发酵液的预处理讲解课件.ppt
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- 发酵 预处理 讲解 课件
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1、发酵液(或培养液)发酵液(或培养液)的预处理的预处理 预处理和固液分离的目的:预处理和固液分离的目的:1、分离细胞、菌体和其它悬浮颗粒、分离细胞、菌体和其它悬浮颗粒(细胞碎片、核酸细胞碎片、核酸和蛋白质的沉淀物和蛋白质的沉淀物)。2、除去部分可溶性杂质。、除去部分可溶性杂质。3、改变滤液的物理性质(降低粘度等),以利于后继、改变滤液的物理性质(降低粘度等),以利于后继操作。操作。总策略:总策略:1、胞外产物:胞外产物:应尽可能转移到液相中,常应尽可能转移到液相中,常用调用调pH至酸性或碱性的方法来达到。至酸性或碱性的方法来达到。2、胞内产物:、胞内产物:首先收集细胞、破壁,生化物首先收集细胞、
2、破壁,生化物质释放到液相,再分离细胞碎片。质释放到液相,再分离细胞碎片。3、通常,以含生化物质的、通常,以含生化物质的液相液相为出发点,进为出发点,进行后继操作。行后继操作。一、发酵液的预处理 1、改变液体物理性质,促进固液分离。、改变液体物理性质,促进固液分离。细菌及某些放线菌菌体细小,发酵液粘度大,不能直细菌及某些放线菌菌体细小,发酵液粘度大,不能直接过滤,由于菌体自溶,核酸、蛋白质及其它有机粘性物接过滤,由于菌体自溶,核酸、蛋白质及其它有机粘性物质的存在会造成滤液浑浊,滤速极慢,因此,在预处理中质的存在会造成滤液浑浊,滤速极慢,因此,在预处理中应采用应采用絮凝或凝聚絮凝或凝聚的方法,设法
3、增大悬浮液中固体粒子的的方法,设法增大悬浮液中固体粒子的大小,提高其沉降速度,或采用大小,提高其沉降速度,或采用稀释、加热稀释、加热等方法降低粘等方法降低粘度,以利于过滤。度,以利于过滤。必要性:必要性:2、发酵液杂质很多,其中影响最大的是高价无机、发酵液杂质很多,其中影响最大的是高价无机离子和杂蛋白,预处理时,应尽量除去。离子和杂蛋白,预处理时,应尽量除去。高价无机离子危害:高价无机离子危害:在采用离子交换法提炼时,影响树脂的交换在采用离子交换法提炼时,影响树脂的交换容量。容量。杂蛋白质的危害:杂蛋白质的危害:a)a)离子交换法和大网格树脂吸附法提炼时,会降离子交换法和大网格树脂吸附法提炼时
4、,会降低吸附能力,低吸附能力,b)b)萃取时,易产生乳化。萃取时,易产生乳化。c)c)过滤或膜过滤时,使滤速下降,膜受到污染。过滤或膜过滤时,使滤速下降,膜受到污染。(一)、凝聚和絮凝 凝聚凝聚:在中性盐电解质作用下:在中性盐电解质作用下,破坏胶体粒子破坏胶体粒子的分散状态使之聚集的过程。的分散状态使之聚集的过程。絮凝絮凝:指在某些高分子絮凝剂存在下,在悬浮:指在某些高分子絮凝剂存在下,在悬浮粒子之间产生粒子之间产生架桥架桥作用,使胶粒形成粗大的絮凝团作用,使胶粒形成粗大的絮凝团的过程。的过程。基本概念:基本概念:凝聚和絮凝技术能有效地改变细胞、菌凝聚和絮凝技术能有效地改变细胞、菌体和蛋白质等
5、胶体粒子的分散状态,使聚集体和蛋白质等胶体粒子的分散状态,使聚集起来,增大体积,以便于过滤。起来,增大体积,以便于过滤。常用于菌体细小而且粘度大的发酵液的常用于菌体细小而且粘度大的发酵液的预处理预处理。一般来说,反离子的价数越高,该值就越小,即凝聚能力越强。一般来说,反离子的价数越高,该值就越小,即凝聚能力越强。阳离子对带负电荷的胶粒凝聚能力的次序:阳离子对带负电荷的胶粒凝聚能力的次序:常用的凝聚剂电解质有:常用的凝聚剂电解质有:Al(OH)3 Al(OH)3、Fe3O4Fe3O4、Ca(OH)2Ca(OH)2、石灰等、石灰等 有机高分子聚合物絮凝剂有机高分子聚合物絮凝剂具有长链线状结构,是水
6、溶性具有长链线状结构,是水溶性聚合物,分子量高达数万至一千万以上,在长的链节上含有聚合物,分子量高达数万至一千万以上,在长的链节上含有相当多的活性功能团,可以带有多价电荷,也可以不带电性相当多的活性功能团,可以带有多价电荷,也可以不带电性。它们通过静电引力、范德华分子引力或氢键的作用,强它们通过静电引力、范德华分子引力或氢键的作用,强烈地吸附在胶粒的表面,一个高分子聚合物的许多链节分别烈地吸附在胶粒的表面,一个高分子聚合物的许多链节分别吸附在不同颗粒的表面上,产生吸附在不同颗粒的表面上,产生架桥联接架桥联接,生成粗大的絮团,生成粗大的絮团,这就是这就是絮凝作用絮凝作用。2、絮凝作用、絮凝作用A
7、.聚丙烯酰胺类衍生物聚丙烯酰胺类衍生物B.聚苯乙烯类衍生物聚苯乙烯类衍生物C.无机高分子聚合物无机高分子聚合物絮凝剂,如絮凝剂,如聚合铝盐和聚合铁盐聚合铝盐和聚合铁盐等。等。D.天然有机高分子絮凝剂:天然有机高分子絮凝剂:多聚糖类胶粘物,海藻酸钠,多聚糖类胶粘物,海藻酸钠,明胶、骨胶、壳多糖和脱乙酰壳多糖等。明胶、骨胶、壳多糖和脱乙酰壳多糖等。絮凝剂絮凝剂根据活性基团在水中解离情况不同,可分为根据活性基团在水中解离情况不同,可分为非离子型、阴非离子型、阴离子型离子型(含有羧基含有羧基)和阳离子型和阳离子型(含有胺基含有胺基)三类。三类。优点:优点:用量少,用量少,般以般以ppm计,絮凝体粗大,
8、分离效果好,计,絮凝体粗大,分离效果好,絮凝速度快、种类多,适用范围广。絮凝速度快、种类多,适用范围广。缺点:缺点:存在一定的毒性,特别是阳离子型聚丙烯酰胺。存在一定的毒性,特别是阳离子型聚丙烯酰胺。近年来还发展了近年来还发展了聚丙烯酸类阴离子聚凝剂聚丙烯酸类阴离子聚凝剂,它们无毒它们无毒,可用于食品和医药工业中。可用于食品和医药工业中。聚丙烯酰胺类絮凝剂:聚丙烯酰胺类絮凝剂:非离子型和阴离子型非离子型和阴离子型高分子絮凝剂,主要通过分子间引力和氢高分子絮凝剂,主要通过分子间引力和氢键产生键产生吸附架桥吸附架桥,常与无机电解质凝聚剂搭配使用。常与无机电解质凝聚剂搭配使用。首先加入无机电解质,使
9、悬浮粒子脱稳而凝聚,然后,再首先加入无机电解质,使悬浮粒子脱稳而凝聚,然后,再加入絮凝剂。凝聚作用为絮凝剂的架桥创造了良好的条件,从加入絮凝剂。凝聚作用为絮凝剂的架桥创造了良好的条件,从而,提高了絮凝效果而,提高了絮凝效果。这种包括这种包括凝聚凝聚和和絮凝絮凝机理的过程,常称为机理的过程,常称为混凝混凝。混凝:混凝:1)絮凝剂浓度(用量)絮凝剂浓度(用量)2)絮凝剂分子量絮凝剂分子量3)絮凝剂类型絮凝剂类型4)溶液的溶液的pH5)搅拌速度和时间搅拌速度和时间6)助凝剂助凝剂影响絮凝效果的因素:影响絮凝效果的因素:(二)、杂蛋白的去除方法 蛋白质等电点多在蛋白质等电点多在pH 4.0-5.5,此
10、时溶解度最小。但单,此时溶解度最小。但单靠等电点法不能将大部分蛋白质除去。靠等电点法不能将大部分蛋白质除去。1、等电点法:、等电点法:2、变性法、变性法:变性蛋白质溶解度较小。最常用方法是变性蛋白质溶解度较小。最常用方法是加热加热。只适于热稳定的物质。只适于热稳定的物质。大幅度改变大幅度改变pHpH,加酒精、丙酮等有机溶剂或表面活性剂加酒精、丙酮等有机溶剂或表面活性剂等。等。在酸性溶液中,蛋白质能与一些阴离子如在酸性溶液中,蛋白质能与一些阴离子如三氯乙三氯乙酸盐、水杨酸盐、钨酸盐、苦味酸盐、蹂酸盐、酸盐、水杨酸盐、钨酸盐、苦味酸盐、蹂酸盐、过氯酸盐过氯酸盐等形成沉淀。等形成沉淀。在碱性溶液,蛋
11、白质能与一些阳离子,如在碱性溶液,蛋白质能与一些阳离子,如Ag+Ag+,Cu2+Cu2+,Zn2+Zn2+,Fe3+Fe3+和和Pb2+Pb2+等形成沉等形成沉淀。淀。应用举例:应用举例:1、链霉素、链霉素发酵液,调至酸性发酵液,调至酸性(pH 3.0),加热至加热至70,维持维持l2h,能去除蛋白质,使过滤速度增大能去除蛋白质,使过滤速度增大10一一100倍,滤液粘度可降低倍,滤液粘度可降低1/6。2、柠檬酸、柠檬酸发酵液,加热至发酵液,加热至80以上,使蛋白质变性以上,使蛋白质变性凝固,降低发酵液粘度,大大提高过滤速度。凝固,降低发酵液粘度,大大提高过滤速度。举例:举例:1、四环类抗生素生
12、产中,采用、四环类抗生素生产中,采用黄血盐和硫酸锌黄血盐和硫酸锌的协同的协同作用生成作用生成亚铁氰化锌钾亚铁氰化锌钾的胶状沉淀来吸附蛋白质,取得很好的胶状沉淀来吸附蛋白质,取得很好的效果。的效果。2、枯草杆菌发酵液,常加入、枯草杆菌发酵液,常加入氯化钙和磷酸氢二钠氯化钙和磷酸氢二钠,生,生成磷酸钙盐沉淀,把蛋白质、菌体及不溶性粒子吸附并包裹成磷酸钙盐沉淀,把蛋白质、菌体及不溶性粒子吸附并包裹在其中而除去,从而加快了过滤速度。在其中而除去,从而加快了过滤速度。利用吸附作用除去蛋白质:利用吸附作用除去蛋白质:(三)高价无机离子的去除(三)高价无机离子的去除GaGa2+2+:加入草酸和草酸盐,生成草
13、酸钙;加入磷:加入草酸和草酸盐,生成草酸钙;加入磷酸盐,生成磷酸钙酸盐,生成磷酸钙MgMg2+2+:加入草酸(沉淀不完全);加入磷酸盐,:加入草酸(沉淀不完全);加入磷酸盐,生成磷酸镁;三聚磷酸钠(生成磷酸镁;三聚磷酸钠(NaNa5 5P P3 3O O1010),生成可),生成可溶性络合物溶性络合物FeFe3+3+:加入黄血盐,生成普鲁士兰沉淀:加入黄血盐,生成普鲁士兰沉淀二、二、发酵液的过滤发酵液的过滤 发酵液中含有大量菌体、细胞或细胞碎片以及残余的发酵液中含有大量菌体、细胞或细胞碎片以及残余的固体培养基成分,过滤就是将悬浮在发酵液中的固体颗粒固体培养基成分,过滤就是将悬浮在发酵液中的固体
14、颗粒与液体进行分离的过程。与液体进行分离的过程。定义:在一定的压力差下,利用多孔性介质截留固液悬浮液中的固体粒子,进行固液分离的方法称为过滤。1.1.过滤介质过滤介质 使滤液通过,截留固体颗粒并支撑滤饼的材料。要求其具有多孔性、耐腐蚀性及足够的机械强度。工业常用的过滤介质:织物介质、多孔性固体、粒状介质。无定形颗粒:无烟煤、砂、颗粒活性炭、铁矿砂等无定形颗粒:无烟煤、砂、颗粒活性炭、铁矿砂等成形颗粒:烧结金属、烧结塑料以及用合成树脂粘成形颗粒:烧结金属、烧结塑料以及用合成树脂粘结的硅砂、塑料颗粒等,做成圆筒形或板状。结的硅砂、塑料颗粒等,做成圆筒形或板状。非金属织补棉:化学纤维、玻璃纤维织品、
15、长纤维非金属织补棉:化学纤维、玻璃纤维织品、长纤维滤布、短纤维滤布。滤布、短纤维滤布。金属织布:不锈钢丝或铁丝等的织布。金属织布:不锈钢丝或铁丝等的织布。无纺品:纸、毡、石棉板、合成纤维无纺布等。无纺品:纸、毡、石棉板、合成纤维无纺布等。2.2.滤饼的压缩性及助滤剂滤饼的压缩性及助滤剂 (1)滤饼的压缩性:受力不变形的颗粒形成的滤饼称不可压缩性滤饼,反之则称为可压缩性滤饼。发酵液悬浮颗粒属于可压缩性颗粒。(2)助滤剂:减小过滤阻力、提高滤饼的刚性和孔隙率的惰性材料。(3)过滤推动力:过滤介质两侧的压力差。(4)过滤速率:单位时间内通过的滤液体积。3.3.过滤方式分类:过滤方式分类:常压过滤、加
16、压过滤、减压过滤、离心过滤。4 4、过滤基本方程式过滤基本方程式 衡量各种物质过滤特性的主要指标是滤饼的衡量各种物质过滤特性的主要指标是滤饼的重量比阻重量比阻r B(),表示单位滤饼厚度的阻力系数,与滤饼的结构特表示单位滤饼厚度的阻力系数,与滤饼的结构特性有关。性有关。对于不可压缩性滤饼,比阻值为常数,但对于可压缩性对于不可压缩性滤饼,比阻值为常数,但对于可压缩性滤饼,滤饼,r B是操作压力差的函数、一般可用下式表示:是操作压力差的函数、一般可用下式表示:由此可见由此可见滤饼的比阻值是随操作压力差的提高而增大的滤饼的比阻值是随操作压力差的提高而增大的。因此开始过滤时应注意不能很快提高压差,通常
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