第十章紫外可见分析法参考课件.ppt

1、第十章紫外可见分析法优选第十章紫外可见分析法3 紫外可见光谱是由分子中价电子在不同的分子轨道之间跃迁产生的。紫外可见光谱是由分子中价电子在不同的分子轨道之间跃迁产生的。饱和单键的饱和单键的 电子电子 不饱和双键的不饱和双键的 电子电子 未成键的未成键的 n 电子（弧对电子）电子（弧对电子）轨道：电子围绕原子或分子运动的几率轨道：电子围绕原子或分子运动的几率 轨道不同，电子所具有能量不同轨道不同，电子所具有能量不同4反键轨道反键轨道成键轨道成键轨道5跃迁类型6 （1）*跃迁跃迁 饱和烃（甲烷，乙烷）饱和烃（甲烷，乙烷）很高，很高，150nm（远紫外区）（远紫外区）（2）*跃迁跃迁 处于处于 成键

2、轨道上的电子跃迁到成键轨道上的电子跃迁到*反键轨道反键轨道，不饱和有机化合物不饱和有机化合物-C=C-,很大（很大（104）为强吸收。）为强吸收。共轭体系共轭体系max（3）n*跃迁跃迁 孤对孤对n电子跃迁到电子跃迁到*反键轨道反键轨道,CO；CN；NN,较小（较小（10-100），吸收波长），吸收波长200400nm （4）n*跃迁跃迁孤对孤对n电子跃迁到电子跃迁到*反键轨道，含杂原子的饱和有机化合物反键轨道，含杂原子的饱和有机化合物 7max 104 10_100按能量大小：按能量大小：*n *n*n*n*CH3CH3NH2OHC=CC=OC=SN=NE跃迁类型跃迁类型实例实例C=O8*n

3、*n*不同波长光对样品作用不同，吸收强度不同肾上腺酮 值为435不同波长光对样品作用不同，吸收强度不同消除干扰和吸收池不匹配引起的误差位阻影响分子的平面性在一定下，c=1g/100ml，l=1cm时的吸光度。260nm，=0.2、Beer定律：AC（吸收物质浓度）三、吸收带与分子结构的关系518，求B12注射液注射液的浓度？纯度检查和杂质限量测定增色效应：吸收强度增强的效应分辨率：单色器分辨两条靠近的谱线的能力.轨道：电子围绕原子或分子运动的几率3双波长分光光度计六、偏离Beer定律的因素描述物质对单色光吸收强弱与液层厚度和待测物浓度的关系透光率范围：0-300%（5）电荷迁移跃迁）电荷迁移跃

4、迁 电磁辐射照射时，电子在分子内从给予体向接受体相电磁辐射照射时，电子在分子内从给予体向接受体相联系的轨道上跃迁。联系的轨道上跃迁。特点：摩尔吸光系数较大。特点：摩尔吸光系数较大。maxmax10104 4,定量分析定量分析 的检测灵敏度比较高的检测灵敏度比较高（6）配位场跃迁）配位场跃迁 发生在过渡元素的配位化合物中。发生在过渡元素的配位化合物中。能量相等的能量相等的d轨道或轨道或f轨道分裂成能量不等的轨道轨道分裂成能量不等的轨道特点：摩尔吸光系数较小。特点：摩尔吸光系数较小。maxmax10102 232hFeSCNFeSCN 91.1.吸收光谱（吸收曲线）：吸收光谱（吸收曲线）：不同波长

5、光对样品作用不同，吸收强度不同不同波长光对样品作用不同，吸收强度不同 以吸光度以吸光度A A为纵坐标，波长为纵坐标，波长为横坐标作图为横坐标作图 所得到的曲线所得到的曲线2.2.吸收光谱特征吸收光谱特征定性依据定性依据 吸收峰吸收峰maxmax 吸收谷吸收谷minmin 肩峰肩峰shsh 末端吸收末端吸收饱和饱和-*跃迁产跃迁产生强吸收不成峰生强吸收不成峰10*跃迁溶剂极性，max红移增大，溶剂极性增加，B精细结构简化或消失亚甲蓝阳离子水溶液的吸收光谱吸收峰位置向短波方向移动，叫蓝移（紫移，短移）配制一系列浓度不同的标准溶液，在一定波长下分别测定吸光度A。E2 200nm max=7000 强

6、吸收3两组分吸收光谱完全重叠混合样品测定257nm 142.吸光度测量范围：-0.3两组分吸收光谱完全重叠混合样品测定507，求B12的百分含量？已知361nm处的百分吸光系数为207260nm，=0.饱和烃（甲烷，乙烷）六、偏离Beer定律的因素纯度检查和杂质限量测定反射光和散射光的影响：（1）*跃迁钨灯或卤钨灯可见光源 3501000nm另配制对照液，精密称定对照品25.吸收峰位置向短波方向移动，叫蓝移（紫移，短移）（二）有机物结构的研究六、偏离Beer定律的因素2、Beer定律：AC（吸收物质浓度）原子轨道线性组合成分子轨道1纯度检查（杂质检查）色散元件 分出光波长不等距不饱和双键的 电

7、子描述物质对单色光吸收强弱与液层厚度和待测物浓度的关系1）主成分无吸收，杂质有吸收对于干扰组分b，1和2是等吸收波长；2）含有孤立生色团不用拉动吸收池，可以减小移动误差max102 弱带max104 强带强带 max102 弱带弱带13根据浓度单位的不同，分为：生色团取代基：B带长移，E2带 和K带合并原子轨道线性组合成分子轨道1）分子特点：C=O 与C=C共轭反射光和散射光的影响：（1）对max影响max 150 nm 200 nm 180-200 nm 200-400 nm从吸收光谱中初步推断官能团3两组分吸收光谱完全重叠混合样品测定对于干扰组分b，1和2是等吸收波长；反射光和散射光均是入

8、射光谱带宽度内的光不用拉动吸收池，可以减小移动误差max280nm(10500)(CHCH)n，CHCCO例：精密吸取B12注射液2.含孤立助色团和生色团的有机化合物0mg，用水溶液配成100ml。或采用不同溶剂后根据浓度单位的不同，分为：260nm，=0.E小，max100;max250 400nm，溶剂极性增强，短移max102 弱带与标准对照物谱图或标准谱图吸收带吸收峰在紫外可见光谱中的位置可分为R带、K带、B带、E带、电荷转移吸收带、配位体场吸收带1 1R R带由带由n n*跃迁产生跃迁产生含杂原子的不饱和基团含杂原子的不饱和基团:C:CO O；C CN N；NNN N E E小，小，

9、max100;max250 400nmmax200nm;max104max 200nm;max104共轭体系增长，共轭体系增长，maxmax红移，红移，maxmax溶剂极性溶剂极性，max max 红移（长移）红移（长移）143 3B B带芳香族化合物的主要特征吸收带带芳香族化合物的主要特征吸收带 苯苯max max 256nm256nm，宽带，具有精细结构；，宽带，具有精细结构；max=200max=200极性溶剂中，或苯环连有取代基，其精细结构消失极性溶剂中，或苯环连有取代基，其精细结构消失154 4E E带：带：芳香族化合物的特征吸收带芳香族化合物的特征吸收带 E E1 1 180nm

10、180nm maxmax10104 4 （常观察不到）（常观察不到）E E2 2 200nm 200nm maxmax=7000 =7000 强吸收强吸收 苯环被发色团取代且与苯环共轭时，苯环被发色团取代且与苯环共轭时，E E2 2带与带与K K带合并带合并 一起红移（长移），被助色团取代一起红移（长移），被助色团取代E E2 2带带maxmax 和和都变大都变大161.1.位阻影响位阻影响 共轭效应，吸收带长移，吸光系数增加共轭效应，吸收带长移，吸光系数增加 发色团在同一平面，易形成共轭发色团在同一平面，易形成共轭 位阻影响分子的平面性位阻影响分子的平面性 max280nm(10500)ma

11、x295.5nm(29000)顺式二苯乙烯顺式二苯乙烯反式二苯乙烯反式二苯乙烯172.2.跨环效应跨环效应 有有、不饱和醛酮结构，不饱和醛酮结构，适当的立体适当的立体排列使排列使R R带长移，吸收强度增强带长移，吸收强度增强 OCS183.3.溶剂效应溶剂效应（1 1）对）对maxmax影响影响 n n*跃迁溶剂极性跃迁溶剂极性，maxmax蓝移蓝移 *跃迁溶剂极性跃迁溶剂极性，maxmax红移红移 （2 2）对吸收光谱精细结构影响）对吸收光谱精细结构影响 溶剂极性溶剂极性，苯环精细结构消失，苯环精细结构消失194.pH4.pH值的影响值的影响 影响物质存在型体，影响吸收波长影响物质存在型体，

12、影响吸收波长max210.5nm,270nmmax235nm,287nmOH-H+-20描述物质对单色光吸收强弱与液层厚度和待测物浓度的关系描述物质对单色光吸收强弱与液层厚度和待测物浓度的关系1 1、LambertLambert定律：定律：AlAl（吸收层厚度）2 2、BeerBeer定律：定律：ACAC（吸收物质浓度）0lgITIATEcl 透 光 率吸 光 度0l gITIATEcl透光率吸光度1010AE c lT 透光率 二者的结合称为朗伯二者的结合称为朗伯比耳定律，其数学表达式为：比耳定律，其数学表达式为：A A：吸光度：吸光度E E：吸光系数：吸光系数C C：溶液浓度：溶液浓度l

13、l：光路长度：光路长度211、适用条件：、适用条件：1.单色光单色光 2.稀溶液（稀溶液（10-2 10-5 M）2、吸收度的加和性、吸收度的加和性：a、b、c三种物质共存时3、该定律适用于固体、液体和气体样品该定律适用于固体、液体和气体样品cbaAAAA总224、吸光系数（E）：吸光物质在单位浓度及单位厚度时的 吸光度。根据浓度单位的不同，分为：（1）摩尔吸光系数）摩尔吸光系数 在一定下，c=1mol/L，l=1cm时的吸光度（2）百分吸光系数）百分吸光系数 在一定下，c=1g/100ml，l=1cm时的吸光度。（3）两者关系）两者关系1%1cmE1%110cmME231、吸光系数不随浓度和

14、光程长度的改变而改变，仅与物质 本身的性质有关，与待测物浓度无关；2、（1）不同物质，对同一，一般不同；（，吸光能力）（2）同一物质，对不同，一般不同（max）24 例：氯霉素（323.15），m a x=278 nm，C=2.00mg/100ml T%=24.3%求：,30711000.2614.0lg3%11CLTEcm992010%11cmEM%11cmE2526（一）（一）化学因素化学因素Lambert-BeerLambert-Beer定律适用范围：稀溶液（定律适用范围：稀溶液（1010-2-2mol/Lmol/L）当溶液中浓度改变时，溶液可能产生离解，缔合与溶剂间的作用等而产生偏离。

15、-6mol/L b.1.2710-4-4mol/L亚甲蓝阳离子水溶液的吸收光谱亚甲蓝阳离子水溶液的吸收光谱例：亚甲蓝阳离子水溶液单体吸收峰在660nm，二聚体吸收峰在610nm。随浓度增大660nm吸收峰减弱，610nm处吸收峰增强，从而使吸收度与浓度关系发生偏离。27（二）（二）光学因素光学因素a.a.非单色光非单色光 理论要求：平行单色光，理论要求：平行单色光，实际：光源复合光实际：光源复合光 28b.b.杂散光的影响：杂散光的影响：杂散光是指从单色器分出的光不在入射光谱带宽度范围杂散光是指从单色器分出的光不在入射光谱带宽度范围内，与所选波长相距较远内，与所选波长相距较远杂散光来源：仪器本

16、身缺陷；光学元件污染造成杂散光来源：仪器本身缺陷；光学元件污染造成杂散光可使吸收光谱变形，吸光度变值杂散光可使吸收光谱变形，吸光度变值c.c.反射光和散射光的影响：反射光和散射光的影响：反射光和散射光均是入射光谱带宽度内的光反射光和散射光均是入射光谱带宽度内的光可使透射光减弱，可使透射光减弱，AA，一般可用空白对比校正消除，一般可用空白对比校正消除d d非平行光的影响：非平行光的影响：使光程使光程，l l ，AA29（三）透光率的测量误差（三）透光率的测量误差TT 影响测定结果的相对误差两个因素：影响测定结果的相对误差两个因素：T T和和T T 0.434lgcTcTT浓度的相对误差TELTE

17、LELACln434.0lg1TTdTCdClnTTTCClg434.030以吸光度A为纵坐标，波长为横坐标作图2、Beer定律：AC（吸收物质浓度）2）跃迁类型及吸收峰位置：杂散光来源：仪器本身缺陷；生色团取代基：B带长移，E2带 和K带合并共轭效应，吸收带长移，吸光系数增加溶剂极性，max 红移（长移）取代基的种类、位置和数目第二节 紫外-可见分光光度计（二）纯度检查和杂质限量测定六元氮芳杂环化合物，与相应的芳环相似，增加n*，B带强度增大，精细结构简化。507，求B12的百分含量？已知361nm处的百分吸光系数为2070mg，用水溶液配成100ml。Lambert-Beer定律适用范围：

18、稀溶液（10-2mol/L）(CHCH)n，CHCCONN,较小（10-100），吸收波长200400nm波长准确度：仪器显示波长与实际波长之差0.极性溶剂中，或苯环连有取代基，其精细结构消失TT影响因素：影响因素：1 1）暗噪音：）暗噪音：与检测器和放大电路等各部件的不确切性有关，与检测器和放大电路等各部件的不确切性有关，与光讯号无关与光讯号无关，可视为一个常量。，可视为一个常量。其在其在A为为0.20.7范围内，造成相对误差较小，范围内，造成相对误差较小，为测量最适宜范围。为测量最适宜范围。31 讯号噪音亦称讯号散粒噪音。光敏元件受光照射时的讯号噪音亦称讯号散粒噪音。光敏元件受光照射时的电

19、子迁移，每一单位时间中电子迁移数量是不相等的，而电子迁移，每一单位时间中电子迁移数量是不相等的，而是在某一均值周围的随机数，形成测量光强时的不确定性。是在某一均值周围的随机数，形成测量光强时的不确定性。随机数变动的幅度随光照增强而增大，与光的波长及光敏随机数变动的幅度随光照增强而增大，与光的波长及光敏元件的品质有关。元件的品质有关。2 2）讯号噪音：与光讯号有关）讯号噪音：与光讯号有关3233341.1.光源光源 钨灯或卤钨灯钨灯或卤钨灯可见光源可见光源 3501000nm氢灯或氘灯氢灯或氘灯紫外光源紫外光源 200400nm2单色器：包括狭缝、准直镜、色散元件单色器：包括狭缝、准直镜、色散元

20、件35 棱镜棱镜对不同波长的光折射率不同对不同波长的光折射率不同色散元件色散元件 分出光波长不等距分出光波长不等距 光栅光栅衍射和干涉衍射和干涉 分出光波长等距分出光波长等距363吸收池：吸收池：玻璃玻璃能吸收能吸收UV光，仅适用于可见光区光，仅适用于可见光区 石英石英不吸收紫外光，适用于紫外和可见光区不吸收紫外光，适用于紫外和可见光区 要求：匹配性（对光的吸收和反射应一致）要求：匹配性（对光的吸收和反射应一致）4检测器：将光信号转变为电信号的装置检测器：将光信号转变为电信号的装置5记录装置：记录装置：讯号处理和显示系统光电池光电池光电管光电管光电倍增管光电倍增管二极管阵列检测器二极管阵列检测

21、器371 1单光束分光光度计：单光束分光光度计：特点：使用时来回拉动吸收池 移动误差对光源要求高比色池配对(一一)几种光路类型几种光路类型382 2双光束分光光度计：双光束分光光度计：特点：不用拉动吸收池，可以减小移动误差对光源要求不高可以自动扫描吸收光谱 393 3双波长分光光度计双波长分光光度计 特点：利用吸光度差值定量消除干扰和吸收池不匹配引起的误差40收峰加强同时使吸收峰长移的基团B带精细结构简化杂散光可使吸收光谱变形，吸光度变值制成2mg/ml的HCl溶液，310nm下测定250300nm有弱吸收，有羰基存在特点：摩尔吸光系数较小。孤对n电子跃迁到*反键轨道,CO；色散元件 分出光波

22、长不等距含杂原子的不饱和基团:CO；max 150 nm 200 nm 180-200 nm 200-400 nm很高，150nm（远紫外区）样品溶液在1和2处测定吸光度，得1.max102 弱带同理 消除a的影响，测b50mL，加水稀释至10.二者的结合称为朗伯比耳定律，其数学表达式为：4 4光多道二极管阵列检测分光光度计光多道二极管阵列检测分光光度计4142(二二)光学性能光学性能1.1.波长范围：波长范围：190-1100nm190-1100nm2.2.波长准确度：仪器显示波长与实际波长之差波长准确度：仪器显示波长与实际波长之差0.3nm0.3nm3.3.波长重现性：波长重现性：0.2n

23、m0.2nm4.4.透光率范围：透光率范围：0-300%0-300%5.5.吸光度测量范围：吸光度测量范围：-0.447-0.447+3.00+3.006.6.光度准确度：光度准确度：0.3%0.3%7.7.光度重复性：光度重复性：0.3%0.3%8.8.分辨率：单色器分辨两条靠近的谱线的能力分辨率：单色器分辨两条靠近的谱线的能力.260nm.260nm，=0.3nm9.9.杂散光：杂散光：220nm220nm处（处（1%NaI1%NaI）0.1%0.1%43(三三)仪器的校正仪器的校正1.1.波长的校正波长的校正氢灯或氘中的较强谱线氢灯或氘中的较强谱线486.13nm(F486.13nm(F

24、线线)和和656.28nm656.28nm（C C线）线）稀土玻璃（镨钕、钬）、某些元素（汞、钾、铯）苯稀土玻璃（镨钕、钬）、某些元素（汞、钾、铯）苯蒸汽检查和校正波长读数。蒸汽检查和校正波长读数。442.2.吸光度的校正吸光度的校正60mg60mg重铬酸钾用重铬酸钾用0.005mol/L0.005mol/L的硫酸溶液稀释至的硫酸溶液稀释至1000ml1000ml，在，在规定波长处测定并计算吸收系数，与规定值比较。规定波长处测定并计算吸收系数，与规定值比较。规定值：规定值：235nm 123.0235nm 123.0126.0126.0 257nm 142.8 257nm 142.8146.2

25、146.2 313nm 47.0 313nm 47.050.350.3 350nm 105.5 350nm 105.5108.5108.53.3.吸收池校正吸收池校正 两吸收池测定的差值小于两吸收池测定的差值小于1%1%45不同波长光对样品作用不同，吸收强度不同1测A1b组分不干扰可按单组分定量测ca1吸光系数法与光讯号无关，可视为一个常量。根据浓度单位的不同，分为：极性溶剂中，或苯环连有取代基，其精细结构消失位阻影响分子的平面性（一）有机物的紫外吸收光谱吸收带吸收峰在紫外可见光谱中的位置可分为R带、K带、B带、E带、电荷转移吸收带、配位体场吸收带B带精细结构简化杂散光可使吸收光谱变形，吸光度

26、变值二者的结合称为朗伯比耳定律，其数学表达式为：色散元件 分出光波长不等距第二节 紫外-可见分光光度计2、Beer定律：AC（吸收物质浓度）对于a，两波长的吸光度之差足够大；波长准确度：仪器显示波长与实际波长之差0.E小，max 主成分吸收主成分吸收与纯品比较与纯品比较 EE，光谱变形，光谱变形51对于干扰组分b，1和2是等吸收波长；005mol/L的硫酸溶液稀释至1000ml，在规定波长处测定并计算吸收系数，与规定值比较。跃迁类型及吸收峰位置：配制一系列浓度不同的标准溶液，在一定波长下分别测定吸光度A。*n*n*配制一系列浓度不同的标准溶液，在一定波长下分别测定吸光度A。跃迁类型及吸收峰位置

27、：石英不吸收紫外光，适用于紫外和可见光区1吸光系数法描述物质对单色光吸收强弱与液层厚度和待测物浓度的关系00mg/100ml T%=24.3、该定律适用于固体、液体和气体样品生色团取代基：B带长移，E2带 和K带合并0mg，用水溶液配成100ml。第二节 紫外-可见分光光度计（一）有机物的紫外吸收光谱2K带由共轭双键的*跃迁产生0mg，用水溶液配成100ml。四、影响吸收带位置的因素220800nm无吸收，可能无共轭体系，无羰基2杂质限量的检测杂质限量的检测1%14330.05435 11.1 10/1001.1 10/1.1 10%1000.06%2cmAcElgmlmg ml肾上腺酮例：肾

28、上腺素中微量杂质例：肾上腺素中微量杂质肾上腺酮含量计算肾上腺酮含量计算 制成制成2mg/ml2mg/ml的的HClHCl溶液，溶液，310nm310nm下测定下测定 规定规定 A A3103100.05.0.05.求杂质限量？求杂质限量？肾上腺酮肾上腺酮 值为值为4354351%1cmE52（一）单组分的定量方法（一）单组分的定量方法 1 1吸光系数法吸光系数法 2 2标准曲线法标准曲线法 3 3对照法：外标一点法对照法：外标一点法AEc l定量依据：注意注意:1:1）选择吸收光谱中的吸收峰对应的波长）选择吸收光谱中的吸收峰对应的波长 2 2）多个吸收峰，选择无干扰的、较高的峰）多个吸收峰，选

29、择无干扰的、较高的峰 3 3）测定波长大于溶剂的截止波长）测定波长大于溶剂的截止波长53/100Ac gmLE l/Ac mol Ll或1 1吸光系数法（绝对法）吸光系数法（绝对法）例：维生素例：维生素B B1212 的水溶液在的水溶液在361nm361nm处的百分吸光系数为处的百分吸光系数为207207，用，用1cm1cm比色池测得某维生素比色池测得某维生素B B1212溶液的吸光度溶液的吸光度是是0.4140.414，求该溶液的浓度，求该溶液的浓度?0.4140.00200(/100)207 1AcgmLE l解：解：例精密称取B12样品25.0mg，用水溶液配成100ml。精密吸取10.

30、00ml，又置100ml容量瓶中，加水至刻度。取此溶液在1cm的吸收池中，于361nm处测定吸光度为0.507，求B12的百分含量？已知361nm处的百分吸光系数为207解mLgmLgCi/1045.2100/1045.21207507.053mLgC/1050.2100101001050.252样%0.98%1001050.21045.2%100%5512样CCBi55六、偏离Beer定律的因素影响物质存在型体，影响吸收波长2两组分吸收光谱部分重叠影响物质存在型体，影响吸收波长根据浓度单位的不同，分为：制成2mg/ml的HCl溶液，310nm下测定生色团取代基：B带长移，E2带 和K带合并六

31、、偏离Beer定律的因素（一）单组分的定量方法跃迁类型和吸收峰位置：三、吸收带与分子结构的关系*n*n*六、偏离Beer定律的因素1吸光系数法（绝对法）（1）对max影响直接考察杂质（2）对吸收光谱精细结构影响414，求该溶液的浓度?六、偏离Beer定律的因素三、吸收带与分子结构的关系n*(275-295nm)E2 200nm max=7000 强吸收2 2标准曲线法标准曲线法配制一系列浓度不同的标准溶液，在一定波长下分别测配制一系列浓度不同的标准溶液，在一定波长下分别测定吸光度定吸光度A A。以以A A为纵坐标，浓度为纵坐标，浓度c c为横坐标，绘制为横坐标，绘制A-cA-c标准曲线。标准曲

32、线。完全相同的条件下，测定被测溶液的吸光度，完全相同的条件下，测定被测溶液的吸光度，并从标准曲线上找出对应的被测溶液浓度或含量。并从标准曲线上找出对应的被测溶液浓度或含量。00.10.20.30.40.50.60.70.8024681012Concentration(ug/mL)AbsBlank Standard SampleSample56示例芦丁含量测定mLmgmLmLmLmg250.32550/200.0样品标样分别移取57 相同条件下配制样品溶液和标准溶液，在同一波长相同条件下配制样品溶液和标准溶液，在同一波长处测二者吸光度处测二者吸光度cAcAccAA样样标样样标标标例：精密吸取例：

33、精密吸取B B1212注射液注射液2.50mL2.50mL，加水稀释至，加水稀释至10.00mL10.00mL；另配制对照液，精密称定对照品另配制对照液，精密称定对照品25.00mg 25.00mg，加水稀释至，加水稀释至1000mL1000mL。在。在361nm361nm处，用处，用1cm1cm吸收池，分别测定吸光度为吸收池，分别测定吸光度为0.5080.508和和0.5180.518，求，求B B1212注射液注射液的浓度？注射液注射液的浓度？mLgCCii/1.98518.0508.01000100000.25105.2581纯度检查（杂质检查）两组分吸收光谱完全重叠影响测定结果的相对误

34、差两个因素：T和Tmax104,定量分析根据浓度单位的不同，分为：应，必须保证一定的狭缝宽度按能量大小：*n *n*四、影响吸收带位置的因素：收峰加强同时使吸收峰长移的基团max104 强带00mg，加水稀释至1000mL。-6mol/L b.3双波长分光光度计4、吸光系数（E）：吸光物质在单位浓度及单位厚度时的石英不吸收紫外光，适用于紫外和可见光区应，必须保证一定的狭缝宽度*n*n*四、影响吸收带位置的因素纯度检查和杂质限量测定4检测器：将光信号转变为电信号的装置max n *n*杂散光可使吸收光谱变形，吸光度变值3两组分吸收光谱完全重叠混合样品测定在一定下，c=1mol/L，l=1cm时的

35、吸光度按能量大小：*n *n*1吸光系数法例精密称取B12样品25.不用拉动吸收池，可以减小移动误差三、吸收带与分子结构的关系-不饱和醛、酮、酸、酯吸收峰位置向长波方向的移动，叫红移（长移）能吸收紫外-可见光的基团有、不饱和醛酮结构，适当的立体排列使R带长移，吸收强度增强7范围内，造成相对误差较小，特点：摩尔吸光系数较大。1 1两组分吸收光谱不重叠（互不干扰）两组分吸收光谱不重叠（互不干扰）两组分在各自两组分在各自maxmax下测定下测定分别按单组分定量分别按单组分定量1111aaaaaaAAEc lcE l由2222bbbbbbAAEc lcE l由1122abAA过程：测定测定6122ab

36、EE、已知1111aaaaaaAAEc lcE l由22222a babababAAAEc lEc l由 2 2两组分吸收光谱部分重叠两组分吸收光谱部分重叠 11测测A1bA1b组分不干扰组分不干扰可按单组分定量测可按单组分定量测c ca a 2 2测测A2aA2a组分干扰组分干扰不能按单组分定量测不能按单组分定量测c cb b 定量定量Ca1aE 已知定量定量Cb62 3 3两组分吸收光谱完全重叠两组分吸收光谱完全重叠混合样品测定混合样品测定 （1）解线性方程组法）解线性方程组法11112222aba baba bEEAEEA测定和；测定和；11111a babababAAAEcEc2222

37、2a babababAAAEcEc63（2 2）等吸收双波长法）等吸收双波长法测定测定a a，消除，消除b b的影响的影响步骤：步骤：1.1.选择选择1 1和和2 2 对于干扰组分对于干扰组分b b，1 1和和2 2是等吸收波长；是等吸收波长；对于对于a a，两波长的吸光度之差足够大；，两波长的吸光度之差足够大；3 3两组分吸收光谱完全重叠两组分吸收光谱完全重叠混合样品测定混合样品测定64步骤步骤2.a2.a的对照品溶液在的对照品溶液在1 1和和2 2处测定吸光度，得处测定吸光度，得b b的对照品溶液在的对照品溶液在1 1和和2 2处测定吸光度，得处测定吸光度，得样品溶液在样品溶液在1 1和和

38、2 2处测定吸光度，得处测定吸光度，得E1a和E2a651212()()aabbAAAA111222a baba babAAAAAA12a ba ba bAAA2211()()ababAAAA12120bbbbAAAA即12aaAA12()aaaaaEEcEc 12a ba baaaaAAcEEE66同理同理 消除消除a a的影响，测的影响，测b b1212aaaAA选的等吸收点 和1212()a bbbbbbbbAAAEEcEc 12a ba bbbbbAAcEEE67（一）有机物的紫外吸收光谱（一）有机物的紫外吸收光谱 从紫外吸收光谱推断：从紫外吸收光谱推断：a.a.分子骨架分子骨架 b.

39、b.发色团之间的共轭关系发色团之间的共轭关系 c.c.取代基的种类、位置和数目取代基的种类、位置和数目1.1.饱和碳氢化合物饱和碳氢化合物 跃迁类型：跃迁类型：*,需很大能量需很大能量 吸收峰位置：远紫外区，吸收峰位置：远紫外区，200200400nm400nm无吸收无吸收 682.2.含孤立助色团和生色团的有机化合物含孤立助色团和生色团的有机化合物 1 1）含有孤立助色团）含有孤立助色团 电子类型：电子类型：和和n n电子电子 跃迁类型：跃迁类型：n n*2 2）含有孤立生色团）含有孤立生色团 电子类型：电子类型：和和n n电子电子 跃迁类型：跃迁类型：n n*(190nm)(190nm)*

40、（150-180nm150-180nm）n n*(275-295nm)(275-295nm)3.3.共轭烯烃共轭烯烃 两个双键只隔一个单键成共轭大两个双键只隔一个单键成共轭大键键 跃迁类型及吸收峰位置：跃迁类型及吸收峰位置：*较孤立双键能级差减少，吸收长移较孤立双键能级差减少，吸收长移 694.4.-不饱和醛、酮、酸、酯不饱和醛、酮、酸、酯 1 1）分子特点：）分子特点：C=O C=O 与与C=CC=C共轭共轭 2 2）跃迁类型及吸收峰位置：）跃迁类型及吸收峰位置：*200 200260nm 260nm 约约1000010000 n n*310 310350nm 350nm 100104 10

41、_100与检测器和放大电路等各部件的不确切性有关，描述物质对单色光吸收强弱与液层厚度和待测物浓度的关系生色团取代基：B带长移，E2带 和K带合并b的对照品溶液在1和2处测定吸光度，得-不饱和醛、酮、酸、酯（2）对吸收光谱精细结构影响2）主成分强吸收，杂质无吸收/弱吸收257nm 142.3B带芳香族化合物的主要特征吸收带氢灯或氘灯紫外光源 200400nm两组分吸收光谱完全重叠（二）有机物结构的研究3双波长分光光度计稀土玻璃（镨钕、钬）、某些元素（汞、钾、铯）苯蒸汽检查和校正波长读数。3两组分吸收光谱完全重叠混合样品测定与标准对照物谱图或标准谱图E2 200nm max=7000 强吸收共轭效

42、应，吸收带长移，吸光系数增加257nm 142.-不饱和醛、酮、酸、酯电磁辐射照射时，电子在分子内从给予体向接受体相联系的轨道上跃迁。1.杂散光是指从单色器分出的光不在入射光谱带宽度范围内，与所选波长相距较远配制一系列浓度不同的标准溶液，在一定波长下分别测定吸光度A。极性溶剂中，或苯环连有取代基，其精细结构消失0mg，用水溶液配成100ml。特点：摩尔吸光系数较小。杂散光可使吸收光谱变形，吸光度变值杂散光来源：仪器本身缺陷；*E1，E2，B三个吸收带，有取代基长移，（二）有机物结构的研究（二）有机物结构的研究 1.1.从吸收光谱中初步推断官能团从吸收光谱中初步推断官能团 220220800nm800nm无吸收，可能无共轭体系，无羰基无吸收，可能无共轭体系，无羰基 210210250nm250nm有吸收，两个共轭单位有吸收，两个共轭单位 260260300nm300nm有强吸收，可能有有强吸收，可能有3 35 5个共轭单位个共轭单位 250250300nm300nm有弱吸收，有羰基存在有弱吸收，有羰基存在 250250300nm300nm有中吸收，有苯环存在有中吸收，有苯环存在 如果有颜色，共轭生色团一般在如果有颜色，共轭生色团一般在5 5个以上个以上