高效液相色谱的基础知识课件.ppt
- 【下载声明】
1. 本站全部试题类文档,若标题没写含答案,则无答案;标题注明含答案的文档,主观题也可能无答案。请谨慎下单,一旦售出,不予退换。
2. 本站全部PPT文档均不含视频和音频,PPT中出现的音频或视频标识(或文字)仅表示流程,实际无音频或视频文件。请谨慎下单,一旦售出,不予退换。
3. 本页资料《高效液相色谱的基础知识课件.ppt》由用户(晟晟文业)主动上传,其收益全归该用户。163文库仅提供信息存储空间,仅对该用户上传内容的表现方式做保护处理,对上传内容本身不做任何修改或编辑。 若此文所含内容侵犯了您的版权或隐私,请立即通知163文库(点击联系客服),我们立即给予删除!
4. 请根据预览情况,自愿下载本文。本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。
5. 本站所有资源如无特殊说明,都需要本地电脑安装OFFICE2007及以上版本和PDF阅读器,压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 高效 色谱 基础知识 课件
- 资源描述:
-
1、高效液相色谱的基础知识1高效液相色谱法的特点高效液相色谱法的特点2高效液相色谱法仪器工作原理高效液相色谱法仪器工作原理3高效液相色谱仪的维护高效液相色谱仪的维护4高效液相色谱法仪的注意事项高效液相色谱法仪的注意事项5高效液相色谱的分析应用高效液相色谱的分析应用高效液相色谱法的特点高效液相色谱法的特点 高效液相色谱法(HPLC)是20世纪60年代末70年代初发展起来的一种新型分离分析技术,随着不断改进与发展,目前已成为应用极为广泛的化学分离分析的重要手段。它是在经典液相色谱基础上,引入了气相色谱的理论,在技术上采用了高压泵、高效固定相和高灵敏度检测器,因而具备速度快、效率高、灵敏度高、操作自动化
2、的特点。为了更好地了解高效液相色谱法优越性,现从两方面进行比较:高效液相色谱法的特点高效液相色谱法的特点 1高效液相色谱法与经典液相色谱法 高效液相色谱法比起经典液相色谱法的最大优点在于高速、高效、高灵敏度、高自动化。高速是指在分析速度上比经典液相色谱法快数百倍。由于经典色谱是重力加料,流出速度极慢;而高效液相色谱配备了高压输液设备,流速最高可达 103cmmin-1.例如对氨基酸分离,用经典色谱法,需用20多小时才能分离出20种氨基酸;而用高效液相色谱法,只需lh之内即可完成。高效液相色谱法的特点高效液相色谱法的特点2高效液相色谱法与气相色谱法 (l)气相色谱法分析对象只限于分析气体和沸点较
3、低的化合物,它们仅占有机物总数的20。对于占有机物总数近80的那些高沸点、热稳定性差、摩尔质量大的物质,目前主要采用高效液相色谱法进行分离和分析。(2)气相色谱采用流动相是惰性气体,它对组分没有亲和力,即不产生相互作用力,仅起运载作用。而高效液相色谱法中流动相可选用不同极性的液体,选择余地大,它对组分可产生一定亲和力,并参与固定相对组分作用的剧烈竞争。因此,流动相对分离起很大作用,相当于增加了一个控制和改进分离条件的参数,这为选择最佳分离条件提供了极大方便。(3)气相色谱一般都在较高温度下进行的,而高效液相色谱法则经常可在室温条件下工作。高效液相色谱法的特点高效液相色谱法的特点 分析速度快通常
4、分析一个样品在1530 min,有些样品甚至在5 min内即可完成。选择性高可选择固定相和流动相以达到最佳分离效果,可分析同类型的有机化合物及其同分异构体,还可以分析在性质上极为相似的旋光异构体。灵敏度高紫外检测器可达,荧光和电化学检测器可达。柱子可反复使用用一根色谱柱可分离不同的化合物。样品量少,容易回收样品经过色谱柱后不被破坏,可以收集单一组分或做制备。高效液相色谱法的特点高效液相色谱法的特点 超高效液相色谱(UPLC)是区别于HPLC的液相色谱新领域 基于小颗粒填料和LC原理的一种创新技术 实现超高分离度、灵敏度、分析速度1高效液相色谱法的特点高效液相色谱法的特点2高效液相色谱法仪器工作
5、原理高效液相色谱法仪器工作原理3高效液相色谱仪的维护高效液相色谱仪的维护4高效液相色谱法仪的注意事项高效液相色谱法仪的注意事项5高效液相色谱的分析应用高效液相色谱的分析应用高效液相色谱仪工作原理高效液相色谱仪工作原理 高压输液系统 进样系统 分离系统 检测系统高效液相色谱仪工作原理高效液相色谱仪工作原理 其工作过程如下:首先高压泵将贮液器中流动相溶剂经过进样器送入色谱柱,然后从控制器的出口流出。当注入欲分离的样品时,流经进样器贮液器的流动相将样品同时带入色谱柱进行分离,然后依先后顺序进入检测器,记录仪将检测器送出的信号记录下来,由此得到液相色谱图。高效液相色谱仪工作原理高效液相色谱仪工作原理
6、1 1高压输液系统高压输液系统 由于高效液相色谱所用固定相颗粒极细,因此对流动相阻力很大,为使流动相较快流动,必须配备有高压输液系统。它是高效液相色谱仪最重要的部件,一般由储液罐、高压输液泵、过滤器、压力脉动阻力器等组成,其中高压输液泵是核心部件。对于一个好的高压输液泵应符合密封性好,输出流量恒定,压力平稳,可调范围宽,便于迅速更换溶剂及耐腐蚀等要求。常用的输液泵分为恒流泵和恒压泵两种。恒流泵特点是在一定操作条件下,输出流量保持恒定而与色谱柱引起阻力变化无关;恒压泵是指能保持输出压力恒定,但其流量则随色谱系统阻力而变化,故保留时间的重视性差,它们各有优缺点。目前恒流泵正逐渐取代恒压泵。恒流泵又
7、称机械泵,它又分机械注射泵和机械往复泵两种,应用最多的是机械往复泵。高效液相色谱仪工作原理高效液相色谱仪工作原理 2进样装置 高效液相色谱仪工作原理高效液相色谱仪工作原理3 3 分离系统分离系统色谱柱色谱柱 色谱柱是液相色谱的心脏部件,它包括柱管与固定相两部分。柱管材料有玻璃、不锈钢、铝、铜及内衬光滑的聚合材料的其他金属。玻璃管耐压有限,故金属管用得较多。一般色谱柱长530cm,内径为45mm,凝胶色谱柱内径312mm,制备往内径较大,可达25mm 以上。一般在分离前备有一个前置柱,前置柱内填充物和分离柱完全一样,这样可使淋洗溶剂由于经过前置柱为其中的固定相饱和,使它在流过分离柱时不再洗脱其中
8、固定相,保证分离技的性能不受影响。柱子装填得好坏对柱效影响很大。对于细粒度的填料(20m)一般采用匀浆填充法装柱,先将填料调成匀浆,然后在高压泵作用下,快速将其压入装有洗脱液的色谱柱内,经冲洗后,即可备用。高效液相色谱仪工作原理高效液相色谱仪工作原理4 4检测系统检测系统 目前有两种基本类型的检测器:一类是溶质性检测器,它仅对被分离组分的物理或化学特性有响应,属于这类检测器的有紫外、荧光、电化学检测器等。另一类是总体检测器,它对试样和洗脱液总的物理或化学性质有响应,属于这类检测器的有示差折光,蒸发光散射,电导检测器等。高效液相色谱仪工作原理高效液相色谱仪工作原理(1 1)紫外检测器)紫外检测器
9、 工作原理:基于Lambert-Beer定律,即被测组分对紫外光或可见光具有吸收,且吸收强度与组分浓度成正比。通用型检测器约有80的分析样品具有紫外吸收,可以使用这种检测器检 测。高效液相色谱仪工作原理高效液相色谱仪工作原理(1)紫外检测器紫外检测器 优点:a:灵敏度高b:线性范围广 C:对温度和流速不敏感,适于进行梯度洗脱限制:a:没有紫外吸收的物质不能检测b:应尽可能选择在检测波长下没有背景吸收的流动相(限制了一些截止波长在200300nm之间的良好溶剂的使用)高效液相色谱仪工作原理高效液相色谱仪工作原理(1)紫外检测器(2 2)荧光检测器)荧光检测器 原理:物质的分子或原子经光照射后,有
10、些电子被激发至较高的能 级,这些电子从高能级 跃至低能级时,物质会发出比入射光 波长较 长的光,这种光称为荧光。荧光检测器就是在样品的激发波长处检测发射光的强弱.荧光检测器是一种选择性检测器 不到20%的物质使用这种检测手段,许多药物采用这种检测方法.高效液相色谱仪工作原理高效液相色谱仪工作原理(1)紫外检测器(2 2)荧光检测器)荧光检测器 优点:a:灵敏度非常高(灵敏度在目前常用的HPLC检测器中最高),比紫外检测器高23个数量级,适合于痕量分析 b:可以用于梯度洗脱 c:对仪器的稳定性(如温度和压力的稳定性)依赖较小 d:选择性好,优于紫外缺点:a:适用范围有一定的局限性 只适用于有荧光
展开阅读全文