医科大学精品课件：酶切实验（7年制） (2).ppt

DNA限制性内切酶双酶切分析限制性内切酶双酶切分析 原原 理理 限制性内切酶是一类具有严格识别位点，限制性内切酶是一类具有严格识别位点， 并在识别位点内或者附近切割并在识别位点内或者附近切割双链双链DNA 的脱氧核糖核酸酶的脱氧核糖核酸酶。 BamH GTC CAG G CCTAG GATCC G + GGATCC CCTAGG Hind GTCGAC CAGCTG GAC CTG + 平端切口平端切口 粘端切口粘端切口 Xba I: TCTAGA AGATCT Sal I: GTCGAC CAGCTG 实验步骤实验步骤 10Cutsmart Buffer 2 l 质粒质粒DNA 1 l Xba 1 l Sal 1 l H2O 15 l 20 l 3737水浴酶切水浴酶切2 2小时。小时。1% 琼脂糖凝胶电泳鉴定琼脂糖凝胶电泳鉴定。 NE buffer (pH 7.9) 150 mM NaCl 10 mM Tris-HCl 10 mM MgCl2 1 mM DTT 二硫苏糖醇二硫苏糖醇 基因组DNA加样 TE溶解液 10ul 6 x loading buffer 2ul DNA染料 1ul 质粒酶切体系加样 酶切体系 20ul 6 x loading buffer 4ul