最新7发酵工程制药课件.ppt
- 【下载声明】
1. 本站全部试题类文档,若标题没写含答案,则无答案;标题注明含答案的文档,主观题也可能无答案。请谨慎下单,一旦售出,不予退换。
2. 本站全部PPT文档均不含视频和音频,PPT中出现的音频或视频标识(或文字)仅表示流程,实际无音频或视频文件。请谨慎下单,一旦售出,不予退换。
3. 本页资料《最新7发酵工程制药课件.ppt》由用户(晟晟文业)主动上传,其收益全归该用户。163文库仅提供信息存储空间,仅对该用户上传内容的表现方式做保护处理,对上传内容本身不做任何修改或编辑。 若此文所含内容侵犯了您的版权或隐私,请立即通知163文库(点击联系客服),我们立即给予删除!
4. 请根据预览情况,自愿下载本文。本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。
5. 本站所有资源如无特殊说明,都需要本地电脑安装OFFICE2007及以上版本和PDF阅读器,压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 最新 发酵 工程 制药 课件
- 资源描述:
-
1、L/O/G/O第一节 概述UPSTREAM PROCESSES-genetics,cell-inoculum development-media formulation-sterilization-inoculationFERMENTATIONProcess Control上游工程上游工程Fermentation engineeringDOWNSTREAM PROCESSES-product extraction,purification&assay-waste treatment-by product recoveryFERMENTATIONProcess Control下游工程下游工程 F
2、ermentation engineering1、微生物菌体的发酵SCP、药用真菌(冬虫夏草、茯苓等)生物防治制剂(如苏云金杆菌)活性乳制剂 细胞的生长与产物的积累成平行关系,生长速率最大的时期也是产物合成最高阶段。微生物发酵类型微生物发酵类型2、微生物酶发酵各种酶制剂:糖化酶、-淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶等天冬酰胺酶:抗癌纳豆激酶、链激酶:治疗血栓青霉素酰化酶:青霉素生产需要诱导或遭受阻遏、抑制等调控作用,在菌种选育、培养基配制以及发酵条件等方面需注意。3、微生物代谢产物发酵初级代谢产物:与菌体生长相伴随的产物、对菌体生长、分化和繁殖是必须的氨基酸、核苷酸、维生素、糖类等菌体对其合成反馈控制严密
3、,一般不过量积累次级代谢产物:与菌体生长不相伴随,以初级代谢的中间产物为原料而合成抗生素、生物碱、毒素、色素、胞外多糖等结构常较复杂对环境条件敏感4、微生物转化发酵利用微生物细胞的一种或几种酶,对外源化合物的特定部位进行加工,如加入羟基、还原双键、脱氧或切断支链等。反应最显著的特点是特异性强,包括反应特异性、结构位置特异性、立体特异性。如:甾体转化如:甾体转化可的松可的松(Cortisone)发酵技术的应用产物:产物:微生物细胞,酶,活性物质,特殊化学品和食品添加剂。微生物细胞,酶,活性物质,特殊化学品和食品添加剂。发酵工业简介发酵工业简介u发酵食品发酵食品u有机酸有机酸u氨基酸氨基酸u核酸类
4、物质核酸类物质u酶制剂酶制剂u医药工业(抗生素医药工业(抗生素)u饲料工业(单细胞蛋白)饲料工业(单细胞蛋白)u环境工程(废物处理)环境工程(废物处理)u其它其它(冶金工业(冶金工业)Fermentation Industry uFermented FoodsuOrganic AcidsuAmino AcidsuNucleotidesuEnzymes uPharmaceutical(Antibiotics)uFeedstuff(eg.SCP)uEnvironmental Application (Waste Treatment)uOthers(eg.Metallurgical industry
5、)药用发酵产品分类药用发酵产品分类生物来源作用对象作用机制化学结构细菌真菌放线菌抗菌药抗肿瘤药抗病毒药除草剂酶抑制剂免疫调节剂抑制细胞壁合成药影响细胞膜功能药干扰蛋白质合成药抑制核酸合成药抑制生物能量反应药抗生素维生素氨基酸核苷酸甾体激素酶及酶抑制剂发酵工程制药的特点发酵工程制药的特点微生物菌种选育获得高产发酵的理论产量存在约10%的变量发酵过程常温常压,操作条件温和纯种培养、无菌条件生产过程是以生物体的自动调节方式进行的分子水平生产,定向发酵、突变、杂交等手段投资少、见效快发展趋势发展趋势利用DNA重组技术和细胞工程技术的发展、新的工程菌和新型微生物的开发新型的生理活性多肽和蛋白质类药物:干
6、扰素、白介素促红细胞生成素等;新型菌体制剂和疫苗。红细胞生成素红细胞生成素 (治疗贫血治疗贫血)生长激素生长激素 (促进生长促进生长)胰岛素胰岛素 (治疗糖尿病治疗糖尿病)干扰素干扰素 (抗病毒、抗肿瘤抗病毒、抗肿瘤)L/O/G/O第二节 发酵制药中的微生物常见的制药用微生物常见的制药用微生物细菌放线菌真菌细菌之大肠杆菌属细菌之大肠杆菌属(Escherichia coli)生产天冬氨酸、苏氨酸、缬氨酸等氨基酸类药物基因工程的载体细菌之短杆菌属细菌之短杆菌属(Brevibacterium)维生素B12、氨基酸、核苷酸类药物生产中常用的菌种,也是酶法合成生产辅酶A的菌种。细菌之棒状杆菌属细菌之棒状
7、杆菌属(Corynebacterium)生产氨基酸、核苷酸类药物,用于甾体转化是谷氨酸和其他氨基酸的高产菌,如北京棒杆菌AS1.299钝齿棒杆菌AS1.542细菌之芽孢杆菌属细菌之芽孢杆菌属(Bacillus)生产氨基酸、核苷酸、抗生素类、维生素B12用于甾体转化等细菌之假单胞菌属细菌之假单胞菌属(Pseudomonas)生产维生素B12、氨基酸、核苷酸类进行类固醇(甾体)转化有些菌株可利用烃类生产单细胞蛋白细菌之乳酸杆菌属细菌之乳酸杆菌属(Lactobacillus)生产抗癌类药物放线菌放线菌 抗生素12000余种,60%左右来自放线菌,经济价值大。放线菌之链霉菌属放线菌之链霉菌属(Stre
8、ptomyces)灰色链霉菌(Streptomyces griseus)产链霉素金霉素链霉菌(Streptomyces aureofaciens)产金霉素红霉素链霉菌(Streptomyces erythreus)产红霉素龟裂链霉菌(Streptomyces rimosus)产土霉素放线菌之诺卡氏菌属放线菌之诺卡氏菌属(Norcadia)生产利福霉素、蚊霉素等。放线菌之小单胞菌属放线菌之小单胞菌属(Micromonospora)多种可产抗生素,如棘孢小单胞菌(M.echinospora)产庆大霉素。真菌之根霉属真菌之根霉属(Rhizopus)生产甾体激素、延胡索酸及酶制剂等。真菌之曲霉属真菌之
9、曲霉属(Aspergillus)生产枸橼酸、葡萄糖酸、有机酸类、抗生素,进行甾体转化。真菌之青霉属真菌之青霉属(Penicillum)产黄青霉(Penicillum chrysogenum)生产青霉素,也可用来生产葡萄糖氧化酶、葡萄糖酸、柠檬酸和抗坏血酸。真菌之头孢霉菌属真菌之头孢霉菌属(Cephalosporium)产黄头孢霉(Cephalosporium chrysogen)顶孢头孢霉菌(Cephalosporium acremonium)都生产头孢菌素C真菌之酵母菌属真菌之酵母菌属(Saccharomyces)u啤酒酵母(Saccharomyces cerevisiae):生产啤酒、酒精
10、、药用酵母等;核酸、麦角固醇、细胞色素C、凝血质和辅酶A等。u红酵母(Rhodotorula):-胡萝卜素u棉病针孢酵母(Nematspora gossypii):核黄素真菌之其它真菌之其它u牛肝菌属:含有人体必需的8种氨基酸,还含有腺膘呤、胆碱和腐胺等生物碱。u灵芝属:灵芝多糖、灵芝多肽、三萜类、16种氨基酸(其中含有七种人体必需氨基酸)、蛋白质、甾类、甘露醇、香豆精苷、生物碱、有机酸(主含延胡索酸),以及微量元素Ge、P、Fe、Ca、Mn、Zn等。发酵菌种的选育要求发酵菌种的选育要求生产力:能在廉价的培养基上迅速生长,所需的代谢产物的产量高,其它类似代谢产物少。操作性:培养条件简单,发酵易
11、控制,产品易分离。稳定性:抗噬菌体能力强,菌种纯粹,遗传性状稳定、不易变异退化。安全性:非病源菌,不产有害生物活性物质或毒素。诱变育种的理论依据是诱变育种的理论依据是DNA分子结构的改变。分子结构的改变。分为:分为:菌种选育菌种选育自然选育诱变育种杂交育种原生质体融合基因工程从自然界中获得新菌种从自然界中获得新菌种u土壤、空气、动植物等,严重污染的水域,极端环境等u基本程序:采样预处理富集培养筛选鉴定野生型菌株诱变育种诱变育种物理或化学方法诱发突变。物理诱变剂:紫外线、X-射线、-射线等化学诱变剂:氮芥、亚硝酸、5-氟尿嘧啶等u自然选育自然选育:不经人工处理利用微生物的自然突变进行育种的过程。
12、u诱变育种诱变育种:利用物理、化学等因素,诱发基因突变,并从中筛选出具有某一优良性状的突变体。u杂交育种杂交育种:借助基因重组,使不同菌株的遗传物质得以交换。u原生质体融合育种原生质体融合育种:借助原生质融合技术实现遗传物质的交换。u基因工程育种基因工程育种:DNA体外重组技术定向育种,技术含量高,应用面广。基因突变及其机制基因突变及其机制 诱变育种操作步骤诱变育种操作步骤质质 粒粒 育育 种种转基因工程菌的构建转基因工程菌的构建菌种保藏菌种保藏(Culture conservation)u目的:保证菌种经过较长时间后仍保持生活能力,防止被杂菌污染,形态特征和生理形状尽可能不发生变异。菌种保藏
13、三要素菌种保藏三要素典型菌种的优良纯种的休眠体;创造有利于种子休眠的环境(低温、干燥、缺氧、避光、缺少营养);尽可能采用多种不同的手段保藏同一菌株。菌种保藏的常用方法菌种保藏的常用方法斜面低温保藏法石蜡油封存法砂土管保藏法麸皮保藏法甘油悬液保藏法冷冻真空干燥保藏法液氮超低温保藏法宿主保藏法方法名称主要特点适用范围保藏期斜面低温保藏法传代培养,4保藏各种微生物的短期保藏。1-6个月石蜡油封存法石蜡油隔绝空气,室温或4保藏各种微生物的中短期保藏,不适用某些能分解烃类的菌种。1-2年砂土管保藏法沙土管作载体,干燥器中抽真空,室温或4保藏产孢子微生物和芽孢细菌的长期保藏,不适用对干燥敏感的微生物1-1
14、0年麸皮保藏法麸皮作载体,干燥,4保藏产孢子霉菌和某些放线菌,工厂多采用此法1年甘油悬液保藏法悬浮于10-15%甘油中,需低温冰箱基因工程菌1年/10年冷冻真空干燥保藏法用保护剂制备悬液,快速冻结,减压抽真空,需冻干机各类微生物5-15年液氮超低温保藏法保护剂,超低温(-196),需超低温液氮设备各类微生物15年以上宿主保藏法与培养基混合直接低温保存专性活细胞寄生微生物(如病毒)第三节第三节 发酵方式发酵方式(一)分批培养(一)分批培养(二)连续培养(二)连续培养(三)其它培养方法(三)其它培养方法(一)分批培养(一)分批培养1、分批培养的定义、分批培养的定义2、分批培养的生长过程、分批培养的
15、生长过程3、分批培养过程中影响细胞生长的因素、分批培养过程中影响细胞生长的因素 分批培养是一种间分批培养是一种间歇式的培养方法,歇式的培养方法,在每一批次的培养在每一批次的培养过程中,不再加入过程中,不再加入其它营养物料。待其它营养物料。待生物反应进行到一生物反应进行到一定程度之后,将全定程度之后,将全部培养液倒出、进部培养液倒出、进行后道工序处理。行后道工序处理。为了提高生物反应器在分批培养中的效率为了提高生物反应器在分批培养中的效率通常采用多级分批培养的办法。通常采用多级分批培养的办法。即在小型生物反应器中接入少量种子即在小型生物反应器中接入少量种子经过分批培养,来获得较大数量的细胞作为种
16、子经过分批培养,来获得较大数量的细胞作为种子再转入到大型生物反应器中再转入到大型生物反应器中分批培养的设备要求较少分批培养的设备要求较少操作也较简单操作也较简单工业微生物生产中经常采用工业微生物生产中经常采用2、分批培养的生长过程、分批培养的生长过程培养中的细胞经过培养中的细胞经过4个生长阶段:个生长阶段:(1)延迟期)延迟期(2)指数生长期)指数生长期(3)静止期)静止期(4)衰亡期)衰亡期1、延迟期、延迟期(1)种龄越长,延迟期越长,)种龄越长,延迟期越长,(2)接种量越少、延迟期越长。)接种量越少、延迟期越长。4、衰亡期、衰亡期营养物质消耗贻尽培养液中有营养物质消耗贻尽培养液中有害物质积
17、累太多导致培养液中害物质积累太多导致培养液中的细胞开始死亡,称为衰亡期。的细胞开始死亡,称为衰亡期。3、静止期、静止期随着营养物质被逐渐消耗、细随着营养物质被逐渐消耗、细胞的生长速率开始下降,最终胞的生长速率开始下降,最终细胞浓度不再增加,称为静止细胞浓度不再增加,称为静止期。期。2、指数生长期、指数生长期细胞的倍增时间指细胞浓度细胞的倍增时间指细胞浓度增长一倍所需要的时间。微增长一倍所需要的时间。微生物的倍增时间一般为生物的倍增时间一般为0.5-1小时。小时。3、分批培养中影响细胞生长的因素、分批培养中影响细胞生长的因素共有以下共有以下5种影响因素:种影响因素:(1)营养物质浓度)营养物质浓
18、度(2)温度)温度(3)pH值值(4)溶解氧浓度)溶解氧浓度(5)产物)产物(1)营养物质浓度)营养物质浓度 营养物质的限制性浓度营养物质的限制性浓度-当某一种营当某一种营养物质的浓度下降到一定程度之后,就养物质的浓度下降到一定程度之后,就会影响细菌的生长,此时的浓度就称为会影响细菌的生长,此时的浓度就称为营养物质的限制性浓度。营养物质的限制性浓度。营养物质的最大浓度营养物质的最大浓度-当某一种营养当某一种营养物质的浓度超过一定程度之后,也会对物质的浓度超过一定程度之后,也会对细菌的生长产生抑制作用。细菌的生长产生抑制作用。(2)温度)温度 当培养温度偏低时,细胞的生长速率较低,当培养温度偏低
19、时,细胞的生长速率较低,随着温度的升高,细菌的生长速率也随之加快,随着温度的升高,细菌的生长速率也随之加快,当温度超出一定范围时,由于蛋白质等细胞结构的变性,当温度超出一定范围时,由于蛋白质等细胞结构的变性,导致细菌生长速率的急速下降。导致细菌生长速率的急速下降。微生物细胞的最适生长温度并不等于其代谢产物的最佳生产温度。微生物细胞的最适生长温度并不等于其代谢产物的最佳生产温度。因此在具体的生产过程中,因此在具体的生产过程中,培养的前期常常将温度调控在有利于细胞生长的区域,培养的前期常常将温度调控在有利于细胞生长的区域,而在后期则常常将温度转到最佳的生产温度,而在后期则常常将温度转到最佳的生产温
20、度,以获得较多的产物以获得较多的产物 根据培养温度的要求的不同,可以将微生物分成:低温菌,根据培养温度的要求的不同,可以将微生物分成:低温菌,中温菌,高温菌。中温菌,高温菌。采用高温菌生产有许多优点:采用高温菌生产有许多优点:(1)高温菌所生产出的酶,其热稳定性较好。)高温菌所生产出的酶,其热稳定性较好。(2)高温菌的培养温度较高,细胞的生长速率较大。)高温菌的培养温度较高,细胞的生长速率较大。(3)不容易发生杂菌污染。)不容易发生杂菌污染。(4)在大规模生产时可以节约冷却水、同时能够减少动)在大规模生产时可以节约冷却水、同时能够减少动力消耗。力消耗。发酵温度调控技术发酵温度调控技术(3)pH
21、值值细菌适宜于在中性、弱碱性的条件下生长。细菌适宜于在中性、弱碱性的条件下生长。酵母菌、霉菌则喜酸性环境。酵母菌、霉菌则喜酸性环境。乳酸菌、醋酸菌对于低乳酸菌、醋酸菌对于低PH值环境有着很好值环境有着很好的耐受性。的耐受性。(4)溶解氧浓度)溶解氧浓度 不同的培养过程对于溶解氧有着不同的要求不同的培养过程对于溶解氧有着不同的要求 应该根据具体情况来加以控制。应该根据具体情况来加以控制。空气过滤片空气过滤片(5)代谢产物的抑制作用)代谢产物的抑制作用细胞的代谢产物会影响到细胞的生长,这细胞的代谢产物会影响到细胞的生长,这种现象称作产物抑制作用。种现象称作产物抑制作用。而代谢产物多数就是生物制物的
展开阅读全文