骨髓检查组化免疫分型遗传学教学课件.pptx

1、l 骨髓标本采集要求 标本采集的注意事项标本采集的注意事项：形态检查抽吸量不超过0.2ml；同时进行多项检查应优先抽吸形态检查标本；涂片厚薄适宜，不少于4张，并同时制作配套的血片；作好标记；如干抽，此时应考虑作骨髓活检；多部位或对有压痛点或根据X线检查提示进行穿刺，以提高阳性率。抽吸骨髓液时，病人有特殊酸痛感；有骨髓小粒和脂肪滴；显微镜下可见到骨髓特有细胞，如巨核细胞、成骨细胞、破骨细胞、浆细胞、组织嗜碱细胞、纤维细胞和大量红系、粒系幼稚细胞等。返回返回、低倍镜检查、低倍镜检查1 1、确定骨髓标本的取材和涂片制作是否满意、确定骨髓标本的取材和涂片制作是否满意 骨髓穿刺液制成涂片后，肉眼观察，在

2、涂尾部见到散骨髓穿刺液制成涂片后，肉眼观察，在涂尾部见到散在的约粟粒大小呈浅肉色半透明的在的约粟粒大小呈浅肉色半透明的骨髓小粒骨髓小粒及少量及少量脂脂肪小滴肪小滴；在显微镜下见到较多；在显微镜下见到较多骨髓特有的细胞骨髓特有的细胞如各系如各系幼稚细胞及巨核细胞等，是穿刺成功的标志。幼稚细胞及巨核细胞等，是穿刺成功的标志。如如骨髓小粒骨髓小粒较少或缺如，较少或缺如，骨髓特有成份骨髓特有成份减少，提减少，提示骨髓可能有不同的外周血液稀释，为取材不良示骨髓可能有不同的外周血液稀释，为取材不良 如如脂肪滴脂肪滴增多，则表示红髓成份减少，反映骨髓增多，则表示红髓成份减少，反映骨髓增生减低增生减低插图插图

3、2 2、判断骨髓增生程度（表、判断骨髓增生程度（表4-2-74-2-7）骨髓增生程度通常以骨髓中有核细胞的量来反映。骨髓增生程度通常以骨髓中有核细胞的量来反映。采用五级法采用五级法 有核细胞：成熟红细胞有核细胞占全部细胞百分率有核细胞/1000个成熟红细胞常见原因范围平均范围平均极度活跃1:0.52.01:150238.96521.07351.96白血病明显活跃1:5121:101043.78230.77114.51增生贫血增生活跃1.16321:20111021.5363.6735.34正常骨髓增生减低1:35701:500.517.4119.6110.53慢性再障明显减低1:3001:20

4、0100/HP返回返回选择有核细胞分布均匀、结构清晰、着色良好的涂膜体选择有核细胞分布均匀、结构清晰、着色良好的涂膜体尾交界处部位作油浸镜检查。尾交界处部位作油浸镜检查。插图735735个为正常值个为正常值(1.5(1.5*3cm3cm涂片）。涂片）。粒、红两系平等增多或减少，前者如红白血病，后者如AA；1、缺铁性贫血时，早期骨髓中贮存铁就已耗尽，细胞外铁呈“”。CD34,33,15,14,13+然后计算出分别占有核细胞总数的百分数。2、溶血检查。粒系中原粒cell(-)，早幼粒cell强阳性，中性粒细胞（+），单核（），淋巴（-），少数（），红细胞（-）；2、可用作血细胞类型的鉴别。识别巨核

5、细胞和血小板的抗体有CD41、CD42、CD61等。MDS-RAS铁染色，图中所指为环形铁粒幼红细胞M2Baso/t(12p)急性淋巴细胞白血病则呈阴性反应。CD34,33,15,14,13+M2/t(8;21)粒系 红系 单核系 淋巴系 浆系 其他细胞3、估计PLt数量及注意其形态有无异常；1、ALL与AML细胞免疫表型特点（四）酸性磷酸酶染色（ACP）1、临床CD33,血型糖蛋白A（八）铁染色（普鲁氏蓝反应）如疟原虫）如疟原虫）返回【原理原理】血细胞中的过氧化物酶（peroxidase，POX）能分解试剂中的底物H2O2，释出新生态氧，使无色联苯胺氧化为蓝色联苯胺，后者与亚硝基铁氰化钠结合

6、形成蓝黑色的颗粒，沉着于细胞质中。【结果结果】胞质中无蓝黑色颗粒者为阴性反应，出现细小颗粒、分布稀疏者为弱阳性反应，颗粒粗大而密集者为强阳性反应。【临床意义临床意义】过氧化物酶染色主要用于急性白血病类型的急性白血病类型的鉴别鉴别。急性粒细胞白血病急性粒细胞白血病时，白血病细胞多呈强阳性反应；急性单核细胞白血病急性单核细胞白血病时呈弱阳性或阴性反应；急性淋巴急性淋巴细胞白血病细胞白血病则呈阴性反应。因此，POX染色对急性粒细胞白血病急性粒细胞白血病与急性淋巴细急性淋巴细胞白血病胞白血病的鉴别最有价值。APL：呈强阳性反应AML-M4：部分呈阳性反应，部分成弱阳性反应AML-M5：呈弱阳性ALL：

7、呈阴性，3+4+。3、铁粒幼细胞性贫血铁粒幼细胞性贫血时，铁粒幼细胞增多，并可见到环状铁粒幼细胞。l阳性为蓝绿色沉淀阳性为蓝绿色沉淀+血色病+AA、铁粒幼贫血+感染+AA、铁粒幼贫血+NBM正常骨髓IDAMDS-RAS铁染色，图中所指为环形铁粒幼红细胞铁染色，图中所指为环形铁粒幼红细胞 急淋急粒急单红白血病1、细胞少时（TB、R-S细胞）（另有钙-钴法 略）t(8;14)(q24;q11)1、教师t(1;14)(p32;q11)识别红细胞系列的抗体常用血型糖蛋白A或B。CD34+、CD90+、Lin-被认为是造血干细胞的主要标志；1、应注意WBC分类计数及形态观察；1、免疫荧光法(immuno

8、f luoresence technigue)3、估计PLt数量及注意其形态有无异常；2)、粒细胞减少：见于AA、粒细胞缺乏症或粒细胞减少症。（CD13、34、38、33、MPO、HLA-DR阳性）t(10;14)(q24;q11)CD34+、CD33+为造血干细胞向髓系定向的标志；2、病人M5a（M5b,M4）急性淋巴细胞白血病则呈阴性反应。2、急性粒细胞白血病一般为阴性或呈弱阳性反应，不被氟化钠抑制。骨髓增殖性疾病，如CML、真红、ET、IMF等；骨髓增殖性疾病，如CML、真红、ET、IMF等；根据不同抗体组合可T、B淋巴细胞区分为不同分化阶段。2、急性淋巴细胞白血病（ALL）免疫表型特点

9、有核细胞：成熟红细胞1、教师粒、红两系细胞基本不变化的造血系统疾病，如MM、骨髓转移癌、ITP等。1、急性单核细胞白血病、急性粒-单核细胞白血病的单核系细胞呈阳性反应，可被氟化钠抑制(抑制率50%)；、粒细胞系与红细胞系比例（粒/红比例）1、感染性疾病：细菌感染与病毒感染的鉴别重视组化染色和其他实验检查1)、粒系细胞增多：见于：各型粒细胞白血病，急性粒细胞白血病以原粒细胞及早幼粒细胞增多为主，CML以中性晚幼粒及杆状核粒细胞增多为主；4、用于识别不同分化阶段的细胞M2/t(8;21)2)、粒细胞减少：见于AA、粒细胞缺乏症或粒细胞减少症。1、同事分类计数时，巨核细胞及分裂、退化细胞不计入。M3

10、/t(15:17)识别红细胞系列的抗体常用血型糖蛋白A或B。原理：过碘酸能将血细胞内的糖元氧化，生成醛基。是CML的特征性异常染色体，检出率为90-95%，其中绝大多数为t(9;22)(q34;q11),称为典型易位。CD34,33,15,13+是CML的特征性异常染色体，检出率为90-95%，其中绝大多数为t(9;22)(q34;q11),称为典型易位。多看 1、数量 2、种类 如何学好血液细胞形态学如何学好血液细胞形态学多讨论 1、同事 2、老师多读书（细胞形态、发病情况）1、常见病 2、罕见病多请教 1、教师 2、图谱多会诊 1、同级医院 2、上级医院多沟通 1、临床 2、病人多观察 1

11、、细胞少时（TB、R-S细胞）2、细胞多时（特殊类型：如红细胞样瘤细胞）重视组化染色和其他实验检查 1、常规（POX或SBB、NAP、PAS、Fe)；少见(NSE中性、酸性、碱性，ACP）；2、溶血检查。如疟原虫）如疟原虫）（三）中性粒细胞碱性磷酸酶染色（三）中性粒细胞碱性磷酸酶染色（NAPNAP）（Neutrophilalkaline Phosphatase，NAP）【原理原理】偶氮偶联法。是血细胞内的碱性磷酸酶将基质液中的-磷酸萘酚钠水解，产生-萘酚与重氮盐偶联形成灰黑色沉淀，定位于细胞质内酶活性所在之处。（另有钙-钴法 略）【结果结果】碱性磷酸酶主要存在于成熟阶段的中性粒细胞（分叶核及杆

12、状核），其他血细胞均呈阴性反应。【参考值参考值】成人NAP阳性率10%40%；积分值4080（分）。粒、红两系平等增多或减少，前者如红白血病，后者如AA；（二）细胞免疫分型的临床应用粒、红两系细胞基本不变化的造血系统疾病，如MM、骨髓转移癌、ITP等。t(15:17)(q22;q11-12)【参考值】成人NAP阳性率10%40%；判断骨髓取材成功的标准M3/t(15:17)3、急性粒细胞白血病时，NAP积分值减低；仔细观察各系列细胞的形态有无异常，包括注意成熟红细胞的形态有无异常，有无特殊异常细胞出现，必要时还需注意有无寄生虫。【原理】人体内的总铁有一定量以铁蛋白和含铁血黄素的形式贮存在骨髓中

13、的单核-吞噬细胞系统细胞的胞质内，幼红细胞胞质的线粒体中也含有含铁血黄素。2、急性淋巴细胞白血病（ALL）免疫表型特点M2Baso/t(12p)CD34+、CD19+为B淋巴细胞系祖细胞标志。急性单核细胞白血病时一般正常或减低。1、ALL与AML细胞免疫表型特点机体免疫状态、某些疾病诊断、病期分析、监测治疗和判断预后的参数。原理：是一种脂溶性的染料，可溶于细胞质内的含脂物质，使胞浆中的脂类物质呈棕黑色或深黑色颗粒。1、常见病急性淋巴细胞白血病则呈阴性反应。1、ALL与AML细胞免疫表型特点临床意义1、感染性疾病：细菌感染细菌感染与病毒感染病毒感染的鉴别2 2、慢性粒细胞白血病、慢性粒细胞白血病

14、的NAP活性明显减低，积分值常为0，类白血病反应类白血病反应的NAP活性极度增高。3 3、急性粒细胞白血病、急性粒细胞白血病时，NAP积分值减低；急性急性淋巴细胞白血病淋巴细胞白血病的NAP积分值多增高；急性单核急性单核细胞白血病细胞白血病时一般正常或减低。原理原理：过碘酸能将血细胞内的糖元氧化，生成醛基。醛基与Schiff 液中的无色品红结合，形成紫红色化合物，定位于细胞质内。结果结果：胞质中有红色颗粒、团块、均匀红色为阳性阳性。意义意义：红血病、红白血病红血病、红白血病阳性阳性，其他红细胞贫血红细胞贫血阴性阴性，巨核细胞巨核细胞阳性阳性。MDS-RAS铁染色，图中所指为环形铁粒幼红细胞铁染色，图中所指为环形铁粒幼红细胞 多观察 1、细胞少时（TB、R-S细胞）2、细胞多时（特殊类型：如红细胞样瘤细胞）