钙、镁、磷的测定课件.ppt
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1、实验实验血清钙、镁、磷的测定血清钙、镁、磷的测定西安医学院检验教研室西安医学院检验教研室 (一)血清钙测定一)血清钙测定西安医学院检验教研室西安医学院检验教研室 血浆钙的存在形式血浆钙的存在形式血钙血钙可扩散钙可扩散钙非扩散钙非扩散钙离子钙离子钙可溶性不解离的钙盐可溶性不解离的钙盐占血浆总钙占血浆总钙60%,能透过毛细血管能透过毛细血管壁壁与血浆蛋白结合,占与血浆蛋白结合,占血浆总钙血浆总钙40%,不能,不能透过毛细血管壁透过毛细血管壁血浆中血浆中直接发直接发挥生理挥生理作用的作用的钙钙相关知识相关知识 血钙的测定包括总钙测定和离子钙测定法。血钙的测定包括总钙测定和离子钙测定法。总钙测定方法包
2、括总钙测定方法包括同位素稀释质谱法同位素稀释质谱法-决定性方决定性方法,法,原子吸收光谱法原子吸收光谱法(AAS)参考方法、参考方法、分光光分光光度法度法和络合滴定法等。和络合滴定法等。分光光度法中以分光光度法中以邻甲酚酞络合酮法(邻甲酚酞络合酮法(OCPC)、)、甲基百里香酚蓝比色法和偶氮胂甲基百里香酚蓝比色法和偶氮胂比色法比色法(Arsenazo colorimetry)最常用。)最常用。离子钙测定目前临床最常用离子选择电极法。离子钙测定目前临床最常用离子选择电极法。血清总钙测定血清总钙测定邻甲酚酞络合酮比色法邻甲酚酞络合酮比色法西安医学院检验教研室西安医学院检验教研室 v掌握:掌握:OC
3、PC法测定血清总钙的基本原理法测定血清总钙的基本原理及提高准确性的方法。及提高准确性的方法。v熟悉:熟悉:血清总钙测定的注意事项血清总钙测定的注意事项。v了解:总钙与离子钙的关系了解:总钙与离子钙的关系 实验目的实验目的 邻甲酚酞络合铜是金属络合染料,同时也是酸碱指示邻甲酚酞络合铜是金属络合染料,同时也是酸碱指示剂,在碱性条件下与钙络合,生成紫红色络合物。在剂,在碱性条件下与钙络合,生成紫红色络合物。在600nm处有特征吸收,用处有特征吸收,用8-羟基喹啉以消除标本中镁离子羟基喹啉以消除标本中镁离子的干扰,与同样处理的的钙标准液比较即可测得出血钙含的干扰,与同样处理的的钙标准液比较即可测得出血
4、钙含量。量。原理原理紫红色络合物0.11pHCaOCPC试剂与器材试剂与器材 1.R1:乙醇胺缓冲液。:乙醇胺缓冲液。2.R2:OCPC、8-羟基喹啉羟基喹啉3.氯化钙标准液:氯化钙标准液:2.50mmol/L工作液工作液:取:取R1和和R2等量混合即为工作液。等量混合即为工作液。4.分光光度计分光光度计操作步骤操作步骤 取试管取试管3 3支,按下表操作支,按下表操作。加入物(加入物(ml)空白管空白管 标准管标准管 测定管测定管工作液工作液 3.0 3.0 3.0 蒸馏水蒸馏水 0.06 标准品标准品 0.06 血清血清 0.06 充分充分混匀,混匀,37水浴水浴5分钟分钟,在波长,在波长6
5、00nm处,处,以空白管调零,读取吸光度值。以空白管调零,读取吸光度值。计算计算 CsAASu(mmol/L)血钙 参考范围:参考范围:2.032.54mmol/L用血清或肝素抗凝血浆;不能用钙的螯合剂及草用血清或肝素抗凝血浆;不能用钙的螯合剂及草酸盐做抗凝剂的标本;胆红素可产生负干扰,可酸盐做抗凝剂的标本;胆红素可产生负干扰,可用血清对照消除。用血清对照消除。镁离子也可与镁离子也可与OCPC试剂产生紫红色络合物,因试剂产生紫红色络合物,因此,试剂中加入此,试剂中加入8-羟基喹啉是起络合镁离子的作羟基喹啉是起络合镁离子的作用,以消除镁离子的干扰。用,以消除镁离子的干扰。注意事项注意事项 pH对
6、对OCPC试剂的显色有很大影响,试剂的显色有很大影响,pH10.512时,反应的敏感性最好,所以选用时,反应的敏感性最好,所以选用pH11.0为宜。为宜。此法对钙离子有很高的敏感性,测定器皿要洁净,此法对钙离子有很高的敏感性,测定器皿要洁净,所有试剂应在聚乙烯瓶内保存;且配制试剂最好所有试剂应在聚乙烯瓶内保存;且配制试剂最好用高质量的去离子水或重蒸馏水。用高质量的去离子水或重蒸馏水。临床意义临床意义 血钙增高血钙增高常见于下列疾病:甲状旁腺机能亢进症、常见于下列疾病:甲状旁腺机能亢进症、代谢性酸中毒、维生素代谢性酸中毒、维生素D增多症、多发性骨髓瘤、增多症、多发性骨髓瘤、恶性肿瘤等。恶性肿瘤等
7、。血钙降低血钙降低见于下列疾病:甲状旁腺机能减退、慢见于下列疾病:甲状旁腺机能减退、慢性肾炎尿毒症、佝偻病和软骨病、大量输入柠檬性肾炎尿毒症、佝偻病和软骨病、大量输入柠檬酸盐抗凝血等酸盐抗凝血等。西安医学院检验教研室西安医学院检验教研室 (二)血清镁测定(二)血清镁测定镁是人体内含量占第四位的金属元素,镁是人体内含量占第四位的金属元素,50%以以磷酸盐、碳酸盐、氟化物的形式存在于骨骼中,磷酸盐、碳酸盐、氟化物的形式存在于骨骼中,45%在细胞内液,在细胞内液,细胞外液中仅占细胞外液中仅占5%。血清中镁血清中镁55%为离子型,为离子型,15%与磷酸盐、枸椽与磷酸盐、枸椽酸盐等形成复合物,酸盐等形成
8、复合物,30%与蛋白结合。与蛋白结合。相关知识相关知识 镁测定的参考方法是原子吸收分光光度法,镁测定的参考方法是原子吸收分光光度法,国内外多数实验室采用金属显色染料直接显色和国内外多数实验室采用金属显色染料直接显色和比色分析,其中比色分析,其中甲基麝香草酚蓝、钙镁试剂甲基麝香草酚蓝、钙镁试剂广泛广泛应用于镁的自动分析或手工操作。应用于镁的自动分析或手工操作。血清镁测定血清镁测定钙镁试剂比色法钙镁试剂比色法西安医学院检验教研室西安医学院检验教研室 v掌握:掌握:钙镁试剂比色法钙镁试剂比色法测定血清镁的基本测定血清镁的基本原理。原理。v熟悉:熟悉:有关试剂在反应中的作用。有关试剂在反应中的作用。v
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