高效液相色谱法课件3.ppt
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- 高效 色谱 课件
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1、第四讲 高效液相色谱法一.高效液相色谱法简介起源于20世纪60年代末至70年代初融合了经典液相色谱和气相色谱的优点。速度快、效率高、操作自动化适用于蛋白质、核酸、氨基酸、多糖类、植物色素、高聚物、染料及药物等物质的分析。比较高效液相色谱法 与经典液相色谱法高速 高效液相色谱法在分析速度上比经典液相色谱法快数百倍。高效 由于高效液相色谱应用了颗粒极细(几微米至几十微米直径)、规则、均匀的固定相,传质阻力小,分离效率高。高灵敏度 由于现代高效液相色谱仪普遍配有高灵敏度检测器,使其分析灵敏度比经典色谱有较大提高。高效液相色谱=高速液相色谱=高压液相色谱高效液相色谱法与气相色谱法比较 三方面的优点气相
2、色谱法分析对象只限于分析气体和沸点较低的化合物,它们仅占有机物总数的30。占有机物总数近70的高沸点、热稳定性差、分子量大的物质,主要采用高效液相色谱法进行分离和分析。气相色谱一般都在较高温度下进行的,而高效液相色谱法则经常可在室温条件下工作。二.高效液相色谱仪结构 高效液相色谱仪的结构一般可分为4个主要部分:高压输液系统,进样系统,分离系统和检测系统。此外还配有辅助装置:如梯度淋洗,自动进样及数据处理等。高效液相色谱仪工作过程 首先高压泵将贮液器中流动相溶剂经过进样器送入色谱柱,然后从控制器的出口流出。当注入欲分离的样品时,流经进样器的流动相将样品同时带入色谱柱进行分离,然后依先后顺序进入检
3、测器,记录仪将检测器送出的信号记录下来,由此得到液相色谱图。1、高压输液系统 一般由储液罐、高压输液泵、过滤器、压力脉动阻尼器等组成。由于高效液相色谱所用固定相颗粒极细,因此对流动相阻力很大,为使流动相较快流动,必须配备有高压输液系统。它是高效液相色谱仪最重要的部件,2、进祥系统隔膜注射进样器 在色谱柱顶端装一耐压弹性隔膜,进样时用微量注射器刺穿隔膜将试样注入色谱柱。优点:装置简单、价廉、死体积小,缺点是允许进样量小,重复性差。高压进样阀 目前多采用六通阀进样。进样量由定量管的体积严格控制,进样准确,重复性好,适于作定量分析,更换不同体积的定量管,可调整进样量。3、色谱柱是液相色谱的心脏部件,
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