食物过敏的实验诊断课件.ppt

1、食物过敏的实验诊断 血清sIgE检测的现在和未来 食物过敏 Food Allergy IgE-Dependent Immune Responses 食物不耐受 Food Intolerance与食物相关的超敏反应食物过敏（食物过敏（F Food Allergyood Allergy）临床诊断 询问病史 体内试验 体外试验SPTsIgE实验诊断实验诊断 tIgE sIgE McAb PcAb问题：蛋白含量与生物活性问题：蛋白含量与生物活性血清sIgE检测的现状免疫球蛋白E（IgE）的发现 花粉过敏患者 1819年，Dr.John Bostock 输血所致过敏性哮喘 1919年，Ramirz 免疫

2、球蛋白E（IgE）1967年，Ishizaka（瑞典）和Bennich&Jonansson（美国）Fig 免疫球蛋白E（IgE）分子结构免疫球蛋白E（IgE）的体内分布 结合型IgE抗体 与嗜碱性粒细胞或肥大细胞结合 游离型IgE抗体 未与嗜碱性粒细胞或肥大细胞结合图：IgE与IgE受体结合免疫球蛋白E（IgE）的检测（1）血清（游离）IgE的检测 总IgE水平 Total IgE，tIgE 特异性IgE水平 Specific IgE，sIgE牛奶蛋白 某一蛋白 抗原表位牛奶sIgE抗体：血清tIgE水平 放射免疫吸附试验（经典）radioimmnosorbent test，RIST血清tIg

3、E水平 化学发光免疫分析（现状）chemiluminescence immunoassay CLIA 优点优点 准确；快速血清sIgE水平 放射过敏原吸附试验（经典）radioallegosorbent test，RAST血清sIgE水平 荧光酶免疫分析 immuno-CAP血清sIgE水平 荧光酶免疫分析 金标准 单种过敏原 随机组合 定量分析血清sIgE水平 斑点酶联免疫吸附试验 Dot-ELISA（膜条）多种过敏原联合测定 廉价（符合国情）组合模式（固定）血清sIgE水平 酶联免疫吸附试验 ELISA（捕获法）免疫球蛋白E（IgE）的检测（2）外周血嗜碱性粒细胞激活试验 Basophil

4、 Activation Tests,BAT 细胞表面（结合型）sIgE 体内sIgE生物学活性检测嗜硷性粒细胞激活试验（BAT）临床标本 外周抗凝血（全血）特定过敏原将外周血已致敏的嗜碱性粒细胞激活 细胞鉴定与活化状态 流式细胞仪（FCM）检测特定标志嗜硷性粒细胞激活试验（BAT）FCM anti-CD123 anti-HLA-DR anti-CD63 or CD203c嗜硷性粒细胞激活试验（BAT）激活状态 CD63+嗜硷性粒细胞激活试验（BAT）卵巢发展蛋白 蟹黄 Eri s 2Fig rEris 2和CO诱导体外嗜碱性粒细胞激活结果血清sIgE检测的未来免疫球蛋白E（IgE）的检测 存在

5、问题 科学问题 过敏原的复杂性与血清sIgE的异质性 血清sIgE含量测定与致病活性测定 技术问题 现有方法不能满足临床需要（简单、快速、通量）光激化学发光分析（LICA）发光体系 发光微球（FG）接受能量 受体微球（A）感光微球（GG）提供能量 供体微球（D）血清tIgE检测 双抗夹心-LICA 免“洗涤”高-精密度Fig 血清tIgE定量分析原理tIgE血清tIgE检测(LICA)分析性能参数 批内精密度 5.3 5.8 批间精密度 5.3 9.0血清sIgE检测 蛋清sIgE 四种过敏原 受体微球-卵类黏蛋白（Gal d 1）受体微球-卵白蛋白（Gal d 2）受体微球-卵转铁蛋白（Ga

6、l d 3）受体微球-卵溶菌酶（Gla d 4）Fig B 血清蛋清sIgE检测模式血清sIgE检测（蛋清）-LICA 分析性能参数ELISALICA血清稀释曲线血清sIgE的精准检测 分子诊断（CRD）The determination of specific IgE to different allergens is called molecular diagnosis or component-resolved diagnosis(CRD)血清sIgE抗体谱 针对每种蛋白特异性抗体（sIgE）component-resolved diagnosis(CRD)Molecular diagn

7、osis will help to increase the sensitivity of the testing and,on the other hand,provides a more-detailed patient-tailored risk profile.血清sIgE的异质性 梭子蟹 过敏原sIgE抗体异质性血清sIgE抗体谱检测 过敏原组分sIgE抗体谱 精准sIgE检测 精准脱敏治疗天然总蛋白溶液 天然单一蛋白纯品 重组单一蛋白溶液已知抗原：血清sIgE和细胞表面sIgE细胞学方法生物学活性血清sIgE生物活性检测 嗜碱性粒细胞激活试验（BAT）血清sIgE介导 嗜碱性粒细胞 KU812（KU812F）标准过敏原血清sIgE生物活性检测 采用FCM技术 检测 特定过敏原激发 血清sIgE介导 KU812细胞激活试验血清sIgE生物活性检测 抗原表位谱 生物信息学 筛选技术血清sIgE生物活性检测 血蓝蛋白表位分析