药物杂质检查课件.ppt

1、药物杂质检查 药物的纯度药物的纯度指药物纯净程度，反映药物质量的优劣指药物纯净程度，反映药物质量的优劣影响药物纯度的主要因素影响药物纯度的主要因素 杂质杂质控制药物纯度的主要方法控制药物纯度的主要方法 杂质检查杂质检查药物纯度的综合评价：药物纯度的综合评价：药物性状、理化常数药物性状、理化常数 杂质检查、含量测定杂质检查、含量测定 杂杂 质质1.Impurities1.Impurities，这样一类物质：，这样一类物质：有毒副作用 无毒副作用，但影响药物的稳定性和疗效 无毒副作用，也不影响药物的稳定性和疗效，但无治疗作用 生产过程中引入：生产过程中引入：l合成药的生产过程中合成药的生产过程中

2、未反应完全的原料、反应中间体、副产物l药物制剂的生产过程中药物制剂的生产过程中 水解、氧化等引入杂质l引入溶剂、酸碱性试剂、催化剂等引入溶剂、酸碱性试剂、催化剂等l从使用的金属工具中引入金属杂质从使用的金属工具中引入金属杂质l生产条件不当，引入低效、无效的药物异构生产条件不当，引入低效、无效的药物异构体或晶型体或晶型2.2.杂质的来源杂质的来源 贮藏过程中引入：贮藏过程中引入：水解、氧化、水解、氧化、霉变、异构化、晶型改变药品保管不善或贮藏时间过长，会受外界条件的影响或微生物的作用杂质 易发生水解反应的结构：易发生水解反应的结构：酯、内酯、酰胺、卤代烃、苷类等易发生氧化反应的结构：易发生氧化反

3、应的结构：醛、酚羟基、醚、巯基、亚硝基、双键等 3.3.杂质的种类杂质的种类 按杂质存在的广泛度分按杂质存在的广泛度分:一般杂质、特殊杂质l按杂质的结构分按杂质的结构分:无机杂质、有机杂质l按性质分按性质分:信号杂质、有害杂质 4.4.杂质的限量杂质的限量n 含义：含义：在不影响药物的疗效和不产生毒性的情况下，药物中可允许的杂质量。即药物中允许杂质存在的最大量，常用百分之几或百万分之几（ppm）来表示。n 杂质限量的确定：杂质限量的确定：综合考虑杂质的性质、生产所能达到的实际水平和各国药典的标准。n杂质的限量检查：杂质的限量检查：不要求测定杂质的含量，只需检查杂质是否超过限量。n杂质限量检查方

4、法：杂质限量检查方法：比较法比较法 取一定量被检杂质的标准溶液与一定量供试品在相同条件下处理后，比较反应结果。特点：注意“平行操作”，不需知道杂质的准确含量 灵敏度控制法灵敏度控制法 在供试品溶液中加入试剂，一定条件下反应后，观察有无正反应出现。以不出现正反应为合格。特点：不需对照品（标准溶液）n限量计算限量计算 杂质限量=(杂质最大允许量/供试品量)100%比较法:杂质限量=(标准溶液的浓度标准溶液的体积)/供试品量100%杂质量杂质量 杂质限量杂质限量 杂质量杂质量药品合格药品合格药品不合格药品不合格 药用规格药用规格 符合纯度要求的药品 只有两个等级：合格、不合格 严格控制对生物体产生毒

5、副作用或 生理作用的杂质 试剂规格试剂规格符合纯度要求的化学试剂多等级控制对试剂的使用目的有影响的杂质未考虑那些可能对生物体产生毒副作用或生理作用的杂质试剂规格的化学试剂不允许代替药用规格的药品使用热容Q：物体温度升高1需吸收的热量改用白田道夫法检查：避光操作：观察前，于暗处放置5min在程序控温下，测量供试品与参比物间的温度差与温度（或加热时间）关系的热分析法。需经炽灼破坏处理后，再依法检查。无毒副作用，也不影响药物的稳定性和疗效，但无治疗作用用于无杂质对照品的情况（限量检查）五氧化二磷：贵，不能反复使用炽灼温度：700-800oC严格控制对生物体产生毒副作用或例2：内标校正因子法药物性状、

6、理化常数加水振摇，使氯化物溶解，滤出药物等使可逆反应向右进行，增加配位离子的稳定性，提高反应的灵敏度。碘化钾与酸性氯化亚锡的作用第二节第二节 一般杂质的检查方法一般杂质的检查方法（一）原理（一）原理 药物：药物：对照：对照：（二）方法（二）方法 AgClAgNOCl3HNO3?AgClAgNONaCl3HNO3,Vc1.1.反应试剂：反应试剂：2.2.标准溶液：标准溶液：每1ml相当于10g的Cl-适宜比浊浓度：50-80g Cl-/50ml3.3.反应介质：反应介质：硝酸可溶解Ag2CO3、Ag3PO4和Ag2O沉淀，消除其干扰；加速AgCl沉淀的生成（三）方法讨论（三）方法讨论AgNO3试

7、液标准NaCl溶液硝酸酸性溶液4.4.观察背景及方法观察背景及方法 黑色，从比色管上方向下观察。5.5.其他其他 避光操作：避光操作：观察前，于暗处放置5min 避免Ag+析出单质Ag （氯化银见光易分解）（四）供试品的特殊处理（四）供试品的特殊处理1 1供试液混浊供试液混浊 用滤纸滤过；滤纸中的氯化物先用含硝酸的水洗净2 2供试液有颜色供试液有颜色l改变对照溶液的制法：供试液1份，加入AgNO3 试液，摇匀，放置，反复过滤至滤液澄清；再加入规定量标准NaCl液与水适量。n 排除颜色干扰：如高锰酸钾中的氯化物检查：先加乙醇适量，使高锰酸钾还原褪色后，再检查。3 3供试液含碘化物或本身为碘化物供

8、试液含碘化物或本身为碘化物l氧化还原反应排除法（H2O2/H+)l沉淀滤过法：AgI不溶于氨水，AgCl和AgBr溶于氨水4 4不溶于水的有机药物不溶于水的有机药物l加水振摇，使氯化物溶解，滤出药物等 不溶物后检查。l加热溶解供试品，放冷，析出沉淀，滤过后检查。5 5供试品含有机氯杂质供试品含有机氯杂质l氯代脂烃或氯在环的侧链上：碱性溶液中加热水解成Cl-，再检查。l氯连接于苯环上：经有机破环，变成无机氯化物，再检查。（一）原理（一）原理 药物：药物：对照：对照：（二）方法（二）方法?4HCl224BaSOBaClSO?4HCl242BaSOBaClSOKVc1.1.反应试剂：反应试剂：2.2

9、.标准溶液：标准溶液：每1ml相当于100g的SO42-适宜比浊浓度：100-500g SO42-/50ml 3.3.反应介质：反应介质：盐酸溶解BaCO3,Ba3(PO4)2沉淀，消除干扰。4.4.观察背景及方法：观察背景及方法：同氯化物（三）方法讨论（三）方法讨论BaCl2试液标准K2SO4溶液盐酸酸性溶液（四）供试品的特殊处理适于杂质结构不确定或无杂质对照品的情况AgI不溶于氨水，AgCl和AgBr溶于氨水未反应完全的原料、反应中间体、副产物Sb3+Sb(CN)63-且显色灵敏度相同或相近.加校正因子的主成分自身对照法药物：杂质检查、含量测定易发生氧化反应的结构：某波长处，药物有最大吸收

10、，而杂质无吸收在程序控温下，测量供试品与参比物间的温度差与温度（或加热时间）关系的热分析法。炽灼残渣加硝酸处理后，必须蒸干，除尽NO，否则HNO2氧化H2S析出硫，影响比色。4原子吸收分光光度法Tm:供试品的熔点 :药物的摩尔熔化热l供试液混浊供试液混浊过滤 滤纸需用含盐酸的水洗净滤纸中的硫酸盐l供试液有颜色等供试液有颜色等:处理方法同氯化物（四）供试品的特殊处理（四）供试品的特殊处理 1.1.原理原理 药物：药物：对照：对照：2.2.方法方法?36HClFeFe FeSCNFe6SCN 3o23（一）硫氰酸盐法（一）硫氰酸盐法（Chp、USP）36HCl3SCNFe6SCNFeVc?l反应试

11、剂：反应试剂：l 硫氰酸铵 NH4(SCN）2)2)标准溶液：标准溶液：硫酸铁铵硫酸铁铵 FeNH4(SO4)212H2O配制，同时加入硫酸硫酸防止铁盐水解。每ml标准铁溶液相当于10g Fe3+适宜目视比色浓度：10-50g Fe3+/50ml3)3)反应介质：反应介质：盐酸酸性溶液，可防止Fe3+水解 3.方法讨论方法讨论 4)4)观察方法观察方法5)5)其他其他l 加入氧化剂过硫酸铵的作用：加入氧化剂过硫酸铵的作用：将Fe2+氧化成Fe3+防止光线将硫氰酸铁离子还原或分解褪色加硝酸也可氧化Fe2+为Fe3+，但须加热除去HNO2 Because:HNO2+SCN-+H+NO.SCN+H2

12、O红色l 硫氰酸铵应过量硫氰酸铵应过量使可逆反应向右进行，增加配位离子的稳定性，提高反应的灵敏度。消除其它阴离子与铁盐形成配位化合物而引起的干扰。l 供试品溶液与对照溶液色调不一致，或硫氰供试品溶液与对照溶液色调不一致，或硫氰酸铁配位离子呈色较浅：酸铁配位离子呈色较浅：可分别移入分液漏斗中，加正丁醇或异戊醇提取，分取醇层比色。l 具环状结构的有机药物：具环状结构的有机药物：需经炽灼破坏处理后，再依法检查。l 干扰离子的影响干扰离子的影响 4供试品的特殊处理供试品的特殊处理 l原理：原理：Fe3+Fe2+20%枸 橼 酸 2m l 巯 基 醋 酸Fe2+NH3.H2O巯 基 醋 酸红 色药 物：

13、Fe3+20%枸 橼 酸 2m l 巯 基 醋 酸Fe2+NH3.H2O巯 基 醋 酸红 色对 照：（二）巯基醋酸法（二）巯基醋酸法（Bp）l讨论讨论 枸橼酸溶液的作用：与铁离子形成配位离子，防止在氨碱性溶液中产生Fe(OH)2和Fe(OH)3沉淀。1.适用对象适用对象（一）硫代乙酰胺法（一）硫代乙酰胺法 弱酸性水溶液中，供试液澄清、无色、对检查无干扰或经处理后对检查无干扰的药物。药物：药物：对照：对照：SHCONHCHOHCSNHCH223pH3.5223?PbSSHPbpH3.522?PbSSHPbNOpH3.523 Vc2.原理原理黄色-棕黑色 1 1）反应试剂：）反应试剂：2 2）标准

14、溶液：）标准溶液：配成贮备液，临用前稀释成10g Pb2+/ml的溶液 适宜目视比色浓度：10-20 g Pb2+/27ml3.方法方法4.方法讨论方法讨论3 3）反应介质：）反应介质：弱酸性溶液，即 pH 3.5醋酸盐溶液 pH 3.0-3.5时，PbS较完全 酸度增加，呈色变浅甚至不显色4 4）观察背景及方法）观察背景及方法硫代乙酰胺的弱酸性溶液Pb(NO3)2 溶液溶液经有机破环，变成无机氯化物，再检查。在程序控温下，测量供试品与参比物间的温度差与温度（或加热时间）关系的热分析法。配成贮备液，临用前稀释成10g Pb2+/ml的溶液增加AsH3的生成速度DSC 和 DTA 的作用需经炽灼

15、破坏处理后，再依法检查。检查药物中的不溶性杂质某波长处，杂质有最大吸收，而药物无吸收无毒副作用，也不影响药物的稳定性和疗效，但无治疗作用含钠及氟的有机药物用铂坩埚、石英坩埚或硬质玻璃蒸发皿differential scanning calorimetry,DSC醛、酚羟基、醚、巯基、亚硝基、双键等（一）硫氰酸盐法（Chp、USP）杂质对照品：用于测定校正因子药物：1 1）供试品有色）供试品有色 对照溶液管用稀焦糖溶液调色，使之与供试品溶液颜色一致。改变对照溶液的制法 加硫代乙酰胺试液，除去生成的PbS沉淀，再加标准Pb(NO3)2。改用第四法：微孔滤膜过滤法5供试品的供试品的特殊特殊处理处理

16、l 有微量Fe3+存在氧化H2S,析出S,产生混浊，影响比色。除去方法：加还原剂，Fe3+Fe+l 供试品为铁盐：Fe3+在盐酸中生成HFeCl62-，用乙醚提取除去，剩余微量铁在氨碱性溶液中，加KCN掩蔽，然后用第三法检查。2 2）供试品中有干扰物存在）供试品中有干扰物存在l 供试品本身能生成不溶性硫化物 如葡萄糖酸锑钠中铅盐的检查，先加10%氢氧化钠试液和氰化钾试液，再用第三法检查。Sb3+Sb(CN)63-1适用对象适用对象 难溶于水、乙醇、稀酸及碱性水溶液的药物（药物沉淀，干扰）能与重金属离子形成配位化合物的有机药物（重金属离子不能游离）含芳环、杂环的有机药物(二二)炽灼破坏法炽灼破坏

17、法2原理原理 将供试品炽灼破坏后，加硝酸加热处理，使有机药物分解，重金属与盐酸形成氯化物，再按第一法检查。HNO3HClH2OHNO3HClH2O样品：S置坩埚中500-600oC炽灼残渣重金属的氯化物NH3 H2O调节pH至7.0左右pH3.5缓冲液 2.0ml依第一法检查对照：空坩埚 H2SO4pH3.5缓冲液 2.0ml依第一法检查NH3 H2O 标准Pb(NO3)2溶液（取配制供试品溶液的试剂，置坩埚中蒸干后，依法检查）除尽 HNO23方法方法 u炽灼温度应控制在500-600；u炽灼残渣加硝酸处理后，必须蒸干，除尽NO，否则HNO2氧化H2S析出硫，影响比色。u含钠及氟的有机药物用铂

18、坩埚、石英坩埚或硬质玻璃蒸发皿（可腐蚀瓷坩埚，带入大量重金属）4.方法讨论方法讨论 1.适用对象适用对象（三）硫化钠法（三）硫化钠法 适用于溶于碱性水溶液而不溶于稀酸或在稀酸中生成沉淀的药物。如磺胺类、巴比妥类。药物：药物：对照：对照：2.原理原理3.方法方法4.方法讨论方法讨论 反应试剂：硫化钠 反应介质：NaOH碱性溶液 1.适用对象适用对象（四）微孔滤膜法（四）微孔滤膜法 重金属限量很低的药物。l 依一法检查，重金属生成的硫化物富集于微孔滤膜上l 比较供试品和一定量标准铅溶液同法处理后产生的色斑深浅。2.原理原理 AsH3H2AsO33-Zn+HCl+1.适用对象适用对象（一）古蔡氏法（

19、一）古蔡氏法适用于不含Sb或含Sb量小于100g的供试品。遇溴化汞试纸产生黄色-棕色砷斑，与一定量标准砷溶液生成的砷斑比较，不得更深。2.原理原理 1）反应试剂）反应试剂2）标准溶液）标准溶液 As2O3溶液,临用前稀释成1g As/ml 的标准砷溶液。ChP 规定：标准砷斑采用2ml标准砷溶液制备。3）反应介质）反应介质 盐酸酸性溶液3.方法方法4.方法讨论方法讨论 4）其他）其他l控制氢气发生的速度：控制氢气发生的速度：过快，过快，AsHAsH3 3逸出快逸出快 过慢，过慢，AsHAsH3 3逸出慢逸出慢 溶液的酸度 锌粒的粒度和用量 反应温度影响砷斑的色泽和清晰度可控制氢气发生的速度P5

20、4 请计算双氢青蒿素中有关物质的限量。供试品溶液如显杂质斑点，不得多于对照药物中杂质斑点数，颜色也不得更深。盐酸酸性溶液氧化H2S,析出S,产生混浊，影响比色。炽灼温度：700-800oC按内标法求出杂质相对于主成分的校正因子：例1：峰面积归一化法每1ml相当于100g的SO42-受热较稳定的药物P57 请计算前列腺素A1含量（用计算公式表示）。适用于不含Sb或含Sb量小于100g的供试品。重金属限量很低的药物。炽灼温度应控制在500-600；4原子吸收分光光度法水解、氧化等引入杂质 l碘化钾与酸性氯化亚锡的作用碘化钾与酸性氯化亚锡的作用 将5价砷还原为3价砷 增加AsH3的生成速度 抑制Sb

21、H3的生成，防止形成锑斑,干扰测定 使氢气均匀而连续地发生 l醋酸铅棉花的作用醋酸铅棉花的作用 吸收硫化氢（锌粒和供试品含少量硫化物）棉花填充的松紧度：60-80mg 填充60-80mm l导气管和溴化汞试纸应保持干燥，砷斑导气管和溴化汞试纸应保持干燥，砷斑应避光，并立即与标准砷斑比较。应避光，并立即与标准砷斑比较。（砷斑不稳定）砷斑不稳定）lFe3+氧化AsH3及KI和SnCl2，干扰测定。l先加酸性氯化亚锡试液，将Fe3+Fe2+5供试品的特殊处理供试品的特殊处理1）含硫药物）含硫药物 药物药物:硫化物，亚硫酸盐，硫代硫酸盐等用HNO3处理，将药物氧化成硫酸盐，去除干扰。2）含）含Fe3+

22、药物药物 锑盐被还原为锑化氢，与溴化汞试纸作用，产生灰色锑斑，干扰砷斑。改用白田道夫白田道夫法检查：2As2As3+3+3SnCl+3SnCl2 2+6HCl +6HCl 2As(2As(棕褐色棕褐色,胶态胶态)+3SnCl)+3SnCl4 4+6H+6H+与一定量标准砷溶液经同法处理后的颜色进行比较，不得更深。3）含锑药物）含锑药物 红色，胶态红色，胶态三乙胺三乙胺1.原理原理（二）二乙基二硫代氨基甲酸银法（二）二乙基二硫代氨基甲酸银法 silver diethyldithiocarbamate,Ag(DDC)AsH3的产生同古蔡法 AsH3+6Ag(DDC)As(DDC)3+6Ag+3HD

23、DC 2方法方法用目视法或在510nm波长处测定吸收度，与一定量标准砷溶液经同法处理后得到的有色溶液进行比较。检查药物中的有色杂质检查药物中的有色杂质检查药物中遇硫酸易碳化或易氧化呈色的有机杂质检查药物中遇硫酸易碳化或易氧化呈色的有机杂质检查药物中的不溶性杂质检查药物中的不溶性杂质用作注射剂的原料药一般应作此项检查用作注射剂的原料药一般应作此项检查 检查有机药物或挥发性无机药物中的非挥发性无机杂质（金属氧化物或盐类）炽灼残渣炽灼残渣：非挥发性无机杂质的硫酸盐。又称硫酸灰分硫酸灰分 炽灼温度：炽灼温度：700-800oC 炽灼残渣若留作重金属检查时，必须 控制在500-600oC 常见残留有机溶

24、剂：常见残留有机溶剂：苯、四氯化碳、二氯乙烷、二氯乙烯、三氯乙烷 GCGC法测定法测定 顶空进样：顶空进样：适用于挥发性大的组分分析；样品不需萃取、浓集等步骤，且可避免非挥发性组分对色谱柱的污染。十一十一.干燥失重测定法干燥失重测定法 常压恒温干燥法常压恒温干燥法 干燥剂干燥法干燥剂干燥法 减压干燥法减压干燥法 热分析法热分析法-水分，其它挥发性物质 u 适用对象适用对象 受热较稳定的药物u 干燥温度干燥温度 一般105 oC 含较多结晶水的药物:提高温度 含水较多且熔点较低的药物：先低温下加热，再逐渐升温至105oCu 干燥时间干燥时间 干燥至恒重为止（一）常压恒温干燥法（一）常压恒温干燥法

25、 u 适用对象适用对象 受热分解或易于挥发的药物u 干燥剂干燥剂 变色硅胶:含氯化钴 五氧化二磷：贵，不能反复使用 浓硫酸（二）干燥剂干燥法（二）干燥剂干燥法 u 适用对象适用对象 熔点低、受热不稳定或难驱除水分的药物u 优点优点 可降低干燥温度，缩短干燥时间（三）减压干燥法（三）减压干燥法 u 什么是热分析？什么是热分析？在程序控温下，测定物质的物理或化学变化与温度关系的一类仪器分析方法。（四）热分析法（四）热分析法u常用方法：常用方法：l热重分析法 thermogravimetric analysis,TGAl差示热分析法 differential thermal analysis,DTA

26、l差示扫描量热法 differential scanning calorimetry,DSC u在药物分析中的作用：测定药物的干燥失重（测定药物的干燥失重（TGA)TGA)测定药物的物理常数（如熔点）测定药物的物理常数（如熔点）对药物进行晶型鉴别和纯度检查对药物进行晶型鉴别和纯度检查用于药物的稳定性研究及制剂辅料的优选 热重分析法热重分析法u含义：在程序控温下，测量物质的质量质量与温度温度关系的热分析法。u仪器：热重分析仪 主要部件：程序升温炉中的微量分析天平。其稳定性不受温度影响。天平在惰性气流惰性气流下使用。u特点 样品用量少，速度快。适用于贵重药物或在空气中易被氧化药物的干燥失重测定。u

27、热重曲线 纵坐标:样品的质量 横坐标:温度或加热时间u微商热重曲线：dm/dtT m 差示热分析法差示热分析法u含义：在程序控温下，测量供试品与参比物间的温温度差度差与温度温度（或加热时间）关系的热分析法。u参比物：参比物：惰性惰性,加热时不发生相变和化学变化加热时不发生相变和化学变化 与被测物质有相似的与被测物质有相似的热容热容 煅烧过的煅烧过的AI2O3、MgO、石英砂、石英砂 热容热容Q：物体温度升高：物体温度升高1需吸收的热量需吸收的热量 Q=比热比热物质量物质量 EFuDTA曲线吸热峰吸热峰：倒峰放热峰：正峰发生物理变化，常得到尖峰；发生化学变化，常得到较宽的峰。差示扫描量热法差示扫

28、描量热法u 程序控温下，测量维持供试品与参比物的温度相同，系统所需输给样品和参比物的能量差随温度（或加热时间）变化的热分析法。能量差能量差:相当于供试品发生物理或化学变化时所吸收或释放的能量，即焓变。uDSC曲线 纵坐标：热流率mJ/s，热量/加热时间，dH/dt 横坐标：温度或加热时间 放热峰：倒峰 吸热峰：正峰含义：u DSC 和和 DTA 的作用的作用1.药物晶型的鉴别药物晶型的鉴别 依据：峰的位置、数目、形状 例 图3-6a、b2.药物的纯度检查药物的纯度检查l依据：依据：药品的纯度降低 熔点，熔距 l 杂质限量检查：杂质限量检查：将样品的将样品的DSC(DTA)曲线与标准样品（含限量

29、曲线与标准样品（含限量杂质的样品）的曲线进行比较。杂质的样品）的曲线进行比较。l 测定药物中存在的杂质含量：测定药物中存在的杂质含量：X2:杂质的摩尔分数杂质的摩尔分数 T0:纯药物的熔点纯药物的熔点 Tm:供试品的熔点供试品的熔点 :药物的摩尔熔化热药物的摩尔熔化热2002)(RTHTTXfmfH l什么情况下，什么情况下，DSC、DTA可用于检查药物可用于检查药物的纯度呢？的纯度呢？前提：前提：杂质的量小；杂质与药物形成低共熔混合物低共熔混合物，不形成固态溶液固态溶液。热重分析仪热重分析仪 热重分析仪热重分析仪 综合热分析系统综合热分析系统第三节第三节 特殊杂质检查方法特殊杂质检查方法 利

30、用药物和杂质在物理性质利用药物和杂质在物理性质上的差异上的差异 利用药物和杂质在化学性质利用药物和杂质在化学性质上的差异上的差异（自学）u旋光性：旋光性：u旋光度、比旋度：旋光度、比旋度：受温度温度及光源波长波长的影响u杂质限度检查杂质限度检查 药物有旋光性：规定比旋度范围 药物没有旋光性：规定比旋度一定值（一）旋光性质的差异（一）旋光性质的差异 固体样品（配成溶液）：C：g/100ml(按干燥品或无水物计算)液体样品：d:液体的相对密度ttLC100Ldu 旋光法定量依据旋光法定量依据 n某波长处，杂质有最大吸收，而药物无吸收 控制供试品溶液在此波长处的吸收度一定值n某波长处，药物有最大吸收

31、，而杂质无吸收 控制供试品溶液在此波长处的吸收度大小n杂质与药物的UV重叠 控制供试品溶液在两波长处的吸收度比值（二）对光吸收性质的差异（二）对光吸收性质的差异1 1UVUV法法 主要用于药物中无效或低效晶型的检查 晶型不同，IR会有区别 2 2红外分光光度法红外分光光度法3 3荧光分析法荧光分析法4 4原子吸收分光光度法原子吸收分光光度法 u 杂质对照品法u 供试品自身对照法u 杂质对照品法与供试品自身对照法并用u 对照药物法（三）吸附或分配性质的差异（三）吸附或分配性质的差异1 1TLCTLC法法杂质对照品法适用于已知杂质并能制备杂质对照品的情况方法：供试品溶液 杂质对照品溶液 供试品中所

32、含杂质的斑点颜色，不得深于相应杂质的对照斑点（主斑点）颜色点于同一薄层板同一薄层板上分析n适于杂质结构不确定或无杂质对照品的情况n要求：药物和杂质对显色剂显相同的颜色，且显色灵敏度相同或相近.n方法：对照溶液：供试品溶液的稀溶液 供试品溶液所显杂质斑点不得深于 对照溶液的主斑点颜色。当供试品中有多个杂质存在时，可配制几种限量的对照品溶液，进行比较（p55）。供试品自身对照法其他单个杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积（5.其他单个杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积（5.氧化还原反应排除法（H2O2/H+)differential scanning calorimetry,DSC：药物对照

33、品的峰面积控制供试品溶液在此波长处的吸收度一定值其稳定性不受温度影响。杂质对照品：用于测定校正因子P51 请计算杂质二羟基蒽醌的限量。测定药物的物理常数（如熔点）用滤纸滤过；AsH3的产生同古蔡法药物：杂质的吸收程度与药物不一致时，误差 适用于无杂质对照品，且杂质斑点颜色与药物斑点颜色不相同的情况 用与供试品相同的药物作对照品，此对照药物中的待检杂质符合限量要求，且稳定。判断方法：供试品溶液如显杂质斑点，不得多于对照药物中杂质斑点数，颜色也不得更深。对照药物法 适用于极性较大药物的分离分析2 2纸色谱法纸色谱法 峰面积归一化法峰面积归一化法 不加校正因子的主成分自身对照法不加校正因子的主成分自

34、身对照法 加校正因子的主成分自身对照法加校正因子的主成分自身对照法 内标校正因子法内标校正因子法 外标法外标法 3 3HPLCHPLC法法 用于粗略考察供试品中的杂质（限量检查）方法：供试品溶液进样分析，计算各杂质峰面积及其总和占总峰面积的百分率，不得超过限量 缺点：杂质的吸收程度与药物不一致时，误差较大;一般不宜用于微量杂质的检查 峰面积归一化法u 用于无杂质对照品的情况（限量检查）u 要求：杂质结构与主成分结构相似 此时杂质与主成分的响应因子基本相同。不加校正因子的主成分自身对照法u方法：对照溶液：供试品溶液的稀释液 供试品溶液各杂质峰面积及其总和,与对照溶液主成分的峰面积比较 常以不超过

35、主成分峰面积的x%控制杂质限量 用于有杂质对照品的情况（限量检查和含量测定）杂质对照品：用于测定校正因子 类似于“内标校正因子法”，药物对照品相当于内标。对照溶液：供试品溶液的稀释液加校正因子的主成分自身对照法 SSRRRRSSACACCACAf/S 代表药物对照品 R 代表杂质对照品l按内标法求出杂质相对于主成分的校正因子按内标法求出杂质相对于主成分的校正因子：l 限量检查限量检查：将供试品溶液的各杂质峰面积，分别乘以 相应的校正因子后，与对照溶液主成分的 峰面积进行比较。SASSxxCAAfC?：药物对照品的峰面积 ：药物对照品的浓度SCl 计算各杂质含量计算各杂质含量:l 考虑到：考虑到

36、：杂质与主成分的结构差异较大杂质与主成分的结构差异较大 ,响应因子可能不同所引起的测定误差响应因子可能不同所引起的测定误差 实例 红霉素A是红霉素的主要活性物质，红霉素B和C是红霉素的杂质，其中红霉素C是主要杂质，毒性比红霉素A大2倍，活性仅为红霉素A的20。中国药典（2005年版）采用此法检查红霉素B、C组分及有关物质。供试品溶液的浓度为4mg/ml，将供试品溶液稀释成浓度为0.2mg/ml的溶液为对照溶液,用对照溶液调节检测灵敏度,使主成分色谱峰的峰高约为满量程的20，分别进样供试品溶液和对照溶液，记录色谱图至主成分峰保留时间的4倍。红霉素B峰和红霉素C峰校正后的峰面积（红霉素A、红霉素B

37、、红霉素C的校正因子分别为1.0、0.7、1.0）均不得大于对照溶液主峰面积（5.0）红霉素烯醇醚校正后的峰面积（红霉素烯醇醚的校正因子为0.09）不得大于对照溶液主峰面积的3/5（3.0）其他单个杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积（5.0）用于有杂质对照品的情况（含量测定）用于有杂质对照品的情况（含量测定）杂质对照品：用于测定校正因子杂质对照品：用于测定校正因子内标：药物和杂质以外的化合物内标：药物和杂质以外的化合物杂质含量：杂质含量：ssRRRRSSACACCACAf/S 代表内标 R 代表杂质对照品SSxxCAAfC?内标校正因子法 用于有杂质对照品的情况（含量测定）外标法中的外标一

38、点法。p58 for example p58 for example外标法 用于挥发性特殊杂质的检查。p58 例1：峰面积归一化法 例2：内标校正因子法4.GC4.GC法法适于杂质结构不确定或无杂质对照品的情况红霉素B峰和红霉素C峰校正后的峰面积（红霉素A、红霉素B、红霉素C的校正因子分别为1.药品保管不善或贮藏时间过长，利用药物和杂质在物理性质上的差异Pb(NO3)2 溶液要求：药物和杂质对显色剂显相同的颜色，加硝酸也可氧化Fe2+为Fe3+，但须加热除去HNO2难溶于水、乙醇、稀酸及碱性水溶液的药物（药物沉淀，干扰）杂质的吸收程度与药物不一致时，误差碘化钾与酸性氯化亚锡的作用如葡萄糖酸锑钠

39、中铅盐的检查，先加10%氢氧化钠试液和氰化钾试液，再用第三法检查。（氯化银见光易分解）杂质与药物形成低共熔混合物，控制供试品溶液在此波长处的吸收度一定值AsH3+6Ag(DDC)本章基本要求本章基本要求 掌握杂质的来源和杂质的限量检查方法。掌握氯化物、硫酸盐、铁盐、重金属、砷盐、炽灼残渣、有机溶剂残留量等一般杂质检查方法。掌握利用旋光性质的差异、对光吸收性质的差异、吸附或分配性质的差异进行特殊杂质检查的方法。熟悉热分析法在药物分析中的作用。了解其它一般杂质和特殊杂质的检查方法思考题思考题 P51 请计算杂质二羟基蒽醌的限量。P54 请计算双氢青蒿素中有关物质的限量。P57 请计算前列腺素A1含量（用计算公式表示）。P58 请分别计算总杂质和氢溴酸 东莨菪碱杂质的限量。谢谢观看！谢谢观看！