紫外可见分光光度法终课件.ppt

1、精选课件1（Ultraviolet and visible spectrophotometry,UV/VIS）精选课件2中国的中国的墨经墨经精选课件3牛顿光学实验牛顿光学实验精选课件4其实还有肉眼看不到的紫外光其实还有肉眼看不到的紫外光！德国科学家里特，德国科学家里特，1801年在研究光年在研究光谱的不同部分对谱的不同部分对氯化银的作用时氯化银的作用时发现：随着向紫发现：随着向紫光方向移动，化光方向移动，化学活性增加，在学活性增加，在紫外部分，仍存紫外部分，仍存在着一种不可见在着一种不可见射线，使氯化银射线，使氯化银变黑，从而发现变黑，从而发现了紫外线。了紫外线。精选课件5p 1 为什么上述溶

2、液呈现不同的颜色？两个问题精选课件62 将温度计置不同光区，有何现象？而后将温度计置不同光区，有何现象？而后将将KMnO4溶液置于温度计和光区之间，又溶液置于温度计和光区之间，又有何现象？有何现象？精选课件7 由于溶液对光的选择性吸收引起的，溶液呈现的是被吸收物质的互补色。单色光复色光互补光原 因精选课件8精选课件9精选课件10 如何更精确地(或通过什么仪器）说明物质具有选择性吸收不同波长的光的性质？问题（续）精选课件111-c(KMnO4)=1.5610-4molL-12-c(KMnO4)=3.1210-4molL-13-c(KMnO4)=4.6810-4molL-1 KMnO4溶液的光吸收

3、曲线吸收曲线测定方法最大吸收峰精选课件12精选课件13赫兹赫兹-德国物理学家德国物理学家 赫兹对人类伟大的贡献是赫兹对人类伟大的贡献是用实验用实验证实了电磁波的存在，证实了电磁波的存在，发现了光电效应发现了光电效应。1888年，成了近代科学史上的年，成了近代科学史上的一座里程碑。开创了一座里程碑。开创了无线电电子技术无线电电子技术的新纪元。的新纪元。赫兹对人类文明作出了很大贡献，正当人们对赫兹对人类文明作出了很大贡献，正当人们对他寄以更大期望时，他却于他寄以更大期望时，他却于1894年因血中毒逝世，年因血中毒逝世，年仅年仅36岁。为了纪念他的功绩，人们用他的名字来岁。为了纪念他的功绩，人们用他

4、的名字来命名各种波动频率的单位，简称命名各种波动频率的单位，简称“赫赫”。精选课件141，cchhEE，注：精选课件15vEB实验测得真空中光速实验测得真空中光速181099792458.2smc精选课件16续前精选课件17电磁波谱电磁波谱1031061091012101510221031001061091013105102HZ1KHZ1MHZ1GHZ1T1km1m1cm11nmA01mX 射线射线紫外线紫外线可见光可见光红外线红外线微微 波波高频电视高频电视调频广播调频广播雷达雷达无线电射频无线电射频电力传输电力传输射线射线频率频率波长波长精选课件18精选课件19续前精选课件20续前光基态激

5、发态释放能量发光hMM*发射光谱激发态光基态吸收辐射能量*MhM吸收光谱精选课件21精选课件22单波长单光束分光光度计0.57光源单色器吸收池检测器显示辐射源分光系统检测系统精选课件23目视比色法目视比色法标准系列未知样品特点利用自然光比较吸收光的互补色光准确度低（半定量）不可分辨多组分方法简便，灵敏度高早期的显示方法精选课件25 基于物质光化学性质而建立起来的分析方法称之为光化基于物质光化学性质而建立起来的分析方法称之为光化学分析法。学分析法。分为分为:光谱分析法和非光谱分析法。光谱分析法和非光谱分析法。光谱分析法是指在光（或其它能量）的作用下，通过测光谱分析法是指在光（或其它能量）的作用下

6、，通过测量物质产生的发射光、吸收光或散射光的波长和强度来进行量物质产生的发射光、吸收光或散射光的波长和强度来进行分析的方法。分析的方法。吸收光谱分析吸收光谱分析发射光谱分析发射光谱分析分子光谱分析分子光谱分析原子光谱分析原子光谱分析精选课件26 在光谱分析中，依据物质对光的选择性吸收而建立起来在光谱分析中，依据物质对光的选择性吸收而建立起来的分析方法称为吸光光度法的分析方法称为吸光光度法,主要有主要有:红外吸收光谱红外吸收光谱：分子振动光谱，吸收光波长范围：分子振动光谱，吸收光波长范围2.5 1000 m,主要用于有机化合物结构鉴定。主要用于有机化合物结构鉴定。紫外吸收光谱紫外吸收光谱：电子跃

7、迁光谱，吸收光波长范围：电子跃迁光谱，吸收光波长范围200 400 nm（近紫外区）（近紫外区），可用于结构鉴定和定量分析。，可用于结构鉴定和定量分析。可见吸收光谱可见吸收光谱：电子跃迁光谱，吸收光波长范围：电子跃迁光谱，吸收光波长范围400 750 nm，主要用于有色物质的定量分析。，主要用于有色物质的定量分析。本章主要讲授紫外可见吸光光度法。本章主要讲授紫外可见吸光光度法。精选课件27精选课件28转振电分EEEEchhE能级差精选课件29精选课件30转振电EEE远红外吸收光谱红外吸收光谱可见吸收光谱紫外转振电mevEmevEmevE2525005.0005.025.125105.025.1

8、06.0201精选课件31精选课件32对于我们经常使用的紫外吸收光谱图：对于我们经常使用的紫外吸收光谱图：如果改变通过某一物质的入射光波长，并记录如果改变通过某一物质的入射光波长，并记录该物质在每一波长处的吸光度该物质在每一波长处的吸光度A，然后以波长为横坐，然后以波长为横坐标，以吸光度为纵坐标，这样得到的谱图为该物质的标，以吸光度为纵坐标，这样得到的谱图为该物质的吸收光谱或吸收曲线。吸收光谱或吸收曲线。精选课件33紫外可见吸收光谱示意图紫外可见吸收光谱示意图00.050.10.150.20.250.32004006008001000美洛昔康 UV精选课件34 分子轨道理论分子轨道理论：当两个

9、原子结合，组成共价键时，原当两个原子结合，组成共价键时，原子中参与成键的电子组成新的分子轨道，两个成键原子的子中参与成键的电子组成新的分子轨道，两个成键原子的原子轨道组成一个能量较低的成键轨道和一个能量较高的原子轨道组成一个能量较低的成键轨道和一个能量较高的反键轨道。反键轨道。同时由于电子对组成共价键可以分为同时由于电子对组成共价键可以分为精选课件35COHnp p H精选课件36能量精选课件37图示精选课件38*n*n*分子中电子的能级和跃迁 精选课件39 p p*RKE,Bnp p E只能被真空紫外分光光度计检测到只能被真空紫外分光光度计检测到精选课件40 p p*RKE,Bnp p E精

10、选课件41600215CH3NH2365258CH3I200173CH3CL150184CH3OH1480167H2Omaxmax（nm）化合物精选课件42精选课件43(4)n*跃迁精选课件44图示精选课件45续前精选课件46精选课件47图示精选课件48续前精选课件49-OH 精选课件50精选课件51精选课件52精选课件53精选课件54续前AA精选课件56 图 苯在乙醇中的紫外吸收光谱精选课件57图示B 254 nm 200图示苯环苯环精选课件59影响影响紫外可见吸收光谱的因素精选课件60精选课件61精选课件62CCCCCCCCCH3CH3 超共轭效应比共轭效应的影响小的多超共轭效应比共轭效应

11、的影响小的多精选课件63 取代基越大取代基越大,分子共平面性越差，因此最大吸收分子共平面性越差，因此最大吸收波长蓝移，摩尔吸光系数降低。波长蓝移，摩尔吸光系数降低。精选课件64 精选课件65 从烷基取代硝基苯、偶氮苯顺反异构体的紫外吸收谱图从烷基取代硝基苯、偶氮苯顺反异构体的紫外吸收谱图(见下见下图图)也可以清楚地看到空间阻碍对分子吸收光谱的影响。与硝基也可以清楚地看到空间阻碍对分子吸收光谱的影响。与硝基苯相比，苯相比，2,4,6-三丁基硝基苯在三丁基硝基苯在255nm附近的吸收峰已经消失附近的吸收峰已经消失；偶氮苯反式异构体的摩尔吸光系数则远远大于顺式偶氮苯反式异构体的摩尔吸光系数则远远大于

12、顺式，且吸收峰，且吸收峰位红移。位红移。精选课件66互变异构互变异构：酮式：酮式：max=204 nm 烯醇式：烯醇式：max=243 nm H3CCH2CCOEtOOH3CCHCCOEtOHO共轭精选课件67CCCCH3CH3CH3O精选课件68精选课件69精选课件70精选课件71苯酚的庚烷溶液-苯酚的乙醇溶液A精选课件72图示精选课件73精选课件74 Lambert-Beer 定律是说明物质对单色光吸收的强弱与吸光物质的浓度定律是说明物质对单色光吸收的强弱与吸光物质的浓度（C）和）和 液层厚度（液层厚度（l）间的关系的定律，是光吸收的基本定律，是紫外）间的关系的定律，是光吸收的基本定律，是

13、紫外-可见可见光度法定量的基础。光度法定量的基础。Sample(conc.C)Path length lI0It透光率：透光率：T吸光度：吸光度：A0lglgtIATI 0tITILambert-Beer 定律定律:当一束平行的单色光通过溶液时，溶液的吸当一束平行的单色光通过溶液时，溶液的吸光度光度(A)与溶液的浓度与溶液的浓度(C)和光程和光程(b)的乘积成正比。的乘积成正比。A=ECl精选课件75续前lCEIIBeerLamber0lg定律表达式0lgtITIATE C l 透光率吸光度lECAT1010或：吸光系数E透光率T与浓度C或厚度l成指数函数关系吸光度吸光度A与浓度与浓度C或厚度

14、或厚度l成正比关系成正比关系精选课件76精选课件77精选课件78cbaAAAA总精选课件79lCAE精选课件80续前%1110cmEM%11cmE精选课件81 安络血的分子量为236，将其配成100ml含0.4962mg的溶液，装于1cm吸收池中，在入max为355nm处测得A值为0.557，试计算安络血的百分吸光系数和摩尔吸光系数。例题：例题：1%1Ecm1%1Ecm1%1Ecm解：A =C L=C L，故 =A/C L =0.557/(0.496210-31)=1122.531(100 mL/g cm-1)因=M/10=1122.531236/10=26491.737(L mol-1 cm

15、-1)%11cmE%11cmE%11cmE精选课件82续前下测定须在较小的左右测定灵敏度高maxmaxmaxmaxlCAEAA样参调节光路光学性质和厚度相同样品池样品溶液，参比池空白溶液样品池参比池配制样品的溶剂空白溶液ATA%1000 注：采用空白对比消除因溶剂和容器的吸收、光的散射和注：采用空白对比消除因溶剂和容器的吸收、光的散射和 界面反射等因素对透光率的干扰界面反射等因素对透光率的干扰精选课件83lCEA精选课件84光学因素：光学因素：化学因素：化学因素：非单色光的影响非单色光的影响 杂散光的影响杂散光的影响 反射和散射光的影响反射和散射光的影响 非平行光的影响非平行光的影响 荧光物质

16、的影响荧光物质的影响 溶液浓度的影响溶液浓度的影响 化学平衡的改变化学平衡的改变精选课件85 精选课件86续前精选课件87（1）由于在高浓度时（通常）由于在高浓度时（通常 C 0.01mol/L），吸收质点之间），吸收质点之间的平均距离缩小到一定程度，邻近质点彼此的电荷分布都会相的平均距离缩小到一定程度，邻近质点彼此的电荷分布都会相互受到影响，此影响能改变它们对特定辐射的吸收能力，相互互受到影响，此影响能改变它们对特定辐射的吸收能力，相互影响程度取决于影响程度取决于C，因此，高浓度可导致，因此，高浓度可导致 A与与 C 线性关系发生线性关系发生偏差。偏差。1.溶液浓度的影响溶液浓度的影响（2）

17、摩尔吸光系数）摩尔吸光系数与溶与溶液折射率液折射率n有关，而溶液有关，而溶液浓度过高会改变其折射率，浓度过高会改变其折射率，从而使摩尔吸光系数发生从而使摩尔吸光系数发生改变，导致线性关系的偏改变，导致线性关系的偏离。离。Beer定律应用的另一重要前提定律应用的另一重要前提稀溶液稀溶液例：在水溶液中，例：在水溶液中，Cr()的的两种离子存在如下平衡两种离子存在如下平衡:2.化学平衡的改变化学平衡的改变 溶液中的溶质可因溶液中的溶质可因 c 的改变而有离解、缔合、配位以的改变而有离解、缔合、配位以及与溶剂间的作用等原因而发生偏离及与溶剂间的作用等原因而发生偏离 L-B 定律的现象。定律的现象。Cr

18、2O72-+H2O 2CrO42-+2H+Cr2O72-与与 CrO42-有不同的有不同的 A 值，值，溶液的溶液的 A 值是二种离子的值是二种离子的 A 之和。之和。但由于随着浓度的改变（稀释）或但由于随着浓度的改变（稀释）或改变溶液的改变溶液的 pH 值，值，Cr2O42-/CrO42-会发生变化，使会发生变化，使C总总与与 A总总 的关系偏离直线。的关系偏离直线。消除方法：控制条件。消除方法：控制条件。精选课件89 紫外紫外-可见分光光度计是测量样品对入射光吸收的光谱仪。其可见分光光度计是测量样品对入射光吸收的光谱仪。其工作原理为：由光源产生的连续辐射，经单色器后获得单色光，工作原理为：

19、由光源产生的连续辐射，经单色器后获得单色光，通过液槽中的待测溶液后，一部分被待测溶液所吸收，未被吸收通过液槽中的待测溶液后，一部分被待测溶液所吸收，未被吸收的光到达光检测器，使光信号转变成电信号并加以放大，最后将的光到达光检测器，使光信号转变成电信号并加以放大，最后将信号数据显示或记录下来。信号数据显示或记录下来。精选课件90 紫外紫外-可见分光光度计由可见分光光度计由光源光源、单色器单色器、吸收吸收池池、检测器检测器以及以及数据处理及记录数据处理及记录（计算机）等组（计算机）等组成。成。单色器 精选课件91工作原理及仪器结构框图工作原理及仪器结构框图精选课件92光源：光源：钨灯或卤钨灯钨灯或

20、卤钨灯可见光源可见光源 3501000nm氢灯或氘灯氢灯或氘灯紫外光源紫外光源 200360nm精选课件93精选课件94精选课件952.单色器单色器 单色器的作用是将来自光源的光按单色器的作用是将来自光源的光按波长的长短顺序分散为单色光并能随波长的长短顺序分散为单色光并能随意调节所需波长的光。主要由意调节所需波长的光。主要由入射狭入射狭缝、准直镜、色散元件、物镜和出射缝、准直镜、色散元件、物镜和出射狭缝组成。狭缝组成。(1)入射狭缝用于限制杂散光进入单色器；入射狭缝用于限制杂散光进入单色器；(2)准直镜将入射光束变为平行光束后进入色散元件；准直镜将入射光束变为平行光束后进入色散元件；(4)物镜

21、将出自色散元件的平行光聚焦于出口狭缝；物镜将出自色散元件的平行光聚焦于出口狭缝；(5)出射狭缝用于限制通带宽度。出射狭缝用于限制通带宽度。(3)色散元件把混合光分散为单色光，是单色器的关键部分；常用的色散元件把混合光分散为单色光，是单色器的关键部分；常用的色散元件有：棱镜、光栅、滤光片。色散元件有：棱镜、光栅、滤光片。精选课件96精选课件97光栅光栅具有周期性的空间结构或光学性具有周期性的空间结构或光学性能（如能（如n,tn,t）的衍射屏，统称光栅。利用光）的衍射屏，统称光栅。利用光的衍射作用和干扰作用使不同的衍射作用和干扰作用使不同 的光有不的光有不同的方向，起到色散作用。（光栅色散后同的方

22、向，起到色散作用。（光栅色散后的光谱是均匀分布的）的光谱是均匀分布的）光栅光栅精选课件98棱镜棱镜由玻璃或石英制成，由玻璃或石英制成，它对不同它对不同 的光有不同的折的光有不同的折射率，将复合光分开，但：射率，将复合光分开，但：光谱疏密不均，长光谱疏密不均，长 区密，区密，短短 区疏。区疏。棱镜棱镜 用棱镜和光栅作色散元件，分光性能好，能分出很窄的光谱通用棱镜和光栅作色散元件，分光性能好，能分出很窄的光谱通带，辐射纯度高，使用方便。带，辐射纯度高，使用方便。棱镜的缺点是色散率随波长而改变。棱镜的缺点是色散率随波长而改变。采用反射光栅作色散元件，可用于紫外、可见及红外光谱区，而且采用反射光栅作色

23、散元件，可用于紫外、可见及红外光谱区，而且在整个波长区内具有几乎一致的分辨能力。在整个波长区内具有几乎一致的分辨能力。各种波长同级谱线集合起来构成光源一套光谱，光栅光谱仪有各种波长同级谱线集合起来构成光源一套光谱，光栅光谱仪有几套光谱。如果光源发出的是具有连续光谱的白光。例如钨丝灯炮，几套光谱。如果光源发出的是具有连续光谱的白光。例如钨丝灯炮，则光栅光谱中除则光栅光谱中除0级仍然近似白色的亮线外，级仍然近似白色的亮线外，其它级各色主级强亮线其它级各色主级强亮线都排列成连续的光谱带都排列成连续的光谱带，而，而棱镜只有一套光谱棱镜只有一套光谱，这是两者的区别。，这是两者的区别。精选课件993吸收池

24、：液池，样品池吸收池：液池，样品池 玻璃玻璃能吸收能吸收UV光，仅适用于可见光区光，仅适用于可见光区 石英石英不能吸收紫外光，适用于紫外和可见光区不能吸收紫外光，适用于紫外和可见光区 要求：匹配性（对光的吸收和反射应一致）要求：匹配性（对光的吸收和反射应一致）精选课件100精选课件101000000精选课件102续前光电池光电池光电管光电管光电倍增管光电倍增管二极管阵列检测器二极管阵列检测器4检测器：检测器：将光信号转变为电信号的装置将光信号转变为电信号的装置精选课件103检测器检测器 简易分光光度计上使用简易分光光度计上使用光电池光电池或或光电管光电管作为检测器。目前最常见的检作为检测器。目

25、前最常见的检测器是测器是光电倍增管光电倍增管，有的用，有的用二极管阵列二极管阵列作为检测器。作为检测器。光电倍增管的原理如光电倍增管的原理如右图。其特点是在紫外右图。其特点是在紫外-可见区的灵敏度高，响应可见区的灵敏度高，响应快。但强光照射会引起不快。但强光照射会引起不可逆损害，因此高能量检可逆损害，因此高能量检测不宜，需避光。测不宜，需避光。光电倍增管的外壳由玻璃或石英制成，内部抽真空，阴极涂有能发射光电倍增管的外壳由玻璃或石英制成，内部抽真空，阴极涂有能发射电子的光敏物质，如电子的光敏物质，如Sb-Cs或或Ag-O-Cs等，在阴极等，在阴极C和阳极和阳极A间装有一系列间装有一系列次级电子发

26、射极，即电子倍增极次级电子发射极，即电子倍增极D1、D2 等。阴极等。阴极C和阳极和阳极A之间加有之间加有约约1000V的直流电压，当辐射光子撞击光阴极的直流电压，当辐射光子撞击光阴极C时发射光电子，该光电子时发射光电子，该光电子被电场加速落在第一倍增极被电场加速落在第一倍增极D1上，撞击出更多的二次电子，依次类推，上，撞击出更多的二次电子，依次类推，阳极最后收集到的电子数将是阴极发出的电子数的阳极最后收集到的电子数将是阴极发出的电子数的105-108倍。倍。(1)光电倍增管光电倍增管精选课件104精选课件105阴极阳极精选课件106光电二极管阵列检测器光电二极管阵列检测器 (photodio

27、de array detector,PDAD)80年代出现的一种新型检测器。这种检测器，一般年代出现的一种新型检测器。这种检测器，一般是一个光电二极管对应接受光谱上一个纳米谱带宽度的是一个光电二极管对应接受光谱上一个纳米谱带宽度的单色光。例如，单色光。例如，Waters生产的生产的996型光电二极管阵列检型光电二极管阵列检测器，波长范围为测器，波长范围为190800nm对应对应512个光电二极管，个光电二极管，平均平均1.2nm谱带宽度由一个光电二极管接收。谱带宽度由一个光电二极管接收。精选课件107 工作原理：当复光透过流通池后，被组分选择性吸收，透过光具有了工作原理：当复光透过流通池后，被

28、组分选择性吸收，透过光具有了组分的光谱特征。此透过光（复光）被光栅分光后，形成组分的吸收光谱，组分的光谱特征。此透过光（复光）被光栅分光后，形成组分的吸收光谱，照射到光电二极管阵列装置上，使每个纳米光波的光强变成相应的电信号照射到光电二极管阵列装置上，使每个纳米光波的光强变成相应的电信号强度，因信号弱需经多次累加，而后给出组分的吸收光谱。这种记录方式强度，因信号弱需经多次累加，而后给出组分的吸收光谱。这种记录方式不需扫描，因此最短能在几个毫秒的瞬间内获得吸收池中组分的吸收光谱。不需扫描，因此最短能在几个毫秒的瞬间内获得吸收池中组分的吸收光谱。检测光路图检测光路图精选课件108紫外紫外-可见分光

29、光度计，按其光学系统可分为可见分光光度计，按其光学系统可分为单光束单光束与与双光束双光束分光光度计、分光光度计、单波长单波长与与双波长双波长分光光度计。分光光度计。原理：原理：由光源发出的连续光谱，进入单色器经色散元件分光，获得的单由光源发出的连续光谱，进入单色器经色散元件分光，获得的单色光分别通过参比溶液和样品溶液，进行光强度（吸收）的测定。色光分别通过参比溶液和样品溶液，进行光强度（吸收）的测定。0.575光源光源单色器单色器吸收池吸收池检测器检测器显示显示三、紫外三、紫外-可见分光光度计的类型可见分光光度计的类型 1.单光束分光光度计单光束分光光度计精选课件109 单光束分光光度计只有一

30、个光通道，分光后的单色光直接透过吸收池，单光束分光光度计只有一个光通道，分光后的单色光直接透过吸收池，交互测定样品池和参比池，结构简单，适用于测定特定波长的吸收，进行定交互测定样品池和参比池，结构简单，适用于测定特定波长的吸收，进行定量。但量。但仪器受电源、光源、检测器等波动的影响较大，不能扣除这些波动的仪器受电源、光源、检测器等波动的影响较大，不能扣除这些波动的干扰，干扰，空白样品和待测样品单独测量，每换一个波长都要用空白溶液重新校空白样品和待测样品单独测量，每换一个波长都要用空白溶液重新校正，正，不能准确地扣除空白值不能准确地扣除空白值。Pictures of single beam UV

31、-Vis spectrophotometers(Spectronic 20D)Zero Adjust100%AdjustWavelength selector精选课件110原理：原理：由光源发出的光通过单色器分光，将一束单色光由光源发出的光通过单色器分光，将一束单色光从狭缝送出，经光束分裂器分成强度相等的两束光，一从狭缝送出，经光束分裂器分成强度相等的两束光，一束通过参比池，另一束通过样品池，束通过参比池，另一束通过样品池，仪器测得的是透过仪器测得的是透过样品溶液和参比溶液的光信号强度之比，比值即为试样样品溶液和参比溶液的光信号强度之比，比值即为试样的透光率的透光率T，经对数变换可转换为吸光度

32、，经对数变换可转换为吸光度A。比值比值光源光源单色器单色器吸收池吸收池检测器检测器显示显示光束分裂器光束分裂器2.双光束分光光度计双光束分光光度计精选课件111Pye Unicam SP8-200紫外可见分光光度计光路图紫外可见分光光度计光路图精选课件112BlackMirrorOpen精选课件113 优点优点:由于单波长双光束分光光度计一次测量可同时得到样品溶液由于单波长双光束分光光度计一次测量可同时得到样品溶液相对空白溶液的透光度，因此双光束仪器可以消除光源强度变化和相对空白溶液的透光度，因此双光束仪器可以消除光源强度变化和电源不稳定可能引起的误差，并且可以方便地对全波段进行扫描。电源不稳

33、定可能引起的误差，并且可以方便地对全波段进行扫描。仪器仪器样品室样品室缺点缺点:仪器较单光束仪昂贵，要求待测样品与参比以及它们的吸收仪器较单光束仪昂贵，要求待测样品与参比以及它们的吸收池完全匹配，更多的移动部分。池完全匹配，更多的移动部分。精选课件114原理：原理：同一光源发出的光被分为两束，分别经过两个单色器后获同一光源发出的光被分为两束，分别经过两个单色器后获得两束不同波长的单色光，利用切光器使两束光以一定的频率交得两束不同波长的单色光，利用切光器使两束光以一定的频率交替照射同一吸收池，根据比耳定律，样品溶液在两个波长为替照射同一吸收池，根据比耳定律，样品溶液在两个波长为1和和2的吸光度差

34、值与溶液中待测物质的浓度成正比。的吸光度差值与溶液中待测物质的浓度成正比。光源光源单色器单色器单色器单色器检测器检测器切切光光器器狭狭缝缝吸吸收收池池3.双波长分光光度计双波长分光光度计精选课件1151）因为仅用一个样品池进行测量，不需要用参比吸收池，）因为仅用一个样品池进行测量，不需要用参比吸收池，因此可以消除参比池与样品池的不同而引起的误差。因此可以消除参比池与样品池的不同而引起的误差。2）对混浊样品进行测定时，可自动消除不同混浊度所引起）对混浊样品进行测定时，可自动消除不同混浊度所引起的背景吸收。的背景吸收。3）适当选择波长，简化混合组分同时测定过程。当试液中）适当选择波长，简化混合组分

35、同时测定过程。当试液中含有两种组分且光谱重叠时，用单光束进行分析，必须预先含有两种组分且光谱重叠时，用单光束进行分析，必须预先对试样进行萃取分离或加掩蔽剂消除干扰组分后才能进行测对试样进行萃取分离或加掩蔽剂消除干扰组分后才能进行测定，而使用双波长法则可选择干扰组分的波长测定结果做参定，而使用双波长法则可选择干扰组分的波长测定结果做参比，自动扣除其影响。比，自动扣除其影响。双波长分光光度法的优点双波长分光光度法的优点精选课件116两用（双光束两用（双光束/双波长）紫外可见分光光度计双波长）紫外可见分光光度计原理图：原理图：精选课件117精选课件118精选课件119续前精选课件120续前min%1

36、1maxmax，shcmE精选课件121续前45.315.388.170.155036127836155036127812AAAAVB，三处最大吸收，定性鉴别：药典规定精选课件122KOHC H3C H2O HNOCH2CH3C2H5Br+NOH标准品uv图合成样品1uv图合成样品2uv图精选课件123续前精选课件124续前%06.01002101.1%/101.1100/101.1143505.0334%11肾上腺酮mlmgmlglEACcm精选课件125lECA定量依据：精选课件126续前要求单色光前提：iECAmLgCigW 求含样过程：已知稀释)/(/)(lEAmLgCi100/lAL

37、molCi/或%100%样CCii精选课件127练习mLgmLglEAC/0.20100/00200.01207414.0精选课件128练习mLgmLgCi/1045.2100/1045.21207507.053mLgC/1050.2100101001050.252样%0.98%1001050.21045.2%100%5512样CCBi精选课件129练习%)0.764(591.01001025000.20367255iEAmLmLmLmgmlmLHCL求已知测移取稀至样品稀至吡啶 mLgmLglEACi/1092.7100/1092.7764591.064%0.99%1002501010010

38、0.21092.7%100%26样CCii精选课件130条件前提：固定仪器和测定CACKA样样同上条件固定条件查得测定样品曲线分别测定配制标准系列过程：CAACA标样标样标样标样AACCAACC精选课件131示例mLmgmLmLmLmg250.32550/200.0样品标样分别移取精选课件132标准曲线的绘制 根据紫外扫描图谱(见图1)取最大吸收波长620nm为测定波长，根据所得的吸光值和相应的浓度作线性回归（见图）。图 甘露糖及样品的紫外谱图Fig1 UV spectra of D-Mannose and sample1 甘露糖标准溶液,0.04mg/ml;2 样品溶液得标准曲线回归方程为：

39、7.7570.0769，R20.9984（的单位为mg/ml）。精选课件133续前标样与样品浓度相近；截距为固定仪器和测定条件；前提：0标样和分别测定一定过程：AASiSiAACCsCiCCSiSiAAmm%100%mmii精选课件134练习mLgCCii/1.98518.0508.01000100000.25105.2%1.98%100%12标示量标示量iCB精选课件135练习1207508.01050.2iiClEACmLgCi/1.98%1.98%100%12标示量标示量iCB精选课件136续前cbaAAAA总定量依据：aaaaaaEACCEA1111由bbbbbbEACCEA2222由

40、bbaaAEAE222111；测定；测定过程：精选课件137续前babaaaAEEAE2222111；和测定；测定过程：aaaaaaEACCEA1111由bbaababaCECEAAA22222由baababECEAC222精选课件138续前精选课件139babababaAEEAEE22221111；和测定；和测定bbaababaCECEAAA11111bbaababaCECEAAA22222bababbabbaaEEEEEAEAC12211221babaabaababEEEEEAEAC12212112精选课件140babababaAAAAAA222111babbaabababaAAAAAAA

41、AA)()(212121aaAAa2121和的等吸收点选bbbbbbbbaCECEEAAA)(2121bbabbbabEAEEAC21精选课件141续前bbAAb 2 1 2 1和的等吸收点选aaaaaaabaCECEEAAA)(21 2 1abaaabaaEAEEAC 2 1精选课件142精选课件143续前 倍率因子令KAAbb21)()()()(1212112212aabbababbababaAKAAKAAAAAKAKAAbA1bA2aaaaabaCEKEAKAA)(1212的干扰消除了bCAaba精选课件144练习9.927%11cmEmLgmLgCi/10900.4100/10900.

42、419.927463.064mLgC/10000.55052001000.1063样%0.98%10010000.510900.4%100%66样咖啡酸CCi5052001稀释因子注：精选课件145练习%11cmE12000.100120001010%11MEcmmLgmLglETlEACi/10165.3100/10166.311200417.0lglg64mLgC/10000.410022500500.06样%15.79%10010000.410165.3%100%66样样品CCi精选课件146紫外光谱的应用紫外光谱的应用利用紫外吸收鉴定劣质桔汁利用紫外吸收鉴定劣质桔汁精选课件147 生产

43、或装罐的桔汁不允许含有生产或装罐的桔汁不允许含有果肉固形物。可用紫外光区果肉固形物。可用紫外光区280nm、325nm和可见光区和可见光区443nm波长下的波长下的吸 光 度 值吸 光 度 值 A 之 和 以 及 计 算 出 的之 和 以 及 计 算 出 的A443/A325的比值，来检查桔汁是的比值，来检查桔汁是否是掺水或掺入果肉的冒牌货否是掺水或掺入果肉的冒牌货。精选课件148 2紫外可见光度测定紫外可见光度测定 (1)用用1cm石英皿，在石英皿，在280，325和和443nm处分别测定浆液处分别测定浆液或溶液的吸光度值，并分别得到或溶液的吸光度值，并分别得到A443，A325，A280，

44、以，以及及A443/A325比值。则调整吸光度之和比值。则调整吸光度之和 AAS（A443+A325+A280）1.085 式中式中 1.085为白利糖度之比为白利糖度之比(128118)。(2)同时测定浆液或溶液的紫外吸收光谱。同时测定浆液或溶液的紫外吸收光谱。精选课件1493掺水稀释的冒牌货掺水稀释的冒牌货引起吸收光谱紫移和强度降引起吸收光谱紫移和强度降低低 (1)若掺水，将使若掺水，将使223nm吸收峰紫移，并在吸收峰紫移，并在223206nm范围出现吸收峰。范围出现吸收峰。(2)掺水样品使掺水样品使AAS(调整吸光度之和调整吸光度之和)值出现在分布值出现在分布范围的下限附近范围的下限附

45、近(2.0022.992)。精选课件150 4掺入果肉的冒牌贷掺入果肉的冒牌贷引起引起A443/A325比比值减小和值减小和AAS增加增加 (1)桔汁的桔汁的A443/A325比值正常范围为比值正常范围为0.090.23，如掺入果肉引起，如掺入果肉引起A443/A325比值减小比值减小 (2)引起引起AAS增加。增加。(3)引起引起223nm的吸收峰红移至的吸收峰红移至230nm。使使443和和425nm的吸收峰分辨不开。的吸收峰分辨不开。精选课件151紫外光谱法在有机污染物监中的应用紫外光谱法在有机污染物监中的应用紫外光谱法测定水中的油分紫外光谱法测定水中的油分紫外光谱法测定水中黄腐酸、木素

46、磺酸、木质素和单宁紫外光谱法测定水中黄腐酸、木素磺酸、木质素和单宁以及表面活性剂以及表面活性剂紫外光谱法测定水中的五氯酚紫外光谱法测定水中的五氯酚紫外光谱法测定土壤和水体中小苯并紫外光谱法测定土壤和水体中小苯并(a)芘和二苯醚芘和二苯醚紫外分光光度法测定水中的酚类、苯胺类、硝基酚类化紫外分光光度法测定水中的酚类、苯胺类、硝基酚类化合物和汽油中的硫酚类化合物合物和汽油中的硫酚类化合物紫外二元光度法测定废水中紫外二元光度法测定废水中2甲基吡啶甲基吡啶紫外分光光度法测定油脂中多不饱和酸紫外分光光度法测定油脂中多不饱和酸一阶导数紫外光谱法测定尿液中尿酸含量一阶导数紫外光谱法测定尿液中尿酸含量精选课件1

47、52紫外分光光度法在农药制剂、添加剂、防腐剂和紫外分光光度法在农药制剂、添加剂、防腐剂和作物提取物测定方面的应用作物提取物测定方面的应用水稻及小麦中多菌灵残留量紫外光谱分析法水稻及小麦中多菌灵残留量紫外光谱分析法紫外光谱法测定农药制剂中氟草胺和氟乐灵紫外光谱法测定农药制剂中氟草胺和氟乐灵灭鼠农药制剂中杀鼠灵的紫外分光光度测定法灭鼠农药制剂中杀鼠灵的紫外分光光度测定法紫外分光光度法在饲料添加剂测定方面的应用紫外分光光度法在饲料添加剂测定方面的应用紫外分光光度法测定作物中的黄曲霉毒素紫外分光光度法测定作物中的黄曲霉毒素紫外分光光度法在食品防腐剂测定方面的废紫外分光光度法在食品防腐剂测定方面的废网网精选课件153选择溶剂的原则此课件下载可自行编辑修改，供参考！感谢您的支持，我们努力做得更好！