药物分析芳酸及其酯类药物的分析课件.pptx

1、 芳酸及其酯类药物的分析芳酸及其酯类药物的分析 典型药物 鉴别试验 含量测定 体内药分 返回主目录练习与思考练习与思考 杂质检查第六章第六章 基本要求 基 本 要 求 一、掌握水扬酸类、苯甲酸类药物的鉴别一、掌握水扬酸类、苯甲酸类药物的鉴别和含量测定的基本原理与方法。和含量测定的基本原理与方法。二、熟悉其他方酸类药物鉴别和含量测定的二、熟悉其他方酸类药物鉴别和含量测定的基本原理与方法。基本原理与方法。三、了解本类药物的体内分析方法。三、了解本类药物的体内分析方法。返返 回回 一、水扬酸类一、水扬酸类 （一）典型药物结构（一）典型药物结构第一节第一节 典型药物分类与理化性典型药物分类与理化性质质

2、OHCOOH水杨酸（水杨酸（salycylic salycylic acidacid）COOHOCOCH3阿司匹林（阿司匹林（aspirin)aspirin)COONaOHNH2 对氨基水杨酸钠对氨基水杨酸钠（sodium aminosalicylate)sodium aminosalicylate)OCOCOOHOH双水杨酯（双水杨酯（salsalate)salsalate)COONHCOCH3OCOCH3贝诺酯（贝诺酯（benorilate)benorilate)1.1.酸性酸性 SA(PKa2.95)SA(PKa2.95)、ASA(PKa3.49)ASA(PKa3.49)、双水杨酯均有酸

3、性。双水杨酯均有酸性。2.2.溶解性溶解性:均为固体，有一定溶点。除钠盐溶于水，其余均为固体，有一定溶点。除钠盐溶于水，其余不溶。不溶。3.3.UVUV和和IRIR光谱特性：光谱特性：分子结构中具有苯环分子结构中具有苯环,有有UVUV和和IRIR特征吸特征吸收。收。4.4.芳伯氨基和酚羟基特性：芳伯氨基和酚羟基特性：5.5.水解特性：水解特性：ASAASA、双水杨酯及其制剂应检查水杨酸双水杨酯及其制剂应检查水杨酸,对氨基对氨基水水 杨酸钠和贝诺酯检查间氨基酚和杨酸钠和贝诺酯检查间氨基酚和对氨基酚。对氨基酚。（二）主要理化性质（二）主要理化性质 （一）典型药物结构（一）典型药物结构苯甲酸及其钠盐

4、苯甲酸及其钠盐(benzoic acid benzoic acid）二、苯甲酸类二、苯甲酸类COOH(Na)COOC2H5OH羟苯乙酯羟苯乙酯(ethylparoben)(ethylparoben)SO2COOHN(CH2CH2CH3)2丙磺舒丙磺舒(probenecid)(probenecid)NHCOOHCH3CH3甲芬那酸甲芬那酸(mefenamic acid)(mefenamic acid)（二）主要理化性质（二）主要理化性质 1.1.溶解性溶解性:均为固体，有一定溶点。除钠盐溶于水，其余不均为固体，有一定溶点。除钠盐溶于水，其余不溶。溶。2.2.UVUV和和IRIR光谱特性：光谱特性

5、：分子结构中具有苯环分子结构中具有苯环,有有UVUV和和IRIR特征吸特征吸收。收。3.3.具有酚羟基特性：具有酚羟基特性：4.4.分解反应特性：分解反应特性：苯甲酸钠分解为苯甲酸；丙磺舒分解为苯甲酸钠分解为苯甲酸；丙磺舒分解为SOSO2 2 5.5.酸性：酸性：苯甲酸、丙磺舒和甲芬那酸有游离的羧基苯甲酸、丙磺舒和甲芬那酸有游离的羧基 ，可用，可用 NaOH NaOH直接滴定测定其含量。直接滴定测定其含量。三、其他芳酸类三、其他芳酸类 (一一)典型药物结构典型药物结构ClOCCH3CH3COOC2H5氯贝丁酯（氯贝丁酯（clofibrateclofibrate）CHCH3COOHCHCH2CH

6、3CH3布洛芬（布洛芬（ibuprofenibuprofen）(二二)主要理化性质主要理化性质 1.1.溶解性：溶解性：水中不溶，有机溶剂溶解，氯贝丁酯为液水中不溶，有机溶剂溶解，氯贝丁酯为液 体；布洛芬为固体，有一定熔点。体；布洛芬为固体，有一定熔点。2.2.UVUV和和IRIR特征吸收光谱：特征吸收光谱：基于分子结构中具有苯环和基于分子结构中具有苯环和 特征基团。特征基团。返返 回回 一、与三氯化铁反应一、与三氯化铁反应 含有酚羟基药物可与含有酚羟基药物可与FeClFeCl3 3反应；能与反应；能与FeClFeCl3 3反应反应不不 一定一定含酚羟基含酚羟基.第二节第二节 鉴别试验鉴别试验

7、OHRAr-OH+FeCl3紫堇色铁配位化合物紫堇色铁配位化合物pH461.1.直接反应直接反应 SASA在中性或弱酸性条件下，与在中性或弱酸性条件下，与FeClFeCl3 3生成紫堇生成紫堇色配色配位化合物位化合物赭色赭色苯甲酸（中性或碱性水溶液）苯甲酸（中性或碱性水溶液）+FeClFeCl3 3COOHCOOOHOFeFe+4FeCl3()2 3+12HCl6 丙磺舒与丙磺舒与NaOHNaOH成钠盐后，在成钠盐后，在pH 5.06.0pH 5.06.0中与中与FeClFeCl3 3生成米黄色生成米黄色 布洛芬与高氯酸羟胺，布洛芬与高氯酸羟胺，N N，N-N-双环基己羧二亚胺及高氯酸铁反双环

8、基己羧二亚胺及高氯酸铁反应，应，即显紫色即显紫色 JPJP（1414）方法方法。基于分子中。基于分子中-COOHCOOH的结构。的结构。2.2.水解或分解后与三氯化铁反应水解或分解后与三氯化铁反应ASAASA水解成水解成SASA后与后与FeClFeCl3 3 反应，成紫堇色反应，成紫堇色 二、重氮化二、重氮化-偶合反应偶合反应 凡是分子结构中含有芳伯氨基或潜在芳伯氨基的药物均可反应。凡是分子结构中含有芳伯氨基或潜在芳伯氨基的药物均可反应。Ar-NH2 Ar-NH-COCH3NaNO2+HClAr-N2ClH2OpH=7pH7pH7OHAr-N=N-Ar-N=N-Ar-N=N-SO3HSO3H-

9、OH-OHNHCH2CH2NH2 1.1.直接反应直接反应 对氨基水杨酸钠对氨基水杨酸钠 2.2.水解后反应水解后反应 贝诺酯具有潜在芳伯氨基贝诺酯具有潜在芳伯氨基 3.3.甲芬那酸甲芬那酸与与对对-硝基苯重氮盐硝基苯重氮盐在在NaOHNaOH介质中介质中偶合偶合产产 生生橙红色橙红色。CH3CH3NHCOOHCOOHNHCH3CH3NaOHNNO2NN N+NO2 +K K2 2CrCr2 2O O7 7 深蓝色深蓝色 棕绿色棕绿色 甲芬那酸甲芬那酸+H H2 2SOSO4 4 黄色黄色 绿色绿色荧光荧光 JP(14)JP(14)三、氧化反应三、氧化反应 1.1.ASAASA酸水解生成酸水解

10、生成SASA和和CHCH3 3COOHCOOH：SASA的的mpmp为为156156 161 161。2.2.双水杨酯水解生成双水杨酯水解生成SASA：SASA的的mpmp为为158158。3.3.氯贝丁酯碱水解后氯贝丁酯碱水解后与盐酸羟胺生成异羟肟酸盐，与盐酸羟胺生成异羟肟酸盐，在弱酸条件下再与三氯化铁反应生成在弱酸条件下再与三氯化铁反应生成紫色紫色的异的异 羟肟酸铁。羟肟酸铁。四、水解反应四、水解反应 1.1.苯甲酸盐加热分解生成苯甲酸盐加热分解生成苯甲酸升华物，可用于苯甲酸升华物，可用于鉴别。鉴别。2.2.丙磺舒与丙磺舒与NaOHNaOH熔融分解成熔融分解成NaNa2 2SOSO3 3,

11、经硝酸氧化经硝酸氧化成成 Na Na2 2SOSO4 4。3.3.丙磺舒加热分解丙磺舒加热分解，生成，生成SOSO2 2气体，有臭味气体，有臭味五、分解产物反应五、分解产物反应 1.1.测定测定max max ；minmin。例如：布洛芬用例如：布洛芬用0.4%0.4%NaOHNaOH溶液制备溶液制备0.25mg/ml0.25mg/ml；max max ；265nm,273nm;265nm,273nm;minmin。245nm,271nm245nm,271nm。2.2.在在max max 处测定一定浓度供试液的吸收度处测定一定浓度供试液的吸收度A A。例如：羟苯乙酯，例如：羟苯乙酯，5 5g/

12、ml g/ml max max =295nm;A =295nm;A =0.480.48 3.3.在在max max 处测定供试液的百分吸收系数。处测定供试液的百分吸收系数。例如：贝诺酯在例如：贝诺酯在max max =240nm;E=240nm;E1%1%1cm1cm=730760=730760 六、紫外吸收光谱法六、紫外吸收光谱法 4.4.在规定的波长测定吸收度比值（即双波长吸在规定的波长测定吸收度比值（即双波长吸收度收度 比值法）比值法）例如：对氨基水杨酸钠例如：对氨基水杨酸钠1010g/ml;g/ml;A A265265/A/A299299 =1.561.56 =1.561.56 再例如

13、：甲芬那酸再例如：甲芬那酸1414g/ml;g/ml;A A278280278280/A/A348352348352 =1.151.30 =1.151.30 七、红外吸收光谱法七、红外吸收光谱法水杨酸的红外吸收图谱37002900cm-1N-H、O-H1660cm-1C=O1610,15701480,1440C=C775cm-1Ar-H返返 回回37002900cm-1N-H、O-H1640cm-1N-H1580cm-11500cm-1C=C1300cm-1C-N1188cm-1C-O对氨基水杨酸钠的红外吸收图谱第三节第三节 特殊杂质检查特殊杂质检查一、一、ASAASA中特殊杂质的检查中特殊杂

14、质的检查 1.1.溶液的澄清度溶液的澄清度 主要检查主要检查NaNa2 2COCO3 3中不溶物，有苯酚；醋酸中不溶物，有苯酚；醋酸苯酯；水杨酸苯酯；乙酰水杨酸苯酯。苯酯；水杨酸苯酯；乙酰水杨酸苯酯。ASAASA溶解因此溶解因此ASAASA溶溶液应澄清。液应澄清。2.2.游离水杨酸检查游离水杨酸检查 利用利用SA SA 可与可与FeClFeCl3 3呈色，用比色呈色，用比色法检查。法检查。3.3.易炭化物检查易炭化物检查 主要检查主要检查ASAASA中能被硫酸炭化显色的中能被硫酸炭化显色的低分子有机杂质。采用与标准比色液比色的方法检查。低分子有机杂质。采用与标准比色液比色的方法检查。主要检查成

15、品药物中可能残留的间氨基酚。间主要检查成品药物中可能残留的间氨基酚。间氨基氨基 酚易氧化呈色，而且有酚易氧化呈色，而且有毒性毒性，因此要严格控制。，因此要严格控制。双向滴定法：利用间氨基酚溶于双向滴定法：利用间氨基酚溶于乙醚，取乙醚，取3.03.0g g 样样品用乙醚提取品用乙醚提取0.020.02mol/LHClmol/LHCl测定方法测定方法 滴定滴定V V0.3ml0.3ml。HPLCHPLC法：采用内标法，以磺胺作法：采用内标法，以磺胺作内标（内标（USPUSP）二、对氨基水杨酸钠中特殊杂质的检查二、对氨基水杨酸钠中特殊杂质的检查THANK YOUSUCCESS2023-1-2731可

16、编辑三、羟苯乙酯中有关物质的检查三、羟苯乙酯中有关物质的检查BPBP收载的方法，由于杂质的结构不清，故采用收载的方法，由于杂质的结构不清，故采用TLCTLC法法中的中的供试品供试品自身对照法自身对照法：固定相：固定相：GFGF254254C C1818化学键合硅胶化学键合硅胶展开剂：甲醇展开剂：甲醇-水水-冰醋酸冰醋酸反相反相TLCTLC法法 甲芬那酸是以邻甲芬那酸是以邻-氯苯甲酸和氯苯甲酸和2 2，3-3-二甲基苯胺在二甲基苯胺在CuCu的催的催化下化下 缩合而成，因此成品药物中要检查缩合而成，因此成品药物中要检查铜盐铜盐及及有关物质有关物质。分光光度法：利用分光光度法：利用Cu Cu 2+

17、2+与与Na-Na-DDCDDC呈色后测定呈色后测定A A 1.1.铜盐检查法铜盐检查法 原子吸收分光光度法：原子吸收分光光度法：BPBP（20002000）2.2.有关物质的检查有关物质的检查 主要检查的是酰胺、二甲基苯胺和邻氯主要检查的是酰胺、二甲基苯胺和邻氯苯甲苯甲 酸各国药典均采用酸各国药典均采用TLCTLC法中的法中的自身高自身高低浓度对照低浓度对照法。法。四、甲芬那酸中特殊杂质的检查四、甲芬那酸中特殊杂质的检查五、氯贝丁酯中特殊杂质的检查五、氯贝丁酯中特殊杂质的检查n主要检查成品药物中残留的主要检查成品药物中残留的对氯酚对氯酚原料和原料和挥发性挥发性杂质杂质GC-FIDGC-FID

18、法法HPLCHPLC法：以对法：以对-羟乙基酚作内标，用正相羟乙基酚作内标，用正相HPLCHPLC2.2.挥发性杂质的检查方法挥发性杂质的检查方法 GCGC法法1.1.对氯酚检对氯酚检查查返返 回回 一、酸碱滴定法一、酸碱滴定法（一）直接滴定法（一）直接滴定法 基于本类药物基于本类药物-COOHCOOH；可用碱直接滴定，如可用碱直接滴定，如 ASA ASA的含量测定，其原理的含量测定，其原理如下：如下：第四节第四节 含量测定含量测定1.1.原原理：理：2.2.条件：条件：在中性乙醇中，以酚酞作指示剂；摩尔比为在中性乙醇中，以酚酞作指示剂；摩尔比为1:11:1。3.3.应应用：用：多国药典用于双

19、水杨酯、苯甲酸、丙磺舒、布洛芬测多国药典用于双水杨酯、苯甲酸、丙磺舒、布洛芬测定；定；USPUSP和和BPBP还用于甲芬那酸的测定。还用于甲芬那酸的测定。COOHOCOCH3+NaOHCOONaOCOCH3+H2O（二）水解后剩余滴定法（二）水解后剩余滴定法 1.1.ASAASA含量测定含量测定原理：原理：条件：条件：水溶液水溶液2NaOH+H2SO4Na2SO4 +2H2OCOOHOCOCH3+2NaOHCOONaOH+CH3COONa 具体试验：具体试验：I I 份份NaOHNaOHI I 份份NaOHNaOHV VV VO OV Vo-o-V V相当于相当于ASAASA消耗消耗 硫酸的硫

20、酸的mlml数数ASA%=(ASA%=(V Vo o V V)F FT/WT/W 100%100%2.2.羟苯乙酯的含量测定羟苯乙酯的含量测定2NaOH+H2SO4Na2SO4 +2H2OCOOC2H5HO+NaOHCOONaHO+C2H5OH（三）两步滴定法（三）两步滴定法1.1.ASAASA片的含量测定片的含量测定第一步为中和第一步为中和ASA +NaOHASA +NaOHASA-Na +HASA-Na +H2 2O O水解产物水解产物SA+NaOHSA+NaOHSA-Na+HSA-Na+H2 2O O酸性稳定剂酸性稳定剂+NaOHNaOH中性盐中性盐第二步为水第二步为水 解与测定解与测定

21、 2.2.氯贝丁酯含量测定氯贝丁酯含量测定 第一步：第一步：中和酸性杂质中和酸性杂质 第二步：第二步：水解与测定水解与测定ClOCH3CCOOC2H5CH3+NaOHClOCH3CCOONaCH3+C2H5OHNaOH +HClNaCl +H2O 二、亚硝酸钠滴定法二、亚硝酸钠滴定法 对氨基水杨酸钠有芳伯氨基对氨基水杨酸钠有芳伯氨基,在在HClHCl中与中与NaNONaNO2 2发生重氮化反应发生重氮化反应Ar-NHAr-NH2 2+NaNO+NaNO2 2+2HCl+2HClAr-NAr-N2 2Cl+NaCl+2HCl+NaCl+2H2 2O O 因此可用亚硝酸钠滴定法测定其含量，因此可用

22、亚硝酸钠滴定法测定其含量，此法在下章重点讨论。此法在下章重点讨论。三、双相滴定法三、双相滴定法 是指在水相和有机相中的滴定。如苯是指在水相和有机相中的滴定。如苯甲酸钠的含量测定：甲酸钠的含量测定：生成的苯甲酸不溶于水，终点生成的苯甲酸不溶于水，终点pHpH突跃不明显，不易突跃不明显，不易观察。观察。苯甲酸在乙醚中易溶，在水相中加入乙醚将滴定中苯甲酸在乙醚中易溶，在水相中加入乙醚将滴定中产生的苯甲酸萃取入醚层。因此用双相滴定可使反应完全终产生的苯甲酸萃取入醚层。因此用双相滴定可使反应完全终点明显。点明显。COONa+HClCOOH+NaCl （一）直接紫外分光光度法（一）直接紫外分光光度法 丙磺

23、舒片的测定：丙磺舒片的测定：Ch.P(2000)Ch.P(2000)在在HClHCl中，采用百分吸收系数中，采用百分吸收系数法。法。BP(1998)BP(1998)再盐酸再盐酸-乙醇乙醇,采用百分吸收系数法采用百分吸收系数法.USP(24)USP(24)用氯仿提取后，用氯仿提取后，采用对照品比较法。采用对照品比较法。四、紫外分光光度法四、紫外分光光度法（二）离子交换（二）离子交换-紫外分光光度法紫外分光光度法 氯贝丁酯及其制剂氯贝丁酯及其制剂 Ch.P(2000)Ch.P(2000)采用酸碱滴定法；当采用酸碱滴定法；当含有酸性杂质含有酸性杂质对氯酚对氯酚时，可采用时，可采用强碱性阴离子强碱性阴

24、离子交换树脂交换树脂吸附酸性杂质后，吸附酸性杂质后，在甲醇溶液中，在甲醇溶液中，226226nmnm波长处，采用对照品比较法。波长处，采用对照品比较法。具体计算：具体计算：W W1000 1000 1/100 1/100 1/100=Cu 1/100=Cu(g/ml)(g/ml)Au/As=Cu/C Cu Au/As=Cu/C Cu=C(Au/As)=C(Au/As)W(mg)=10 W(mg)=10 Cu=Cu=10 10 C(Au/As)C(Au/As)（三）柱分配色谱三）柱分配色谱-紫外分光光度法紫外分光光度法 USP(24)USP(24)采用此法同时测定采用此法同时测定ASAASA胶囊

25、胶囊中中 ASA ASA和和SASA。1.SA1.SA的限量测定的限量测定 色谱柱的制备；对照品溶液的制备；色谱柱的制备；对照品溶液的制备；供试供试 品溶液的制备。品溶液的制备。供试品液：CHCl3液洗脱液1：CHCl3洗脱液2：HAC-乙醚硅藻土，FeCl3-尿素 玻璃棉硅藻土，Na2CO3供试品液：CHCl3-HCl液洗脱液1：HAC-CHCl3 (1:10)10ml洗脱液2：HAC-CHCl3 (1:100)85ml 1-杂质先洗脱2-SA后洗脱max=306nm AuAs1-杂质先洗脱2-ASA后洗脱 max=280nmASA(mg)=C(Au/As)2.2.ASAASA的含量测定的含

26、量测定 色谱柱的制备；对照品溶液的色谱柱的制备；对照品溶液的制备；供试品溶液的制备。制备；供试品溶液的制备。Ch.P(2000)ASACh.P(2000)ASA的胶囊剂的含量测定采用此法。的胶囊剂的含量测定采用此法。USPUSP（2424）ASAASA片、对氨基水杨酸钠、甲芬那酸、片、对氨基水杨酸钠、甲芬那酸、布洛芬、丙磺舒等及其制剂，采用此法。布洛芬、丙磺舒等及其制剂，采用此法。五、五、HPLCHPLC法法（一）（一）ASAASA栓剂的含量测定栓剂的含量测定色谱条件：色谱条件：色谱柱色谱柱ODSCODSC1818；流动相为甲醇：流动相为甲醇：0.1%0.1%二乙胺：二乙胺：HACHAC (4

27、0:60:4);(40:60:4);检测波长检测波长280280nmnm；内标物为咖啡因。内标物为咖啡因。系统适用性试验：系统适用性试验：n n 2000;ASA2000;ASA与与SASA与内标物的与内标物的R R 1.5 1.5具体计算：具体计算：Cx=Rx/RCx=Rx/RR RC CR R W(g)W(g)1/50 1/50 2/50=Cx2/50=Cx W W测测=1250 =1250 CxCx标示量标示量%=%=W W测测/W W W W平平/标示量标示量100%100%=Cx Cx 1250 1250 W W平平/W W 标示量标示量100%100%色谱条件：色谱条件：色谱柱苯基

28、硅胶柱色谱柱苯基硅胶柱；流动相为流动相为NaHNaH2 2POPO3 3 0.1%0.1%HAC HAC液液-0.1%0.1%HAC HAC乙腈液乙腈液(50:50);(50:50);检测波长检测波长254254nmnm。系统适用性试验：系统适用性试验：n n 3900;T 3900;T 2.3;2.3;重复性重复性 RSDRSD1.5%1.5%具体计算：具体计算：（二（二）丙磺舒原料的含量测定丙磺舒原料的含量测定W W 1/100=Cu(mg/ml);Cu=Au/As 1/100=Cu(mg/ml);Cu=Au/As C C 供试品中丙磺舒供试品中丙磺舒(Mg)=100C(Au/As)Mg)

29、=100C(Au/As)返返 回回 一、血清中一、血清中ASAASA和和SASA浓度的浓度的HPLCHPLC法法 色谱条件：色谱条件：色谱柱为色谱柱为ODS-CODS-C1818(150mm(150mm 4.6mm,5m)4.6mm,5m)流动相为甲醇流动相为甲醇-水水-正丁醇正丁醇(30:20:1)(30:20:1)检测波长为检测波长为237237nmnm；内标物为苯甲酸。内标物为苯甲酸。血清样品预处理血清样品预处理 血清血清100 100 l +HClO450 l+l +HClO450 l+不同浓度不同浓度ASAASA和和SA+SA+内标液内标液 涡旋混合涡旋混合2 2min min 离心

30、离心5 5min min 取上清液取上清液20 20 ll进样。进样。第五节第五节 体内药物分析体内药物分析 回归方程：回归方程：以峰高比（以峰高比（H H标标/H H内内）对浓度回归）对浓度回归 ASA ASA的回归方程：的回归方程：Y=5.8Y=5.81010-3-3+5.29+5.291010-2-2X r=0.9996X r=0.9996 SA SA的回归方程：的回归方程：Y=6.0Y=6.01010-3-3+8.33+8.331010-2-2X r=0.9981X r=0.9981 ASA ASA和和SASA的线性范围分别为：的线性范围分别为：1 120 20 g/ml;2g/ml;

31、230 30 g/mlg/ml回收率：回收率：空白血清空白血清+五种不同浓度测定，五种不同浓度测定，ASAASA为为96.0%96.0%106.0%;106.0%;SA SA为为92.0%92.0%119.5%;119.5%;（五种不同浓度均应在线性范围内）（五种不同浓度均应在线性范围内）色谱条件：色谱条件：色谱柱为色谱柱为LiChrospher100RP(125mmLiChrospher100RP(125mm4mm,5m)4mm,5m)流动相为流动相为25%25%乙腈溶液乙腈溶液-醋酸缓冲溶液梯度洗脱。醋酸缓冲溶液梯度洗脱。检测波长为检测波长为254254nmnm；内标物为依他尼酸。内标物为

32、依他尼酸。尿样品预处理：尿样品预处理：C C8 8固相萃取柱，固相萃取柱，100100mgmg填料填料/mlml用甲醇用甲醇1.01.0ml,ml,然后然后 用用0.50.5mlml蒸馏水活化。蒸馏水活化。2.0 2.0mlml尿样尿样+内标内标300300l(10g/ml)l(10g/ml)上柱上柱 1.01.0mlml水洗水洗 脱生物杂质脱生物杂质 再用甲醇再用甲醇0.50.5mlml洗脱保留在柱上的洗脱保留在柱上的丙磺舒和内丙磺舒和内 标。洗脱液标。洗脱液0.450.45mm浸滤膜滤过，取浸滤膜滤过，取5 5ll直接进样分析。直接进样分析。二、尿中丙磺舒的固相萃取净化二、尿中丙磺舒的固相

33、萃取净化-HPLCHPLC法法(运动员违禁药物运动员违禁药物)线性关系和回收率线性关系和回收率：取空白尿样取空白尿样2.02.0ml+ml+不同浓度丙磺舒不同浓度丙磺舒+内标液内标液 按上述方按上述方法法分析分析(浓度范围为浓度范围为0.10.1g/mlg/ml 100100g/ml)g/ml);A A丙丙/A A内内对对C C丙丙回归。回归。回收率：回收率：丙磺舒为丙磺舒为100%100%3%(3%(n=14)n=14)；内标为内标为101%101%3%(3%(n=12)n=12)；人尿样测定人尿样测定：丙磺舒丙磺舒(单剂量单剂量500mg)500mg)尿排泄药尿排泄药-时曲线时曲线(见见P

34、136)P136)三、三、HPLCHPLC法测定人血浆中布洛芬含量法测定人血浆中布洛芬含量 色谱条件：色谱条件：色谱柱为色谱柱为Shim-packCLC-ODS(150mmShim-packCLC-ODS(150mm6mm,10m)6mm,10m)预柱为预柱为YWG-CYWG-C1818；流动相为甲醇流动相为甲醇-20-20mol/Lmol/L磷酸二氢磷酸二氢 钾冲溶液钾冲溶液(70:30,(70:30,pH=4.0);pH=4.0);流速为流速为1.01.0ml/min;ml/min;检测波长为检测波长为221221nmnm；内标物为肉桂酸内标物为肉桂酸。样品预处理：样品预处理：取肝素抗凝血

35、浆取肝素抗凝血浆0 0。2424ml+ml+内标液内标液+甲醇甲醇0.50.5ml,ml,振荡振荡 混匀，离心混匀，离心(1000(1000r/min)15min,r/min)15min,取上清液取上清液10 10 ll直直 接进样分析。布洛芬和肉桂酸接进样分析。布洛芬和肉桂酸t tR R为为5.155.15和和2.85min2.85min。回归方程：回归方程：以对照品与内标的峰高比对浓度回归，其回归方程为：以对照品与内标的峰高比对浓度回归，其回归方程为：Y=4.05 Y=4.05 1010-2-2C 2.0 C 2.0 1010-3-3,r=0.9999r=0.9999。回收率测定：回收率测

36、定：空白血浆空白血浆+布洛芬对照品高、中、低三种浓度，布洛芬对照品高、中、低三种浓度，按样品处理项下测定，测得平均回收率按样品处理项下测定，测得平均回收率为为99.2 99.2 1.6%1.6%。精密度：精密度：日内精密度为日内精密度为RSDRSD1.8%1.8%；日间精密度为日间精密度为2.8%2.8%。1.01.0，1.51.5，2.02.0，3.03.0，4.04.0，6.06.0，8.08.0，10.010.0，12.012.0h h自肘自肘静脉静脉 取血取血1.51.5mlml，肝素抗凝，按肝素抗凝，按“样品处理方法样品处理方法”项下操作，求算血项下操作，求算血 药浓度，结果见药浓度

37、，结果见P137P137表表6 61 1。试验结果：试验结果：1.1.血浆用甲醇除蛋白后，直接进样，经预柱净化，再进分析柱血浆用甲醇除蛋白后，直接进样，经预柱净化，再进分析柱 回收率高，分析速度快回收率高，分析速度快(6(6minmin完成完成)，分离效果好。，分离效果好。2.2.口服一次后口服一次后Tmax=30minTmax=30min90min90min；体内维持体内维持4 4h h6h6h。与文与文 献报道的结果一致。献报道的结果一致。3.3.本法可用于临床治疗药物浓度检测和药代动力学研究。本法可用于临床治疗药物浓度检测和药代动力学研究。人血浆样品测定：人血浆样品测定：受试者受试者8

38、8人；给药剂量人；给药剂量600600mgmg，给药后给药后0.50.5，0.750.75返返 回回 练习与思考 A A型题型题 1 1阿司匹林中检查的特殊杂质是阿司匹林中检查的特殊杂质是A.A.水杨醛水杨醛 B.B.砷盐砷盐 C.C.水杨酸水杨酸 D.D.苯甲酸苯甲酸 E.E.苯酚苯酚2 2对氨基水杨酸钠中检查的特殊杂质是对氨基水杨酸钠中检查的特殊杂质是A.A.水杨醛水杨醛 B.B.间氨基酚间氨基酚 C.C.水杨酸水杨酸 D.D.苯甲酸苯甲酸 E.E.苯酚苯酚 B B型题型题 A.A.FeClFeCl3 3反应反应 B.B.水解后水解后FeClFeCl3 3反应反应 C.AgNOC.AgNO

39、3 3反应反应 D.D.重氮化重氮化-偶合反应偶合反应 E.E.麦芽酚反应麦芽酚反应 1.1.阿司匹林阿司匹林 2.2.水杨酸水杨酸 3.3.SMZSMZ 4.4.苯甲酸钠苯甲酸钠BADAA.A.直接酸碱滴定法直接酸碱滴定法 B.B.两步酸碱滴定法两步酸碱滴定法 C.C.亚硝酸钠溶液滴定法亚硝酸钠溶液滴定法 D.HPLCD.HPLC法法 E.E.双相滴定法双相滴定法 5.5.苯甲酸钠苯甲酸钠 6.6.阿司匹林阿司匹林 7.7.阿司匹林栓剂阿司匹林栓剂 8.8.对氨基水杨酸钠对氨基水杨酸钠EBDC61写在最后写在最后成功的基础在于好的学习习惯成功的基础在于好的学习习惯The foundation of success lies in good habits 结束语当你尽了自己的最大努力时，失败也是伟大的，所以不要放弃，坚持就是正确的。When You Do Your Best,Failure Is Great,So DonT Give Up,Stick To The End演讲人：XXXXXX 时 间：XX年XX月XX日