基因工程-绪论课件.ppt
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1、基因工程基因工程(Gene Engineering)1ppt课件生物学院生物学院教材及参考书目教材及参考书目教材教材 1.何水林主编何水林主编.基因工程基因工程.科学出版社,科学出版社,2008.参考书目参考书目 1.李立家,肖庚富李立家,肖庚富基因工程基因工程2004.2.吴乃虎吴乃虎.基因工程原理基因工程原理(上下册上下册).科学出版社科学出版社(第二版第二版),2002.3.王关林王关林.植物基因工程植物基因工程.科学出版社,科学出版社,2002.4.王金发王金发.分子生物学与基因工程习题集分子生物学与基因工程习题集.科学出版社科学出版社.2000.5.J.萨姆布鲁克和萨姆布鲁克和 D.
2、W.拉塞尔著、黄培堂等译拉塞尔著、黄培堂等译分子克隆实验指分子克隆实验指南南1999年年.6.F Ausubel等著、颜子颖等译等著、颜子颖等译.精编分子生物学实验指南精编分子生物学实验指南1998.2ppt课件精品资料 你怎么称呼老师?如果老师最后没有总结一节课的重点的难点,你是否会认为老师的教学方法需要改进?你所经历的课堂,是讲座式还是讨论式?教师的教鞭“不怕太阳晒,也不怕那风雨狂,只怕先生骂我笨,没有学问无颜见爹娘”“太阳当空照,花儿对我笑,小鸟说早早早”生物学院生物学院绪绪 论论 生物技术包括四大工程技术生物技术包括四大工程技术 基因工程技术、细胞工程技术、蛋白质及酶工程技术、基因工程
3、技术、细胞工程技术、蛋白质及酶工程技术、发酵工程技术发酵工程技术 基因工程技术基因工程技术是生物技术的核心和关键,是主导技术是生物技术的核心和关键,是主导技术 细胞工程技术细胞工程技术是生物技术的基础是生物技术的基础 蛋白质及酶工程技术蛋白质及酶工程技术是生物技术的条件是生物技术的条件 发酵工程技术发酵工程技术是生物技术获得最终产品的手段是生物技术获得最终产品的手段 生物技术是一个综合技术体系,其中生物技术是一个综合技术体系,其中基因工程基因工程和和细胞细胞工程工程技术最为突出。技术最为突出。5ppt课件生物学院生物学院一、基因(一、基因(gene)1.基因基因生命的载体生命的载体 基因是生物
4、遗传信息的载体,它是由核苷酸序列基因是生物遗传信息的载体,它是由核苷酸序列(通通常为常为DNA)组成的生物大分子,决定着生物的所有性状组成的生物大分子,决定着生物的所有性状、行为和疾病的发生。、行为和疾病的发生。6ppt课件生物学院生物学院 基因工程理论依据基因工程理论依据 u不同基因具有相同的物质基础不同基因具有相同的物质基础 u基因是可以切割的基因是可以切割的 u基因是可以转移的基因是可以转移的 u多肽与基因之间存在对应关系多肽与基因之间存在对应关系 u遗传密码是通用的遗传密码是通用的 u基因通过复制把遗传信息传给下代基因通过复制把遗传信息传给下代 7ppt课件生物学院生物学院2.2.基因
5、基因是福音是福音 发现了某疾病基因,就可以对患者进行基因水平上的发现了某疾病基因,就可以对患者进行基因水平上的治疗,从根本上根除疾病的危害。治疗,从根本上根除疾病的危害。3.3.基因是企业家的聚宝盆基因是企业家的聚宝盆 巨大的市场:基因工程药物巨大的市场:基因工程药物潜在的市场:肥胖基因(潜在的市场:肥胖基因(20002000万美元)万美元)8ppt课件生物学院生物学院4.基因是铁的证据基因是铁的证据 基因分析在重大犯罪案件、历史案件的侦破中是最终确基因分析在重大犯罪案件、历史案件的侦破中是最终确定罪犯的有力工具,当事人的头发、血、皮屑的基因分析定罪犯的有力工具,当事人的头发、血、皮屑的基因分
6、析都将作为确凿证据。都将作为确凿证据。9ppt课件生物学院生物学院基因工程的内容与应用基因工程的内容与应用 基因工程概念基因工程概念 基因工程基因工程(gene engineering):(gene engineering):就是对不同生物的遗就是对不同生物的遗传物质,在体外进行剪切、组合和拼接,使遗传物质重新传物质,在体外进行剪切、组合和拼接,使遗传物质重新组合,然后通过载体转入微生物、植物和动物细胞内,进组合,然后通过载体转入微生物、植物和动物细胞内,进行无性繁殖,并使所需要的基因在细胞中表达,产生出人行无性繁殖,并使所需要的基因在细胞中表达,产生出人类所需要的产物或组建成新的生物类型。类
7、所需要的产物或组建成新的生物类型。又名遗传工程(又名遗传工程(Genetic Engineering)DNA重组技术重组技术(Recombinant DNA Techniques)分子克隆(分子克隆(Molecular Cloning)10ppt课件生物学院生物学院基因工程的内容与应用基因工程的内容与应用基因工程最突出的优点基因工程最突出的优点 就是打破了常规育种难以突破的物种之间界限,可使就是打破了常规育种难以突破的物种之间界限,可使原核生物与真核生物之间、动物与植物之间、甚至人与其原核生物与真核生物之间、动物与植物之间、甚至人与其他生物之间的遗传信息进行重组和转移。他生物之间的遗传信息进行
8、重组和转移。缩短了新物种出现的时间。缩短了新物种出现的时间。11ppt课件生物学院生物学院基因工程研究的主要内容基因工程研究的主要内容基因工程的基本操作程序基因工程的基本操作程序供 体 细 胞目 的 基 因载 体重 组 D N A 分 子转 化 细 胞受 体 细 胞多 肽 药 物疫 苗、抗 体基 因 治 疗基 因 诊 断 转 基 因 动 物(畜 牧 业、渔 业 生 物 反 应 器)转 基 因 植 物(农 业、林 业 生 物 反 应 器)冶 金、环 保轻 工、食 品12ppt课件生物学院生物学院 生生 物物 材材 料料人工合成人工合成cDNA文库文库mRNA目的基因目的基因基因组文库基因组文库D
9、NA克隆载体克隆载体酶切酶切+重组重组DNA受体细胞受体细胞导入导入克隆子克隆子筛选筛选转基因生物转基因生物13ppt课件生物学院生物学院基因工程一般操作步骤基因工程一般操作步骤1.从生物有机体基因组从生物有机体基因组中,分离带有目的基因中,分离带有目的基因DNA片段。片段。2.将带有目的基因的外将带有目的基因的外源源DNA片段连接到能片段连接到能够自我复制的并具有选够自我复制的并具有选择标记的载体分子上,择标记的载体分子上,形成重组形成重组DNA分子。分子。3.将重组将重组DNA分子转分子转移到适当的受体细胞移到适当的受体细胞并与之一起增殖。并与之一起增殖。14ppt课件生物学院生物学院基因
10、工程一般操作步骤基因工程一般操作步骤4.4.从大量的细胞繁殖群体从大量的细胞繁殖群体中,筛选出获得了重组中,筛选出获得了重组DNADNA分子的受体细胞分子的受体细胞,并筛选出并筛选出已经得到扩增的目的基因已经得到扩增的目的基因。5.5.将目的基因克隆到表将目的基因克隆到表达载体上,导入寄主细胞达载体上,导入寄主细胞,使之在新的遗传背景下,使之在新的遗传背景下实现功能表达,研究核酸实现功能表达,研究核酸序列与蛋白质功能之间的序列与蛋白质功能之间的关系。关系。15ppt课件基因操作的基本步骤基因操作的基本步骤提取目的基因目的基因与运载体结合目的基因导入受体细胞目的基因表达分离出质粒并用限制酶进行切
11、割16ppt课件基因工程四大要素:基因工程四大要素:供体基因供体基因 载体载体 工具酶工具酶 受体细胞受体细胞 (细菌、植物和动物)(细菌、植物和动物)生物学院生物学院17ppt课件生物学院生物学院基因工程的发展历程和理论基础基因工程的发展历程和理论基础一、基因工程诞生的理论基础一、基因工程诞生的理论基础(一)理论上的三大发现(一)理论上的三大发现 1.DNA是生物的遗传物质是生物的遗传物质 (基因工程的先导)(基因工程的先导)1944年,美国微生物年,美国微生物学家学家O.T.Avery首次证实首次证实遗传物质的基础是遗传物质的基础是DNA,基因位于基因位于DNA上。上。肺炎双球菌转化实验肺
12、炎双球菌转化实验18ppt课件生物学院生物学院基因工程的发展历程和理论基础基因工程的发展历程和理论基础35S标记蛋白质标记蛋白质 32P标记标记 DNA 1952年年Alfred Hershy和和Marsha Chase分别用放射性分别用放射性同位素标记噬菌体同位素标记噬菌体噬菌体转染实验噬菌体转染实验进一步证明遗传物质是进一步证明遗传物质是DNA19ppt课件生物学院生物学院基因工程的发展历程和理论基础基因工程的发展历程和理论基础35S 标记外壳蛋白质标记外壳蛋白质,感染后放射标记不进入大肠杆菌细胞感染后放射标记不进入大肠杆菌细胞 32P 标记标记 DNA,感染后放射标记进入大肠杆菌细胞感染
13、后放射标记进入大肠杆菌细胞 20ppt课件生物学院生物学院基因工程的发展历程和理论基础基因工程的发展历程和理论基础2.揭示了揭示了DNA分子的双螺旋结构和半保留复制机制分子的双螺旋结构和半保留复制机制 1953年年James D.Watson和和Francis H.C.Crick揭示揭示了了DNA分子的分子的双螺旋结构双螺旋结构和和半保留复制机制。半保留复制机制。21ppt课件生物学院生物学院基因工程的发展历程和理论基础基因工程的发展历程和理论基础Francis Crick&James Watson 22ppt课件生物学院生物学院基因工程的发展历程和理论基础基因工程的发展历程和理论基础1966
14、年年Nireberg等破译了全部等破译了全部64个遗传密码个遗传密码3.遗传密码的破译和遗传信息传递方式的确定遗传密码的破译和遗传信息传递方式的确定23ppt课件生物学院生物学院基因工程的发展历程和理论基础基因工程的发展历程和理论基础DNAmRNAProteintranscriptiontranslation1957年年Crick又提出了遗传信息传递的又提出了遗传信息传递的“中心法则中心法则”(central dogma),揭示了遗传信息的流向和表达问题。,揭示了遗传信息的流向和表达问题。24ppt课件生物学院生物学院基因工程的发展历程和理论基础基因工程的发展历程和理论基础一、基因工程诞生的理
15、论基础一、基因工程诞生的理论基础(二)技术上的三大发明(二)技术上的三大发明 1.限制性核酸内切酶的发现与限制性核酸内切酶的发现与DNA切割切割 1970年年H.O.Smith等分离出第一种限制性核酸内切酶。等分离出第一种限制性核酸内切酶。Werner Arber 理论预见限制酶理论预见限制酶Daniel Nathans 用限制用限制酶切得酶切得SV40 DNA片断片断Hamilton O.Smith 得到第一个限制酶得到第一个限制酶1978年年Nobel生理或医学奖生理或医学奖 25ppt课件生物学院生物学院基因工程的发展历程和理论基础基因工程的发展历程和理论基础2.DNA连接酶的发现与连接
16、酶的发现与DNA片段的连接片段的连接 1967年世界上年世界上5个实验室几乎同时发现个实验室几乎同时发现DNA连接酶;连接酶;1970年年Khorana实验室发现实验室发现T4 DNA连接酶。连接酶。3.基因工程载体的研究与应用基因工程载体的研究与应用 1972年前后使用小分子量的细菌质粒和年前后使用小分子量的细菌质粒和 噬菌体作载体。噬菌体作载体。在细菌细胞里的大量扩增。在细菌细胞里的大量扩增。26ppt课件理论上的三大发现:理论上的三大发现:证明了生物的遗传物质是证明了生物的遗传物质是DNA(基因工程的先导)(基因工程的先导)DNA的双螺旋结构和半保留复制机理的双螺旋结构和半保留复制机理遗
17、传信息的传递方式(中心法则)遗传信息的传递方式(中心法则)技术上的三大发现:技术上的三大发现:限制性内切酶的发现限制性内切酶的发现(标志着(标志着DNA重组时代的开始)重组时代的开始)DNA连接酶的发现连接酶的发现载体的使用载体的使用生物学院生物学院27ppt课件生物学院生物学院基因工程的发展历程和理论基础基因工程的发展历程和理论基础二、基因工程的诞生二、基因工程的诞生(一)一)Berg的开创性实验的开创性实验 1972年美国斯坦福大学年美国斯坦福大学Berg博士领导的研究组用博士领导的研究组用EcoRI在体外对猿猴病毒在体外对猿猴病毒SV40的的DNA和和噬菌体噬菌体DNA分别分别酶切,然后
18、用酶切,然后用T4 DNA连接酶将两种酶切片段连接,结果连接酶将两种酶切片段连接,结果获得了获得了SV40和和噬菌体噬菌体DNA的重组的重组DNA分子,成功完成分子,成功完成了世界上了世界上第一次第一次DNA体外重组实验体外重组实验,并因此与,并因此与Gilbert、Sanger分享分享1980年度诺贝尔化学奖。年度诺贝尔化学奖。28ppt课件生物学院生物学院基因工程的发展历程和理论基础基因工程的发展历程和理论基础EcoRI recognition sites phage DNAEcoRI cuts DNA into fragments Sticky endSV40 DNAThe two fr
19、agments stick together by base pairing DNA ligaseRecombinant DNA1972年第一个年第一个DNA重组分子产生重组分子产生29ppt课件生物学院生物学院基因工程的发展历程和理论基础基因工程的发展历程和理论基础(二)二)Boyer-Cohen实验实验 1973年,年,Cohen等人将编码等人将编码Kan抗性基因质粒抗性基因质粒R6-5和和编码编码Tet抗性基因质粒抗性基因质粒pSC101混合后,加入混合后,加入EcoRI进行酶切,进行酶切,用用T4 DNA连接酶连接成重组连接酶连接成重组DNA分子,最后转化大肠杆分子,最后转化大肠杆菌,
20、结果某些转化菌落表现出既抗菌,结果某些转化菌落表现出既抗Kan又抗又抗Tet的双重抗性的双重抗性特性。从这种双抗性转化菌落的大肠杆菌中分离出的重组特性。从这种双抗性转化菌落的大肠杆菌中分离出的重组质粒质粒DNA带有完整带有完整pSC101分子和一个来自分子和一个来自R6-5质粒编码质粒编码Kan抗性基因抗性基因DNA片段。片段。后来又把非洲爪蟾核糖体基因片断同后来又把非洲爪蟾核糖体基因片断同pSC101质粒重组,质粒重组,转化大肠杆菌,并在菌体内成功转录出相应的转化大肠杆菌,并在菌体内成功转录出相应的mRNA。这。这是是第一次成功的基因克隆实验第一次成功的基因克隆实验。30ppt课件生物学院生
21、物学院基因工程的发展历程和理论基础基因工程的发展历程和理论基础Boyer-Cohen实验实验 Stanley Cohen 1986 Nobel生生理或医学奖理或医学奖Herb BoyerR6-5R6-5TetTetKanKan31ppt课件生物学院生物学院基因工程的诞生与发展基因工程的诞生与发展三、基因工程的发展三、基因工程的发展(一)艰难阶段一)艰难阶段 主要关注安全性问题主要关注安全性问题(二)逐渐成熟阶段二)逐渐成熟阶段 1977年第一次实现基因在原核生物中的表达年第一次实现基因在原核生物中的表达(三)迅速发展阶段三)迅速发展阶段 20世纪世纪80年代以后,高等动植物的遗传转化。年代以后
22、,高等动植物的遗传转化。32ppt课件生物学院生物学院基因工程的诞生与发展基因工程的诞生与发展发展过程中的重大事件:发展过程中的重大事件:1977年,年,E.coli中合成了人生长激素基因。中合成了人生长激素基因。1978-1979年,胰岛素基因在大肠杆菌中表达。年,胰岛素基因在大肠杆菌中表达。1982年,培育出了超级鼠。年,培育出了超级鼠。1985年,年,Horsch发明了植物基因工程的基本方法:发明了植物基因工程的基本方法:叶圆盘法,并获得转基因植株。叶圆盘法,并获得转基因植株。1990年,患有遗传免疫疾病的年,患有遗传免疫疾病的4岁女孩接受了基因疗法。岁女孩接受了基因疗法。1990年,年
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