我们立即给予删除!
4. 请根据预览情况,自愿下载本文。本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。
5. 本站所有资源如无特殊说明,都需要本地电脑安装OFFICE2007及以上版本和PDF阅读器,压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 医科大学 精品 课件 体外 分析
- 资源描述:
-
1、1 体外分析体外分析 福建医科大学附属第一医院福建医科大学附属第一医院 核医学科核医学科 黄毅相 2 体外分析技术是利用放射分析方法或其派生体外分析技术是利用放射分析方法或其派生 的相关非放射分析技术测定生物样品中微量的相关非放射分析技术测定生物样品中微量 生物活性物质含量的一类分析法。主要用于生物活性物质含量的一类分析法。主要用于 测定样品内的激素、抗原或抗体、受体容量、测定样品内的激素、抗原或抗体、受体容量、 药物浓度以及其他生物活性物质。药物浓度以及其他生物活性物质。 一、定义一、定义 体外分析体外分析 3 体 外 分 析 技 术 体外放射分析体外放射分析 体外非放射分析体外非放射分析
2、放射性竞争放射性竞争 结合分析结合分析 放射性非竞放射性非竞 争结合分析争结合分析 放射免疫分析放射免疫分析 ( RIA) 免疫放射分析免疫放射分析(IRMA) 酶免疫分析酶免疫分析(EIA) 化学发光免疫分析化学发光免疫分析(CLIA) 荧光免疫分析(荧光免疫分析(FIA) 二、分类二、分类 4 放射分析方法或其派生的相关技术。放射分析方法或其派生的相关技术。 在体外进行机体内物质种类和含量的分析在体外进行机体内物质种类和含量的分析 测定。测定。 测定对象是患者血清、血浆或其他体液样测定对象是患者血清、血浆或其他体液样 品内的激素、抗原、抗体、药物浓度和其品内的激素、抗原、抗体、药物浓度和其
3、 它生物活性物质等。它生物活性物质等。 商品化试剂盒的应用(如北方所、原子高商品化试剂盒的应用(如北方所、原子高 科)。科)。 4 三、发展三、发展 5 5 多种体外分析技术的互相渗透。例如将酶免多种体外分析技术的互相渗透。例如将酶免 疫分析技术与荧光技术或化学发光技术结合,疫分析技术与荧光技术或化学发光技术结合, 建立的荧光酶免疫分析及化学发光酶免疫分建立的荧光酶免疫分析及化学发光酶免疫分 析,可极大地提高灵敏度,增大检测范围。析,可极大地提高灵敏度,增大检测范围。 检测自动化(罗氏、西门子、雅培、贝克曼检测自动化(罗氏、西门子、雅培、贝克曼 雷度、新产业等全自动免疫分析仪)。雷度、新产业等
4、全自动免疫分析仪)。 实现多个待测物同时检测,如时间分辨荧光实现多个待测物同时检测,如时间分辨荧光 免疫分析。免疫分析。 发展发展 6 6 在临床和基础医学研究上应用极为广泛。在临床和基础医学研究上应用极为广泛。 如内分泌学、肿瘤学、免疫学、病毒学、如内分泌学、肿瘤学、免疫学、病毒学、 药理学、血液学、消化病学、神经病学、药理学、血液学、消化病学、神经病学、 妇产科学等被广泛应用,有力地推动了妇产科学等被广泛应用,有力地推动了 医学科学的发展。医学科学的发展。 发展发展 7 放射免疫分析放射免疫分析 radioimmunoassay, RIA 8 一、一、RIA定义定义 放射免疫分析(放射免疫
5、分析(radioimmunoassay,RIA) 是指用放射性核素标记已知的抗原或抗体来测定是指用放射性核素标记已知的抗原或抗体来测定 未知的抗体或抗原的体外微量分析方法未知的抗体或抗原的体外微量分析方法,它结合了它结合了 放射性核素的高敏感性和抗原抗体反应的高特异放射性核素的高敏感性和抗原抗体反应的高特异 性性 。 9 二、二、RIA的基本原理的基本原理 利用放射性核素标记的抗原(利用放射性核素标记的抗原(*Ag)和非标记的和非标记的 待测抗原(待测抗原(Ag)竞争结合其特异性抗体(竞争结合其特异性抗体(Ab),反,反 应达到平衡后,分离并分别测定结合的抗原抗体复合应达到平衡后,分离并分别测
6、定结合的抗原抗体复合 物(物(Ag.Ab)的放射性)的放射性(B)和游离抗原放射性和游离抗原放射性(F)。)。 由于由于B或或B/B+F与非标记抗原的含量之间存在竞争抑制与非标记抗原的含量之间存在竞争抑制 的函数关系,依据这一函数关系,通过已知浓度的标的函数关系,依据这一函数关系,通过已知浓度的标 准品绘制出标准曲线即可求出非标记抗原(待测样品)准品绘制出标准曲线即可求出非标记抗原(待测样品) 含量。含量。 10 基本原理基本原理 Ag-Ab + Ag *Ag Ab Ag + + *Ag-Ab + *Ag (B) (F) *Ag与与Ag 免疫活性相同免疫活性相同 *AgAg Ab *Ag与与A
7、b的量恒定的量恒定 Ag= * Ag , AgAb=*AgAb Ag *Ag , *AgAb (B) *Ag(F) Ag *Ag , *AgAb (B) *Ag (F) 11 三、三、RIA试剂盒组成试剂盒组成 RIA分析所需的基本试剂有抗体、标记抗原(抗体、标记抗原( 125I标记标记) 非标记标准抗原(标准品),非标记标准抗原(标准品),此外试剂盒中还提供分离 试剂,缓冲液及质控品等。 12 四、标准曲线的绘制四、标准曲线的绘制 用一系列已知呈梯度浓度的标准抗原和一定量的标记抗原在一用一系列已知呈梯度浓度的标准抗原和一定量的标记抗原在一 定条件下同限量的特异性抗体进行反应;定条件下同限量的
8、特异性抗体进行反应; 在反应达到平衡后,利用适当的分离方法分离在反应达到平衡后,利用适当的分离方法分离B和和F; 分别测量分别测量B和和F的放射性;的放射性; 用反应变量(如用反应变量(如B%)作为纵坐标,反应剂量(即一系列标准作为纵坐标,反应剂量(即一系列标准 抗原的浓度)作为横坐标绘制一条曲线,就得到不同浓度的标抗原的浓度)作为横坐标绘制一条曲线,就得到不同浓度的标 准抗原对反应变量的竞争抑制曲线,这就是剂量反应曲线即标准抗原对反应变量的竞争抑制曲线,这就是剂量反应曲线即标 准曲线。准曲线。 13 Ag 25 50 100 200 400 800 *Ag Ab 分离分离B、F B%=B/(
9、B+F) F%=F/(B+F) R=B/F B1% B2% B3% B4% B5% B6% 1 2 3 4 5 6 浓度浓度 14 B% 标标 准准 曲曲 线线 15 五、未知样品的测量五、未知样品的测量 在同等条件下,用待测抗原与一定量的标记抗原与在同等条件下,用待测抗原与一定量的标记抗原与 限量特异性抗体发生反应,并用同样的方法分离待限量特异性抗体发生反应,并用同样的方法分离待 测抗原的测抗原的B和和F,测量其放射性,计算出测量其放射性,计算出B%,在标在标 准曲线上就可以查出对应的抗原浓度。准曲线上就可以查出对应的抗原浓度。 16 B% 60 标准曲线及未知样品测定 17 六、操作基本步
10、骤六、操作基本步骤 RIA的操作一般包括加样、孵育、分离、测量和数据的操作一般包括加样、孵育、分离、测量和数据 处理处理5个部分。个部分。 1. 加样:注意所有的试管加样总体积要保持一致加样:注意所有的试管加样总体积要保持一致,所所 处的介质环境也要一致处的介质环境也要一致。 2. 孵育:根据不同的分析对象孵育的温度和时间不同孵育:根据不同的分析对象孵育的温度和时间不同, 一般是一般是37。 3. 分离:选择好的分离方法进行分离分离:选择好的分离方法进行分离。 4. 测量:测量游离或结合物部分的放射性测量:测量游离或结合物部分的放射性。 5. 数据处理:绘制标准曲线和待测物浓度的计算。数据处理
11、:绘制标准曲线和待测物浓度的计算。 18 RIA的优点的优点 1.灵敏度高:一般化学分析法的检出极限为灵敏度高:一般化学分析法的检出极限为10-310-6g,而,而 RIA通常为通常为10-9(ng)、10-12(pg),甚至,甚至10-15 (fg)、10-18 (ag) 特异性强:特异性强:RIA是基于抗原抗体免疫结合反应,由于抗原是基于抗原抗体免疫结合反应,由于抗原 抗体免疫反应专一性强。抗体免疫反应专一性强。 应用范围广:几乎能应用于所有激素的分析(包括多肽类应用范围广:几乎能应用于所有激素的分析(包括多肽类 和固醇类激素),还能用于各种蛋白质、肿瘤抗原、病毒和固醇类激素),还能用于各
12、种蛋白质、肿瘤抗原、病毒 抗原、细菌抗原、寄生虫抗原以及一些小分子物质和药物抗原、细菌抗原、寄生虫抗原以及一些小分子物质和药物 (如地高辛、毛地黄甙等)的分析。(如地高辛、毛地黄甙等)的分析。 操作简便,商品化程度高操作简便,商品化程度高 19 1.125I半衰期短(半衰期短(60天),试剂不稳定天),试剂不稳定 2.反应时间长,操作难以自动化。反应时间长,操作难以自动化。 3.使用放射性核素,对人体有一定的危害性。使用放射性核素,对人体有一定的危害性。 放射免疫分析有被取代的趋势。放射免疫分析有被取代的趋势。 RIA的缺点的缺点 20 非放射性标记免疫分析技术非放射性标记免疫分析技术 酶标记
13、免疫分析技术酶标记免疫分析技术 化学发光免疫分析技术化学发光免疫分析技术 时间分辨荧光免疫分析技术时间分辨荧光免疫分析技术 21 一、酶标记免疫分析技术一、酶标记免疫分析技术 用酶分子代替放射性核素标记抗原或抗体,用酶分子代替放射性核素标记抗原或抗体, 进行竞争性或非竞争性免疫分析的技术。其进行竞争性或非竞争性免疫分析的技术。其 中应用最多的就是酶联免疫吸附分析法中应用最多的就是酶联免疫吸附分析法 (ELISA)。)。 它是结合了抗原抗体高特异性和酶促反应它是结合了抗原抗体高特异性和酶促反应 的高敏感性的检测技术。的高敏感性的检测技术。 22 操作步骤操作步骤 23 23 酶标记免疫分析仪器酶
14、标记免疫分析仪器 酶标仪酶标仪 洗板机洗板机 半自动酶标记仪:酶标仪与洗板机分离。半自动酶标记仪:酶标仪与洗板机分离。 24 24 全自动酶标记仪:酶标仪与洗板机一体。全自动酶标记仪:酶标仪与洗板机一体。 25 化学发光免疫分析技术是基于化学发光反应和免疫反应建立起化学发光免疫分析技术是基于化学发光反应和免疫反应建立起 来的免疫分析技术,它既具有免疫反应的高特异性,又具有化学发光来的免疫分析技术,它既具有免疫反应的高特异性,又具有化学发光 的高敏感性。的高敏感性。 25 二、化学发光免疫分析技术二、化学发光免疫分析技术 发光原理 标记物 根据发光 物质分类 化学发光免 疫分析技术 化学发光 免
15、疫分析 异鲁米那 或吖啶酯 碱性环境 氧化发光 化学发光酶 免疫分析 过氧化物酶 碱性磷酸酶 酶促反应催 化底物发光 电化学发光 免疫分析 三联吡啶钌 衍生物 与三丙胺电 子交换发光 26 1. 直接化学发光免疫分析法直接化学发光免疫分析法 是用能产生化学发光的化合物代替放射性标记物,是用能产生化学发光的化合物代替放射性标记物, 其他步骤和其他步骤和RIA或或IRMA基本相同。最常用的发光化基本相同。最常用的发光化 合物是合物是异鲁米诺异鲁米诺和和吖啶酯。吖啶酯。它们在碱性条件下遇到过它们在碱性条件下遇到过 氧化物便发生单光子发射,光子的数量和异鲁米诺和氧化物便发生单光子发射,光子的数量和异鲁
16、米诺和 吖啶酯的量成正比,而异鲁米诺和吖啶酯的量是反映吖啶酯的量成正比,而异鲁米诺和吖啶酯的量是反映 复合物的量。复合物的量。 缺点:缺点:闪烁性发光,光信号不稳定。闪烁性发光,光信号不稳定。发光时间集发光时间集 中在加入过氧化物或碱的短时间内。中在加入过氧化物或碱的短时间内。 27 发光发光 磁微粒磁微粒 被测抗原被测抗原 + 抗体抗体 + 带吖啶酯标带吖啶酯标 记物抗体记物抗体 冲洗后冲洗后 (1 1) 加入加入H H2 2O O2 2 (pH10) 直接化学发光的机理直接化学发光的机理 吖啶酯化学发光系统吖啶酯化学发光系统 28 化学发光标记免疫分析法化学发光标记免疫分析法 西门子西门子
17、(拜耳拜耳) ADVIA Centaur XP 西门子西门子(拜耳拜耳) ACS:180 29 化学发光酶免疫分析(化学发光酶免疫分析(chemiluminescence enzyme immunoassay,CLEIA) 是用参与催化某一化学发光反应的酶如辣根过氧化物是用参与催化某一化学发光反应的酶如辣根过氧化物 酶(酶(HRP)或碱性磷酸酶)或碱性磷酸酶(ALP)来标记抗原或抗体,来标记抗原或抗体, 形成抗体形成抗体-待测抗原待测抗原-酶标记抗体复合物,加入发光剂,酶标记抗体复合物,加入发光剂, 酶催化和分解底物发光,计算机光电处理得出具体浓酶催化和分解底物发光,计算机光电处理得出具体浓
18、度数据度数据 2.化学发光酶免疫分析法化学发光酶免疫分析法 30 碱性磷酸酶标记化学发光免疫分析示意图碱性磷酸酶标记化学发光免疫分析示意图 31 化学发光酶免疫分析法化学发光酶免疫分析法 碱磷酶(碱磷酶(APAP)标记的)标记的CLIACLIA 代表公司:贝克曼库尔特代表公司:贝克曼库尔特 经典机型:经典机型:Access Access2Access Access2 原理:磁微粒技术原理:磁微粒技术 酶放大化学发光技术酶放大化学发光技术 AMPPDAMPPD为发光底物为发光底物 32 化学发光酶免疫分析法化学发光酶免疫分析法 碱磷酶(碱磷酶(AP)标记的)标记的CLIA 代表公司:代表公司:D
展开阅读全文