革兰氏染色的过程课件.ppt

1、 细菌的革兰氏染色细菌的革兰氏染色目目 的的 要要 求求1.学习并掌握革兰氏染色法。学习并掌握革兰氏染色法。2.了解革兰氏染色原理。了解革兰氏染色原理。3.巩固显微镜的使用方法及无菌操作技术。巩固显微镜的使用方法及无菌操作技术。实实 验验 材材 料料v 菌种菌种 参考菌：金黄色葡萄球菌参考菌：金黄色葡萄球菌(G+),大肠杆菌大肠杆菌(G-)v 仪器仪器 显微镜显微镜v 材料材料 载玻片、香柏油、二甲苯、擦镜纸、吸水纸、染色缸等载玻片、香柏油、二甲苯、擦镜纸、吸水纸、染色缸等v 染料染料 草酸铵结晶紫染色液、卢戈氏碘液、草酸铵结晶紫染色液、卢戈氏碘液、95%乙醇、乙醇、0.5%番红染番红染色液色

2、液A.加小滴水加小滴水B.涂成薄层涂成薄层C.固定菌体固定菌体涂片制备过程革兰氏染色的过程革兰氏染色的过程制片制片v制片制片v初染初染v媒染媒染v脱色脱色v复染复染v镜检镜检主要操作步骤主要操作步骤细水冲洗结晶紫初染1-2min碘液媒染1min95%酒精脱色20s-30s蕃红复染2-3min细水冲洗细水冲洗 染色示范革兰氏染色的基本原理革兰氏染色的基本原理 根据细菌细胞壁的组分和结构不同，通过革根据细菌细胞壁的组分和结构不同，通过革兰氏染色法可将所有的细菌区分为两大类兰氏染色法可将所有的细菌区分为两大类G G+和和G G-革兰氏染色是丹麦医生革兰氏染色是丹麦医生 C.GramC.Gram（革兰

3、）于（革兰）于18841884年发明的一种鉴别不同类型细菌的染色方法年发明的一种鉴别不同类型细菌的染色方法细胞壁细胞壁革兰氏阳性菌革兰氏阳性菌(G+)革兰氏阴性菌革兰氏阴性菌(G-)厚度与强度厚度与强度厚、致密、坚韧薄、疏松肽聚糖数量、含量肽聚糖数量、含量多层、含量高、占细胞干重4090%单层、含量低、占细胞干重510%脂类含量脂类含量少、占细胞干重1-4%多、占细胞干重11-22%磷壁酸（垣酸）磷壁酸（垣酸）+-脂多糖、磷脂、脂蛋白脂多糖、磷脂、脂蛋白-+肽聚糖肽聚糖脂蛋白脂蛋白磷壁酸磷壁酸外膜外膜革兰氏染色原理.mp4革兰氏染色成败关键：革兰氏染色成败关键：酒精脱色，脱色不够将酒精脱色，脱

4、色不够将G-转变为转变为G+，脱色过度将，脱色过度将G+变成变成G-；涂片要均匀、薄；涂片要均匀、薄；菌龄影响染色，菌龄老、陈旧的细菌培养物，往往菌龄影响染色，菌龄老、陈旧的细菌培养物，往往G+转变转变成成G-，一般做革兰氏染色用，一般做革兰氏染色用18小时左右的细菌培养物，不要超小时左右的细菌培养物，不要超过过24小时，以免影响染色性。小时，以免影响染色性。革兰氏染色.mp4l革兰氏染色注意载玻片要洁净，滴无菌水和取菌不宜过多，涂片要均匀，不宜过厚；热固定温度不宜过高，否则会改变甚至破坏细胞形态；水洗时不要直接冲洗涂面，而应使水从载玻片的一端流下，水流不宜过急，过大，以免涂片薄层脱落。l革兰

5、氏染色结果是否正确，乙醇脱色是革兰氏染色操作的关键环节，脱色不足，阴性菌被误染成阳性菌，脱色过度，阳性菌被误染为阴性菌。注意事项注意事项实验报告1 1绘图说明染色结果。绘图说明染色结果。实验报告2 2思考题：思考题：l 你认为哪些环节会影响革兰氏染色结果的正确性？你认为哪些环节会影响革兰氏染色结果的正确性？其中最关键的环节是什么？其中最关键的环节是什么？l 你的染色结果是否正确？如果不正确，请说明原因。你的染色结果是否正确？如果不正确，请说明原因。l 进行革兰氏染色时，为什么特别强调菌龄不能太老，进行革兰氏染色时，为什么特别强调菌龄不能太老，用老龄细菌染色出现什么问题？用老龄细菌染色出现什么问题？