骨髓细胞检验课件.pptx

1、返回上一页 下一页学习目标 1.阐述血细胞的发育过程及形态演变规律；说出细胞凋亡的概念。2.描述红细胞系、粒细胞系、巨核细胞系、单核细胞系和淋巴细胞系的正常细胞形态。3.描述成人正常骨髓象的特征、骨髓涂片观察方法和骨髓细胞分类方法。4.说出过氧化物酶染色、中性粒细胞碱性磷酸酶染色的原理、方法和临床应用。返回上一页 下一页学习目标 5.说出造血器官和造血微环境的概念。6.理解骨髓涂片、染色和骨髓细胞分类中应注意的问题，粒红比值、有核细胞增生程度的概念，骨髓检验的临床应用。7.理解中性粒细胞碱性磷酸酶、酯酶、糖原和铁粒染色的原理和临床应用。8.知道各系细胞的异常形态特征和常见非造血细胞形态和骨髓穿

2、刺方法返回上一页 下一页骨髓细胞检验 骨髓细胞检验是通过抽取骨髓组织并利用形态学、化学及生物学等技术对骨髓细胞进行检验的方法，是血液检验的重要组成部分。本章重点介绍光学显微镜下瑞特-吉姆萨（Wright-Giemsa）染色的骨髓细胞形态学检查方法，对常用的细胞化学染色方法也作简要介绍。返回上一页 下一页骨髓细胞形态学检查 主要用于观察骨髓与血液中的血细胞数量与质量的变化，以了解造血功能的变化情况，对疾病特别是血液病的诊断、观察疗效、判断预后等均有重大价值。若配用相应的细胞化学染色，则可使诊断的准确性有较大提高。返回上一页 下一页你知道吗？人们发现血细胞已有300年的历史，1673年观察到红细胞

3、，1749年观察到各种白细胞，而血小板在1842年被认识。这些细胞的形态学至今仍是血液学家研究的对象。各种特殊显微镜的发明与应用，使血细胞检验技术不断提高，血细胞形态学的概念更具体生动。目前应用的特殊显微镜有：暗视野显微镜、偏光显微镜、位相显微镜、电子显微镜和干涉显微镜等。返回上一页 下一页第一节 造血与血细胞的分化发育 一、造血器官与造血微环境二、造血干（祖）细胞的分化与调控三、细胞凋亡的概念四、血细胞的成熟规律五、血细胞瑞特-吉姆萨染色形态学特征返回上一页 下一页一、造血器官与造血微环境（一）造血器官 造血细胞包括红细胞、粒细胞、巨核细胞、淋巴细胞、单核细胞和浆细胞等系统。能够生成造血细胞

4、并支持其分化、发育和成熟的器官称为造血器官。各种血细胞在造血器官内的生成过程称为造血。在人体发育的不同阶段，主要造血器官是不相同的。返回上一页 下一页1胚胎期造血器官（1）中胚叶造血期（2）肝造血期（3）骨髓造血期返回上一页 下一页2出生后造血器官（1）骨髓造血：红骨髓、黄骨髓（2）淋巴器官造血：胸腺、脾、淋巴结（3）髓外造血返回上一页 下一页一、造血器官与造血微环境 返回上一页 下一页一、造血器官与造血微环境（二）造血微环境 是由除造血细胞以外的所有参与调控造血的间质成分构成的空间。包括微血管系统、末梢神经、基质细胞和基质细胞分泌的细胞因子，是造血干细胞赖以生存的场所。在适宜的造血微环境中，

5、造血细胞在各种成分的调控下得以增殖、分化、发育和成熟。返回上一页 下一页二、造血干（祖）细胞的分化与调控（一）造血干（祖）细胞的分化 造血干细胞（HSC）基本特征：1有自我更新和自我维持能力 HSC只进行不对称有丝分裂。2有多向分化能力 HSC能分化为髓系和淋巴系祖细胞。3具有多态性 HSC群体在形态和生物特性及表面标志上不同。返回上一页 下一页二、造血干（祖）细胞的分化与调控 造血祖细胞（HPC）：由造血干细胞分化而来。这类细胞部分或完全失去了自我更新能力，只能定向分化为各系统的原始、幼稚细胞，故又称为造血定向干细胞。返回上一页 下一页急性淋巴细胞白血病时POX呈阴性反应，FAB分型规定原始

6、和幼稚细胞阳性率3。二、造血干（祖）细胞的分化与调控型 幼稚红细胞质中含35个小铁粒。二、中性粒细胞碱性磷酸酶染色因此NAP活性反应主要出现于中性粒细胞成熟阶段，其他细胞皆为阴性。五、血细胞瑞特-吉姆萨染色形态学特征苏丹黑B染色也是一种鉴别细胞类型的细胞化学染色法，其原理为SB是一种脂溶性染料，可溶解于细胞质内的中性脂肪、磷脂及类固醇结构中，而使胞质中的脂类物质呈棕黑色或深黑色颗粒显示出来，即使是细胞内微细结构的脂类也可显示。(参见第三章第五节)2有多向分化能力 HSC能分化为髓系和淋巴系祖细胞。实在困难时应作形态学描述、摄像记录、动态观察或用有关针对细胞系统表面标志的单克隆抗体检测进行区别。

7、常见于特发性血小板减少性紫癜患者的骨髓涂片中。物理法有冻结干燥和火焰固定等，化学法最常用的是甲醛、乙醇、丙酮和乙酸固定等方法。涂抹细胞多时，支持急性淋巴细胞性白血病；1单核细胞系的正常形态二、造血干（祖）细胞的分化与调控凡抑制率50者，提示确受NaF所抑制。（2）幼稚浆细胞：胞体直径1216m，椭圆或圆形。粒-单核系祖细胞在巨噬细胞集落刺激因子（M-CSF）的作用下，分化为单核系祖细胞，继而进一步分化发育，经过原始、幼稚阶段，34次分裂增殖后而成熟。（1）在几种病症中，骨髓象相似，血象显著不同见于氯霉素或酒精中毒的患者。（3）颗粒型巨核细胞：胞体直径4070m，有时可达100m，外形多不规则。

8、5染色应用液二、造血干（祖）细胞的分化与调控（二）造血的调控 造血干（祖）细胞的增殖、分化和成熟过程是受多种因素影响的复杂活动，如基因水平调控、神经体液因子、体液调控等。不同方面信息相互结合，对造血细胞发挥综合的调控作用。返回上一页 下一页三、细胞凋亡的概念 细胞的死亡有两种形式，一种是细胞坏死，另一种则是细胞凋亡。凋亡一种细胞死亡的生理形式，是在基因的控制下细胞自主死亡的过程，又称为程序性细胞死亡。现已证明细胞凋亡具有复杂的分子调控机制，具有重要的生物学意义。细胞凋亡与许多临床疾病的发病机制有关。返回上一页 下一页四、血细胞的成熟规律（一）血细胞的发育成熟 血细胞的成熟是指由原始阶段细胞经幼

9、稚到成熟细胞的发育过程，发育成熟过程是连续性的。返回上一页 下一页（1）在几种病症中，骨髓象相似，血象显著不同胞质染淡红或淡蓝色，其中充满细小、密集的淡紫红色特异性中性颗粒，早期尚可见个别残留的嗜天青颗粒。3干抽 干抽是指非技术性错误，多部位、多次穿刺均抽不出骨髓。（2）红细胞系：除观察红细胞系增生程度、各阶段细胞百分率外，还应注意中幼、晚幼红细胞胞质变化，晚幼红细胞脱核情况，有无巨幼红细胞出现和其他异常现象。（1）巨幼红细胞：它是胚胎早期的幼稚红细胞，出生后仅见于叶酸、维生素B12缺乏的巨幼细胞性贫血或某些血液病时。中性粒细胞碱性磷酸酶（NAP）是成熟粒细胞S颗粒释放的一种酶。是由除造血细胞

10、以外的所有参与调控造血的间质成分构成的空间。由于各实验室条件不同（如实验方法、试剂质量和结果判断），参考值有很大差别，最好建立自己实验室的参考值，这里的数据仅供参考。不同的部位造血活动有显著差异。在光学显微镜下，仅能区别原始、幼稚、成熟阶段，而不能区别T淋巴细胞和B淋巴细胞。核形畸变，如凹陷、折叠、肾形、分叶及扭曲等，因分裂异常而呈双核、母子核、蝶形核等；祝贺你完成了本次学习任务!胞核大，约占细胞体积的4/5，圆形或椭圆形，居于细胞中央或稍偏位，染色质为细致的颗粒状，较原始粒细胞稍粗而紧密，染紫红色，可见12个核仁，核膜清楚。胞质量较其它原始细胞丰富，染不透明的蓝色或灰蓝色，无颗粒，偶见钝伪足

11、。2判断骨髓增生程度 骨髓涂片中有核细胞的多少，可大致反映骨髓造血的增生程度。8各种退化的细胞成分但也可能是骨髓尚未反映出来的疾病早期，特别是临床症状典型者，应慎重对待，进一步作多部位多次穿刺，经仔细检查，甚至长期追踪观察后，才能提出否定意见。（一）四甲基联苯胺法嗜酸性粒细胞呈阴性反应，嗜碱性粒细胞呈阴性或弱阳性反应。见于氯霉素或酒精中毒的患者。胞核卵圆、半月形，略有凹陷，常因颗粒遮盖而轮廓不清。四、血细胞的成熟规律 为掌握细胞的发育成熟程度，动态地观察细胞的变化情况，特将各系细胞按其发育过程中形态变化特征和功能的成熟度，划分为原始、幼稚、成熟三个阶段。幼稚阶段形态变化比较大的再细分为早幼、中

12、幼、晚幼三个时期。返回上一页 下一页四、血细胞的成熟规律（二）骨髓血细胞的形态演变规律 在骨髓血细胞发育成熟过程中，其外部形态和内部结构都在不断地发生变化。细胞正常发育演变有一定的规律性，如表15-2所示。返回上一页 下一页四、血细胞的成熟规律项 目原 始 幼 稚 成 熟备 注细 胞 大 小大 小原 始 粒 细 胞 比 早 幼 粒 细 胞 小，巨 核细 胞 由 小 变 大胞 核 与 胞 质 比 例大 小小 淋 巴 细 胞 例 外胞 核 大 小大 小成 熟 红 细 胞 核 消 失胞 核 形 状圆 凹 陷 分 叶有 的 细 胞 不 分 叶染 色 质 结 构细 致 粗 糙疏 松 紧 密染 色 质 受

13、 色淡 紫 红 深 紫 红核 膜不 明 显 明 显核 仁显 著 可 见 看 不 见 胞 质 量少 多淋 巴 细 胞 例 外胞 质 受 色蓝（嗜 碱）红（嗜 酸）或 深 蓝 浅 蓝胞 质 颗 粒无 有粒 细 胞 分 化 为 三 种 颗 粒，有 的 细 胞无 颗 粒表 1 5-2 血 细 胞 发 育 过 程 中 的 形 态 演 变 规 律返回上一页 下一页五、血细胞瑞特-吉姆萨染色形态学特征（一）造血干细胞及各系祖细胞（二）红细胞系（三）粒细胞系（四）巨核细胞系（五）单核细胞系（六）淋巴细胞系（七）浆细胞系（八）其他细胞及有关成分返回上一页 下一页五、血细胞瑞特-吉姆萨染色形态学特征（一）造血干细

14、胞及各系祖细胞 造血干细胞和各系祖细胞分布于造血组织和血液中，细胞数量很少。在瑞特-吉姆萨染色法中只能识别原始阶段及其以后的细胞，对于干细胞只能用脾集落形成试验和体外培养等方法进行检测。其瑞特-吉姆萨染色形态为直径710m的圆形细胞，核圆或有切迹，染淡紫色，结构均匀纤细，胞质染淡蓝色，不含颗粒。返回上一页 下一页五、血细胞瑞特-吉姆萨染色形态学特征（二）红细胞系 红细胞系祖细胞在促红细胞生成素的作用下分化为原始红细胞，通过35次有丝分裂，在形态上经过原始、早幼、中幼、晚幼红细胞阶段，脱核成网织红细胞，而后成熟。正常情况下，中幼及其以前的幼稚红细胞，均具有分裂增殖能力，其中早幼和中幼红细胞均可分

15、裂12次。返回上一页 下一页1红细胞系的正常形态 （1）原始红细胞：胞体直径1520m，圆形或椭圆形，边缘常有伪足或突起。胞核大，约占细胞体积的4/5，圆形或椭圆形，居于细胞中央或稍偏位，染色质为细致的颗粒状，较原始粒细胞稍粗而紧密，染紫红色，可见12个核仁，核膜清楚。胞质量较少，因含有大量游离核糖体，而呈浓密的油墨蓝色，近核处着色浅淡，称核周淡染区，无颗粒。其分裂相染色体粗短，呈1821锐角。返回上一页 下一页原始红细胞返回上一页 下一页1红细胞系的正常形态 （2）早幼红细胞：略似原始红细胞，但细胞开始变小，胞体直径1518m，呈圆形或椭圆形。胞核仍占细胞大部分（2/3以上），圆形，多居中，

16、染色质较原始红细胞更紧密并已开始聚集，核仁模糊或消失。胞质量稍多，呈蓝色或稍变浅。返回上一页 下一页早幼红细胞返回上一页 下一页中性粒细胞胞质中的碱性磷酸酶（neutrophil alkaline phosphatase，NAP），在pH9.（一）Kaplow偶氮偶联法不同的涂片，不同的染色方法，细胞受色深浅、染色质清晰程度等有所不同。型 幼稚红细胞质中含35个小铁粒。中性粒细胞碱性磷酸酶（NAP）是成熟粒细胞S颗粒释放的一种酶。（一）血细胞的发育成熟（2）幼稚单核细胞：胞体直径1525m，圆形或不规则形。2淋巴细胞的异常形态一般而言，急性淋巴细胞性白血病时退化细胞的百分率较高，单核细胞白血病

17、时则较低。2注意区别原始细胞。单核细胞来自粒-单核系祖细胞。无血小板生成，细胞周围可附有血小板。1全面观察涂片情况 要对骨髓涂片全面浏览，了解骨髓取材和涂片情况，观察细胞受色是否满意，若涂片情况较差，应另选良好涂片，并将情况填写记录。5mg），按上述方法染色，若阳性明显减弱或呈阴性，示被NaF抑制。1选髓粒丰富的骨髓片，用甲醇固定10min。（五）骨髓象分析与报告（2）异型淋巴细胞：常见于病毒感染时。一、造血器官与造血微环境1粒细胞系的正常形态1红细胞系的正常形态 （3）中幼红细胞：胞体明显变小，直径815m，圆形。核占细胞的2/31/2，呈圆形，多居中，染色质粗糙浓染，呈团块状或索条状，有明

18、显空隙，呈打碎的墨块状，染深紫红色，核仁消失。胞质量增多，因多少不等的血红蛋白与聚核糖体同时存在而呈不同程度的嗜多色性，染灰蓝色、灰色或灰粉色。返回上一页 下一页中幼红细胞返回上一页 下一页1红细胞系的正常形态 （4）晚幼红细胞：胞体更小，直径710m，圆形。胞核小于细胞直径的1/2，早期尚可见墨块状结构，晚期多固缩，染深紫红色，多居偏位，有的细胞可见欲脱核状。胞质因充满血红蛋白，染粉红色。返回上一页 下一页晚幼红细胞返回上一页 下一页1红细胞系的正常形态（5）网织红细胞：见第四章第五节。（6）红细胞：为红细胞系完全成熟的细胞，见第四章第一节。返回上一页 下一页2幼稚红细胞的异常形态 （1）巨

19、幼红细胞：它是胚胎早期的幼稚红细胞，出生后仅见于叶酸、维生素B12缺乏的巨幼细胞性贫血或某些血液病时。其形态特征是胞体较一般正常幼稚红细胞为大，胞质丰富，胞核的成熟落后于胞质，染色质细致、疏松。巨幼红细胞的发育也有原始、早幼、中幼、晚幼四个阶段，成熟后为巨红细胞。返回上一页 下一页原始巨幼红细胞早巨幼红细胞中巨幼红细胞晚巨幼红细胞返回上一页 下一页2幼稚红细胞的异常形态 （2）红细胞巨幼样变（类巨幼红细胞）：为幼稚红细胞的不典型巨幼红细胞样变化，多见于早幼、中幼阶段。其体积稍大，核圆或畸形，染色质浓集，粗而不匀，胞质量丰富，有时受色可呈假颗粒状或泡沫样。常见于白血病、肿瘤等患者，尤其在化疗后更

20、常见。返回上一页 下一页酯酶的细胞化学染色方法很多，若根据作用时的pH、底物等不同可将常用的酯酶染色法分为两大类，即特异性酯酶（SE）染色法和非特异性酯酶（NSE）染色法。（2）红细胞系约占骨髓有核细胞的1/5（20），以晚幼红细胞为主，中幼红细胞次之，早幼红细胞5，原始红细胞1，无巨幼红细胞。4，多为型细胞，铁粒细小、色淡。涂抹细胞多时，支持急性淋巴细胞性白血病；在染色时尽可能保持细胞的生前结构、化学成分和酶的活性；（三）苏丹黑B（SB）染色正常单核细胞和原始单核及幼稚单核细胞均呈阳性反应，其他血细胞则呈阴性或弱阳性反应。实在困难时应作形态学描述、摄像记录、动态观察或用有关针对细胞系统表面标

21、志的单克隆抗体检测进行区别。（2）在某些疾病中，血象相似，骨髓象显著不同2帮助诊断某些代谢障碍性疾病一般情况下，应使用骨髓穿刺术抽取骨髓液作涂片检查，在骨髓穿刺不成功（“干抽”）的情况下，或者必须靠骨髓活检来明确诊断时，可使用骨髓环钻术。过氧化物酶染色的临床应用510g/L甲基绿水溶液复染5min。3观察成熟红细胞有无形态异常。骨髓单核-巨噬细胞丰富，常可吞噬一些异常脂类、原虫。（1）巨幼红细胞：它是胚胎早期的幼稚红细胞，出生后仅见于叶酸、维生素B12缺乏的巨幼细胞性贫血或某些血液病时。联苯胺反应，显示过氧化物酶；2细胞化学的显示(1)因此NAP活性反应主要出现于中性粒细胞成熟阶段，其他细胞皆

22、为阴性。（一）Kaplow偶氮偶联法血液病治疗过程中，也常通过骨髓检查来评价疗效或判断预后。7ml，混合染色6min。2幼稚红细胞的异常形态 （3）巨型原始红细胞：胞体直径3060m。见于急性造血机能停滞，是由于某种因子阻断了原始红细胞向下发育所致，其形态结构大体与原始红细胞相似。返回上一页 下一页2幼稚红细胞的异常形态 （4）空泡型红细胞：早幼、中幼红细胞的胞质中出现 320个直径小于lm的小空泡。苏丹黑、糖原染色均呈阴性。见于氯霉素或酒精中毒的患者。（5）异常成熟红细胞：请参见第四章第八节。返回上一页 下一页五、血细胞瑞特-吉姆萨染色形态学特征（三）粒细胞系 髓系干细胞在粒-单集落刺激因子

23、（GM-CSF）及白细胞介素-3（IL-3）等影响下，分化发育成为粒-单系祖细胞，然后分化为粒系祖细胞，再进一步分化发育成为原始、早幼粒细胞，又经过中幼、晚幼、杆状、分叶阶段而成熟。返回上一页 下一页1粒细胞系的正常形态 （1）原始粒细胞：胞体直径1018m，圆或椭圆形。核大而圆，约占细胞体积的4/5以上，偏位或居中，染色质呈细颗粒状，均匀平坦如一层薄纱，核膜不明显，有25个淡蓝色清晰小核仁。胞质量少，呈水彩蓝色，一般无颗粒。原始粒细胞过氧化物酶染色早期阴性，后期可见阳性颗粒。返回上一页 下一页原始粒细胞返回上一页 下一页实在困难时应作形态学描述、摄像记录、动态观察或用有关针对细胞系统表面标志

24、的单克隆抗体检测进行区别。参考值735个，须在油镜下观察证实。弱阳性者呈少量稀疏细小的蓝色颗粒。一、骨髓细胞学检验的临床应用此现象也可见于慢粒、红白血病及一些骨髓增殖性疾病的化疗之后。观察骨髓涂片，一般应先用低倍镜观察全片，了解基本情况。骨髓单核-巨噬细胞丰富，常可吞噬一些异常脂类、原虫。（1）在几种病症中，骨髓象相似，血象显著不同2流水冲洗1015s，晾干。在适宜的造血微环境中，造血细胞在各种成分的调控下得以增殖、分化、发育和成熟。（2）粒细胞分叶过多和巨幼变：是维生素B12或叶酸缺乏导致的核酸代谢障碍在粒细胞中的反映，常见中幼、晚幼、杆状核粒细胞出现胞体及胞核变大，并呈幼稚样变化，如核肿胀

25、、疏松，胞质中颗粒减少等，而成熟粒细胞分叶过多（610叶）。（二）改良Gomori钙-钴法最简单的是粗略估量，按染色反应的强弱、受色的深浅，人为地划分为、+、+、+、+五个等级。在恶性贫血和巨核细胞白血病时，可见多核现象。5穿刺部位的差异 骨髓造血组织分布不均，且某些病变也可限于局部，因此穿刺部位的不同，其结果可有显著差异，所以对一些疑难病例最好是多部位穿刺。NAP染色可用于鉴别诊断(2)特异性酯酶又称氯乙酸萘酯酶或粒细胞酯酶，主要分布在骨髓粒细胞系统中。细胞中的过氧化物酶分解过氧化氢，产生新生态氧，碘化钾在新生态氧的氧化作用下生成碘，碘与煌焦油蓝形成蓝绿色复合物，定位于胞质中。胞质量少，呈水

26、彩蓝色，一般无颗粒。一般而言，急性淋巴细胞性白血病时退化细胞的百分率较高，单核细胞白血病时则较低。非特异性酯酶又称单核细胞酯酶。1粒细胞系的正常形态 （2）早幼粒细胞：胞体直径1220m，圆形或椭圆形，略大于原始粒细胞。核圆或椭圆，多偏位，染色质开始聚集，呈较粗的颗粒网状，有时可见核仁。胞质量增多，染稍淡蓝色，含数量不等、大小不一、分布不匀的紫红色嗜天青颗粒（又称非特异性颗粒），早期较少，晚期较多。近核旁常有一不着色区，其间无颗粒。过氧化物酶染色呈阳性反应。返回上一页 下一页早幼粒细胞返回上一页 下一页1粒细胞系的正常形态 （3）中幼粒细胞：中幼阶段胞质中开始出现不同的特异性颗粒，即中性、嗜酸

27、性和嗜碱性颗粒，藉此可明确地区分出中性、嗜酸性和嗜碱性中幼粒细胞，其中以中性中幼粒细胞为主。返回上一页 下一页1粒细胞系的正常形态 中性中幼粒细胞：胞体直径1018m，早期者较大。胞核多偏位，略小于早幼粒细胞，占细胞体积的2/31/2，椭圆形或一侧开始变平。染色质粗于早幼阶段，呈致密索块状，早期尚可见核仁轮廓，晚期核仁消失，核膜明显。胞质染淡红或淡蓝色，其中充满细小、密集的淡紫红色特异性中性颗粒，早期尚可见个别残留的嗜天青颗粒。返回上一页 下一页1粒细胞系的正常形态 嗜酸性中幼粒细胞：胞体直径1520m，胞核与中性中幼粒细胞相似。胞质内充满粗大、均匀、排列紧密的橘红色嗜酸性颗粒。早期个别颗粒不

28、成熟，可呈嗜碱性。返回上一页 下一页1粒细胞系的正常形态 嗜碱性中幼粒细胞：少见。胞体直径1015m。胞核圆或椭圆形，轮廓不清楚，染色质较模糊，胞质内含有数量不多、分布不均、大小不等的黑紫色嗜碱性颗粒，有的压在核上，可因染色时溶解或由于脱颗粒而成为小空泡。返回上一页 下一页中性嗜酸嗜碱中幼粒细胞返回上一页 下一页1粒细胞系的正常形态（4）晚幼粒细胞：中性晚幼粒细胞：胞体略小于中幼阶段，直径1016m。胞核明显缩小，通常小于细胞体积的1/2，一侧凹陷呈肾形、半月形等。染色质浓集成块、紧密深染，无分裂象。胞质量多，染粉红色，充满淡紫红色中性颗粒。返回上一页 下一页1粒细胞系的正常形态 嗜酸性晚幼粒

29、细胞：胞体大小及核的形态与中性晚幼粒细胞相似，胞质内充满嗜酸性颗粒。嗜碱性晚幼粒细胞：少见。胞体直径1015m。胞核卵圆、半月形，略有凹陷，常因颗粒遮盖而轮廓不清。胞质中及核上可见少量分布不均的嗜碱性颗粒。返回上一页 下一页中性嗜酸嗜碱晚幼粒细胞返回上一页 下一页2粒细胞的异常形态 （1）白血病性粒细胞：其常见的特征为：原始粒细胞大小异常，如小原粒型、大原粒型或大小原粒混合型；核形畸变，如凹陷、折叠、肾形、分叶及扭曲等，因分裂异常而呈双核、母子核、蝶形核等；核仁增大、融合、畸形等；胞核与胞质发育不同步，如胞质中颗粒早熟，原始粒细胞胞质中出现较多的嗜天青颗粒或Auer小体，后者是急性非淋巴细胞白

30、血病诊断标志之一。返回上一页 下一页2粒细胞的异常形态 （2）粒细胞分叶过多和巨幼变：是维生素B12或叶酸缺乏导致的核酸代谢障碍在粒细胞中的反映，常见中幼、晚幼、杆状核粒细胞出现胞体及胞核变大，并呈幼稚样变化，如核肿胀、疏松，胞质中颗粒减少等，而成熟粒细胞分叶过多（610叶）。此现象也可见于慢粒、红白血病及一些骨髓增殖性疾病的化疗之后。返回上一页 下一页2粒细胞的异常形态 （3）Pelger-Hut畸形：有原发性和继发性两种。前者中性粒细胞呈先天性分叶过少现象。成熟粒细胞核似晚幼阶段不分叶，且畸形，如肾形、哑铃形、蝶形等。杆状核也粗短。染色质细密，紧缩，浓集成块或索网状，深染。畸形也可涉及嗜酸

31、性粒细胞。此畸形属家族性粒细胞异常，为常染色体显性基因遗传，一般不影响健康。继发性者可见于慢性粒细胞性白血病、骨髓异常增生综合征等。返回上一页 下一页2粒细胞的异常形态 （4）Jordan异常：本病为家族性疾病，特征是粒细胞及单核细胞的胞质中出现空泡。也可涉及淋巴细胞、浆细胞，但不见于原始阶段细胞。有报告检出此种异常者伴发进行性肌麻痹症或鱼鳞癣。（5）粒细胞毒性变、退行性变 (参见第三章第五节)返回上一页 下一页五、血细胞瑞特-吉姆萨染色形态学特征 （四）巨核细胞系 巨核系祖细胞经巨核细胞集落刺激因子（Meg-CSF）和血小板生成素（thrombopoietin,TPO）的刺激分化发育，形成成

32、熟巨核细胞，并产生血小板。返回上一页 下一页阳性反应为胞质出现红色颗粒、红色团块或弥漫红色，胞核染绿色。如转移癌细胞、戈谢细胞、尼曼-匹克细胞、R-S（Reed-Sternberg）细胞、多核巨细胞以及红细胞有无缗钱状排列等。3观察成熟红细胞有无形态异常。根据细胞内颗粒的数目、大小、染色深浅和分布情况，将铁粒幼红细胞分为如下几型：制备良好的骨髓涂片是进行骨髓细胞检验的基础性工作，绝对不可忽视。（二）改良Pereira碘化钾法临床常用的染色方法是过碘酸碱性复红反应，即过碘酸雪夫（periodic acid Schiffs）反应，简称PAS反应。可以用公式计算NaF抑制率。如转移癌细胞、戈谢细胞、

33、尼曼-匹克细胞、R-S（Reed-Sternberg）细胞、多核巨细胞以及红细胞有无缗钱状排列等。4骨髓液被稀释 出现此种情况是由于抽取骨髓液时用力过大或穿刺针头刺入骨髓血窦所致，会造成涂片上骨髓小粒及脂肪滴减少，各阶段细胞比例失调，中性粒细胞分叶核杆状核，无或少有巨核细胞、组织嗜碱细胞、网状细胞等骨髓特有细胞，一般应重新穿刺。（4）Jordan异常：本病为家族性疾病，特征是粒细胞及单核细胞的胞质中出现空泡。无血小板生成，细胞周围可附有血小板。理解中性粒细胞碱性磷酸酶、酯酶、糖原和铁粒染色的原理和临床应用。2mol/L 2-氨基-2-甲基-1,3-丙二醇液骨髓细胞学检验对于白血病特别是非白血性

34、白血病、再生障碍性贫血、巨幼细胞性贫血及多发性骨髓瘤等的诊断有决定性意义。急性淋巴细胞白血病时POX呈阴性反应，FAB分型规定原始和幼稚细胞阳性率3。（2）原始粒细胞与早幼粒细胞；中性非特异性酯酶染色法由于底物不同又可分为-醋酸萘酯酶染色法、醋酸萘酚AS酯酶染色法及醋酸萘酚AS-D酯酶染色法三种。2淋巴细胞的异常形态细胞凋亡与许多临床疾病的发病机制有关。（六）骨髓象检验中应注意的问题染深蓝色或粉蓝色，核周出现少许嗜天青颗粒。1巨核细胞系的正常形态 （1）原始巨核细胞：胞体直径1530m，呈不规则圆形。胞核较大，染暗紫红色，圆或椭圆，常有凹陷或折叠。染色质粗粒状，有聚集紧密感，可见23个不规则的

35、核仁，不清晰，有凹陷感。胞质量少，边缘不规则，常有小突起，染深蓝色，周边浓染，不含颗粒。返回上一页 下一页原始巨核细胞返回上一页 下一页1巨核细胞系的正常形态 （2）幼稚巨核细胞：胞体直径3050m。核呈肾形或不规则形，染色质呈粗颗粒或小块状，核仁可有可无。胞质量增多，外形不规则，可有伪足。染深蓝色或粉蓝色，核周出现少许嗜天青颗粒。返回上一页 下一页幼稚巨核细胞返回上一页 下一页1巨核细胞系的正常形态 （3）颗粒型巨核细胞：胞体直径4070m，有时可达100m，外形多不规则。核形不规则或分叶，染色质粗糙紧密，呈索条状或块状，不见核仁。胞质丰富，染粉红色或淡蓝色，如充满细小紫红色颗粒则呈浓厚的紫

36、红色或淡红色。无血小板生成，细胞周围可附有血小板。返回上一页 下一页颗粒巨核细胞返回上一页 下一页1巨核细胞系的正常形态 （4）产生血小板型巨核细胞：为完全成熟的巨核细胞，胞体直径40100m，有时可达100m以上。细胞质局部或全部形成血小板雏形，胞质边缘不完整，可有伪足伸出，周围已有血小板脱落，待胞质完全脱落后只剩核时则称裸核型巨核细胞。返回上一页 下一页产血小板巨核细胞返回上一页 下一页2巨核细胞的异常形态 （1）小型巨核细胞：胞体直径1020m，甚至更小，多为一个核，较大型者可有两个或多个核，染色质因高度深染常看不清结构，偶见12个小核仁。核周围有少量或中等量的不规则胞质，常有伪足样突起

37、。胞质内颗粒丰富或颗粒过少甚至缺失，因而染粉色、蓝色或蓝粉色，周围常可见血小板。小巨核细胞常见于慢性粒细胞性白血病、巨核细胞白血病、骨髓增生异常综合征等。返回上一页 下一页2巨核细胞的异常形态 （2）巨核细胞分叶过多和巨大变化：在缺乏维生素B12或叶酸时，巨核细胞呈巨大、幼稚、多叶等变化。在恶性贫血和巨核细胞白血病时，可见多核现象。（3）变性巨核细胞：多见于幼稚阶段巨核细胞。胞体大，胞质丰富，染蓝色，呈玻璃样变，颗粒少或无颗粒，可见空泡，核中也可见空泡。常见于特发性血小板减少性紫癜患者的骨髓涂片中。（4）异常血小板。返回上一页 下一页考考你 各阶段幼稚血细胞都有自己的特征，你能找出下列细胞的分

38、界线吗？（1）中幼红细胞与晚幼红细胞；（2）原始粒细胞与早幼粒细胞；（3）早幼粒细胞与中幼粒细胞；（4）幼稚巨核细胞与颗粒型巨核细胞；（5）颗粒型巨核细胞与产血小板型巨核细胞。返回上一页 下一页五、血细胞瑞特-吉姆萨染色形态学特征（五）单核细胞系 单核细胞来自粒-单核系祖细胞。粒-单核系祖细胞在巨噬细胞集落刺激因子（M-CSF）的作用下，分化为单核系祖细胞，继而进一步分化发育，经过原始、幼稚阶段，34次分裂增殖后而成熟。单核细胞非终末细胞，进入组织或体腔后，发育成巨噬细胞。返回上一页 下一页1单核细胞系的正常形态 （1）原始单核细胞：胞体直径1520m，呈圆形或不规则形。核大，圆或不规则形，扭

39、曲折叠，染色质纤细疏松似网，染淡紫红色，核膜不明显，有13个圆形或椭圆、甚至不规则的核仁。胞质量较其它原始细胞丰富，染不透明的蓝色或灰蓝色，无颗粒，偶见钝伪足。返回上一页 下一页1单核细胞系的正常形态 （2）幼稚单核细胞：胞体直径1525m，圆形或不规则形。核大，多不规则，可呈凹陷、切迹或折叠状。染色质略粗于原始阶段，核仁不清晰或消失。胞质量多，染灰蓝色，近核处出现细小的紫红色嗜天青颗粒。返回上一页 下一页1淋巴细胞的正常形态在适宜的造血微环境中，造血细胞在各种成分的调控下得以增殖、分化、发育和成熟。3加染色应用液盖满片膜，染色25min，弃去染液，晾干。3观察非造血细胞及异常细胞物理法有冻结

40、干燥和火焰固定等，化学法最常用的是甲醛、乙醇、丙酮和乙酸固定等方法。型 幼稚红细胞质中含35个小铁粒。（3）浆细胞：胞体直径815m，椭圆形或不规则形。（一）四甲基联苯胺法不同的涂片，不同的染色方法，细胞受色深浅、染色质清晰程度等有所不同。4无其他异常细胞和寄生虫。血液病治疗过程中，也常通过骨髓检查来评价疗效或判断预后。核形不规则或分叶，染色质粗糙紧密，呈索条状或块状，不见核仁。（1）肯定性诊断：某些具有特异性细胞学变化的疾病，其临床表现与细胞学特征均典型时可作肯定性诊断。2判断骨髓增生程度 骨髓涂片中有核细胞的多少，可大致反映骨髓造血的增生程度。嗜酸性粒细胞颗粒本身不着色，而颗粒间的胞质呈红

41、色。同时注意有无各种异常分裂现象。2 2g/L核固红核形不规则或分叶，染色质粗糙紧密，呈索条状或块状，不见核仁。1粒细胞系的正常形态二、造血干（祖）细胞的分化与调控原始单核细胞和幼稚单核细胞返回上一页 下一页2单核细胞的异常形态（1）白血病性单核细胞：白血病时单核细胞可有胞核胞质发育不同步现象，核形异常，呈笔架状、杆状、分叶状等。胞质出现Auer小体等病理性形态变化。（2）毒性和退行性变：单核细胞核肿胀，染色质松散，胞质嗜酸性变，出现空泡、毒性颗粒等。返回上一页 下一页2单核细胞的异常形态（3）激活型单核细胞：单核细胞在炎症刺激特别是某些毒性强的急性或慢性刺激时，出现增生，胞体变大，直径达20

42、30m，核形多样化，胞质丰富，常有多个伪足。有时可见空泡或吞噬异物，可能是单核细胞向巨噬细胞过渡的形态。返回上一页 下一页五、血细胞瑞特-吉姆萨染色形态学特征（六）淋巴细胞系 本系由淋巴系干细胞进一步分化而来，过氧化物酶染色阴性。在光学显微镜下，仅能区别原始、幼稚、成熟阶段，而不能区别T淋巴细胞和B淋巴细胞。返回上一页 下一页1淋巴细胞的正常形态（1）原始淋巴细胞：胞体直径1018m，圆或椭圆形。胞核较大，占整个细胞的大部分，居中或偏位，多为圆形或椭圆形，有时可见浅切迹，染色质呈颗粒状，但比原始粒细胞粗，在核仁及核膜周围聚集使核膜清楚，有清晰的淡蓝色小核仁，多为12个，有凹陷感。胞质量少，呈透

43、明蓝色，环核淡染区明显，无颗粒。返回上一页 下一页原始淋巴细胞返回上一页 下一页1淋巴细胞的正常形态（2）幼稚淋巴细胞：胞体直径1016m。胞核圆形或椭圆形，居中或偏位，染色质较原始淋巴细胞略粗糙，排列较紧密，核膜明显，核仁模糊或消失。胞质量略增多，呈淡蓝色，偶见少许圆形粗大的暗紫红色嗜天青颗粒，一般不超过10颗。返回上一页 下一页幼稚淋巴细胞返回上一页 下一页2淋巴细胞的异常形态 （1）白血病性淋巴细胞：急性淋巴细胞性白血病时，原始淋巴细胞或幼稚淋巴细胞变化很大，有大型、小型和混合型等类型，核有凹陷、切迹或不规则形。染色质丰富，呈粗颗粒状，致密浓染。核仁异常，胞质量少，可有空泡。慢性淋巴细胞

44、性白血病的淋巴细胞核多有切迹，核浓缩紧密，染深紫黑色，胞质量极少。（2）异型淋巴细胞：常见于病毒感染时。其形态特征请参见第十七章第三节。返回上一页 下一页五、血细胞瑞特-吉姆萨染色形态学特征（七）浆细胞系 浆细胞是高度分化的淋巴细胞，是由B淋巴细胞转化而来。各期浆细胞过氧化物酶染色均为阴性。返回上一页 下一页1浆细胞的正常形态 （1）原始浆细胞：胞体直径1418m，椭圆或圆形。核大，占细胞的2/3以上，圆形，常偏于一侧或略偏，染色质较粗疏，呈颗粒网状，核仁25个。胞质量较多，染深蓝或灰蓝色，有浑浊感，有不明显的核旁淡染现象，无颗粒。返回上一页 下一页原始浆细胞返回上一页 下一页1浆细胞的正常形

45、态 （2）幼稚浆细胞：胞体直径1216m，椭圆或圆形。核占细胞的1/2以上，偏于一侧或略偏，圆或椭圆形，染色质开始聚集，核仁模糊或消失。胞质染深蓝色或呈嗜多色性，有浑浊感，可见半圆形核旁淡染区，称初浆区，有时可含有空泡或少数嗜天青颗粒。返回上一页 下一页幼稚浆细胞返回上一页 下一页1浆细胞的正常形态 （3）浆细胞：胞体直径815m，椭圆形或不规则形。核小，占细胞的1/3以下，圆或椭圆形，明显偏位，核的长轴与胞体长轴相垂直。染色质紧密成块，似龟背或车轮状，核膜清楚。胞质量丰富，染深蓝、灰蓝或红蓝相混色，有泡沫感，核旁淡染区明显。浆细胞多成片增殖于血管壁周围，正常骨髓中有少量，慢性炎症时易见到。返

46、回上一页 下一页浆细胞返回上一页 下一页2浆细胞的异常形态 在病理情况下，浆细胞可出现异常形态，如火焰细胞、拉塞尔（Russell）小体、莫特（Mott）细胞、晶状体及大小异常等，常见于多发性骨髓瘤，也可见于反应性浆细胞增生及浆细胞白血病等。返回上一页 下一页异常浆细胞返回上一页 下一页五、血细胞瑞特-吉姆萨染色形态学特征（八）其他细胞及有关成分 1网状细胞 2内皮细胞 3吞噬细胞 4组织嗜碱细胞 5成骨细胞6破骨细胞7脂肪细胞8各种退化的细胞成分9幼红细胞造血岛返回上一页 下一页第二节 细胞化学染色及临床应用一、过氧化物酶染色二、中性粒细胞碱性磷酸酶染色三、铁粒染色四、糖原染色五、酯酶染色返

47、回上一页 下一页非缺铁性贫血，如巨幼细胞性贫血、溶血性贫血、再生障碍性贫血等，铁粒幼红细胞增多，但仍以、型为主。胞质中及核上可见少量分布不均的嗜碱性颗粒。1细胞外铁 先用低倍镜观察涂片，特别是涂片尾部和髓粒附近，注意翠蓝色颗粒，再用高倍和油镜观察有无染成深蓝色的铁颗粒，按下列5级标准判断：五、血细胞瑞特-吉姆萨染色形态学特征染深蓝色或粉蓝色，核周出现少许嗜天青颗粒。涂抹细胞多时，支持急性淋巴细胞性白血病；6观察有无血液寄生虫 对疑有血液寄生虫的患者，应集中注意力，仔细寻找。各细胞系的原始细胞虽有不同特征，但也有很多相似之处，有时难以鉴别。或全部胞质染成均匀灰色，无颗粒。（+）有较多的铁粒和小珠

48、。（六）骨髓象检验中应注意的问题（1）小型巨核细胞：胞体直径1020m，甚至更小，多为一个核，较大型者可有两个或多个核，染色质因高度深染常看不清结构，偶见12个小核仁。胞质量多，染粉红色，充满淡紫红色中性颗粒。胞核圆或椭圆形，轮廓不清楚，染色质较模糊，胞质内含有数量不多、分布不均、大小不等的黑紫色嗜碱性颗粒，有的压在核上，可因染色时溶解或由于脱颗粒而成为小空泡。5ml，涂抹使其盖满膜面，固定lmin，再加稀过氧化氢液0.早幼粒细胞出现强阳性反应，酶活性不随细胞分化成熟而增强，分化好的原始粒细胞呈弱阳性反应。（一）Kaplow偶氮偶联法细胞正常发育演变有一定的规律性，如表15-2所示。1红细胞系

49、的正常形态（5）网织红细胞：见第四章第五节。血细胞化学染色 血细胞化学染色是以形态学为基础，结合化学或生物化学技术，对血细胞内各化学成分、代谢产物作定位、定性、半定量和定量观察的方法。血细胞化学染色可用于研究血细胞的生理、病理，为血液病的诊断和鉴别诊断，判断疗效及观察预后，提供重要依据。返回上一页 下一页血细胞化学染色的基本要求 血细胞化学染色的基本要求是：原位显示细胞成分和结构；在染色时尽可能保持细胞的生前结构、化学成分和酶的活性；反应产物在显微镜下具有一定的稳定性，成为不移位的有色沉淀。返回上一页 下一页血细胞化学染色 血细胞化学染色可以显示的细胞成分包括：蛋白质（包括一些酶类和氨基酸等）

50、、核酸（包括RNA、DNA）、糖原、脂类等。进行血细胞化学染色，要经过固定、显示（染色）和对有关成分进行定性或定量分析三个阶段。返回上一页 下一页1固定 固定的目的是将细胞的生前结构和化学物质保存下来。固定的方法有物理法和化学法。物理法有冻结干燥和火焰固定等，化学法最常用的是甲醛、乙醇、丙酮和乙酸固定等方法。化学固定法在细胞化学染色中应用较广。返回上一页 下一页2细胞化学的显示(1)常用的显示手段有：金属沉淀法，如显示维生素C或磷酸酶等；偶氮偶联法，如显示氨基酸、磷酸酶、非特异性酯酶、SH基等；碱性复红反应（Schiff醛反应），如显示糖原、DNA等；联苯胺反应，显示过氧化物酶；普鲁士蓝反应，