食品中致病性球菌的检验-葡萄球菌课件.ppt
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1、第二节第二节 食品中致病性球菌的检验食品中致病性球菌的检验 一、金黄色葡萄球菌的检验一、金黄色葡萄球菌的检验l 葡萄球菌在自然界分布极广,空气、土壤、水、饲葡萄球菌在自然界分布极广,空气、土壤、水、饲料、食品(剩饭、糕点、牛奶、肉品等料、食品(剩饭、糕点、牛奶、肉品等)以及人和动以及人和动物的体表粘膜等处均有存在,大部分是不致病的腐物物的体表粘膜等处均有存在,大部分是不致病的腐物寄生菌,也有一些致病的球菌。寄生菌,也有一些致病的球菌。l 食品中生长有金黄色葡萄球菌,是食品卫生的一种食品中生长有金黄色葡萄球菌,是食品卫生的一种潜在危险,因为金黄色葡萄球菌可以产生潜在危险,因为金黄色葡萄球菌可以产
2、生肠毒素肠毒素,食,食后能引起食物中毒。因此,检查食品中金黄色葡萄球后能引起食物中毒。因此,检查食品中金黄色葡萄球菌有实际意义。菌有实际意义。(一)形态与染色(一)形态与染色l 典型的葡萄球菌呈球形,直径典型的葡萄球菌呈球形,直径0.40.4mm-1.2-1.2mm,致病性葡萄致病性葡萄球菌一般较非致病性菌小,且各个菌体的大小及排列也较整球菌一般较非致病性菌小,且各个菌体的大小及排列也较整齐齐。细菌繁殖时呈多个平面的不规则分裂,堆积成为葡萄串细菌繁殖时呈多个平面的不规则分裂,堆积成为葡萄串状排列。状排列。l 在液体培养基中生长,常呈双球或短链状排列,易误认为在液体培养基中生长,常呈双球或短链状
3、排列,易误认为链球菌。葡萄球菌链球菌。葡萄球菌无鞭毛及芽胞无鞭毛及芽胞,一般不形成荚膜一般不形成荚膜,易被碱,易被碱性染料着色,性染料着色,G+G+,当衰老、死亡或被白细胞吞噬后常转为革,当衰老、死亡或被白细胞吞噬后常转为革兰氏阴性,对青霉素有抗药性的菌株也为革兰氏阴性。兰氏阴性,对青霉素有抗药性的菌株也为革兰氏阴性。(二二)分类分类l 葡萄球菌属于葡萄球菌属于微球菌的葡萄球菌属微球菌的葡萄球菌属,葡萄,葡萄球菌种类繁多,以往的分类方法是以球菌种类繁多,以往的分类方法是以菌落色菌落色素素将葡萄球菌分为金黄色葡萄球菌、白色葡将葡萄球菌分为金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌和柠檬色葡萄球菌三种。萄球菌和
4、柠檬色葡萄球菌三种。l 但是这种色素指标很不稳定。但是这种色素指标很不稳定。l 根据根据伯杰氏鉴定细菌学手册伯杰氏鉴定细菌学手册第八版,第八版,按葡萄球菌的生理化学组成,将葡萄球菌分按葡萄球菌的生理化学组成,将葡萄球菌分为为金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、腐生葡金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌萄球菌三种。三种。l 其中其中金黄色葡萄球菌多为致病性菌金黄色葡萄球菌多为致病性菌,表皮,表皮葡萄球菌偶尔致病,腐生葡萄球菌一般为非葡萄球菌偶尔致病,腐生葡萄球菌一般为非致病菌。致病菌。l 6060-70-70的金黄色葡萄球菌可被相应的噬菌的金黄色葡萄球菌可被相应的噬菌体裂解,故可用噬菌体进行分型
5、体裂解,故可用噬菌体进行分型。表皮葡萄球。表皮葡萄球菌对噬菌体不敏感,故不能用噬菌体分型。菌对噬菌体不敏感,故不能用噬菌体分型。l 噬菌体分型在传染源追踪上具有重要意义。噬菌体分型在传染源追踪上具有重要意义。l 通常使用的基本分型通常使用的基本分型噬菌体有噬菌体有2222型型,根据它们对菌,根据它们对菌株的裂解反应,可将金黄色葡萄球菌分成以下几群:株的裂解反应,可将金黄色葡萄球菌分成以下几群:I I群群:2929、2525、52A52A、7979、8080;IIII群:群:3A3A、3B3B、3C3C、5555、7171;IIIIII群群:6 6、7 7、42E42E、4747、5353、54
6、54、7575、7777、83A83A;IVIV群群:42D42D。(三三)培养特性培养特性l 营养要求不高,在普通培养基上生长良好。需氧或营养要求不高,在普通培养基上生长良好。需氧或兼性厌氧,最适生长温度为兼性厌氧,最适生长温度为3737,最适,最适pHpH值为值为7.47.4。l 在普通营养琼脂平板上,培养在普通营养琼脂平板上,培养24h-48h24h-48h后,可形成后,可形成圆形、凸起、边缘整齐、表面光滑、湿润、有光泽、圆形、凸起、边缘整齐、表面光滑、湿润、有光泽、不透明菌落不透明菌落。菌落直径通常在。菌落直径通常在1mm-2mm1mm-2mm,但也有大至,但也有大至4mm-5mm4m
7、m-5mm者。者。金黄色葡萄球菌形态金黄色葡萄球菌形态金葡在金葡在Baird-ParkerBaird-Parker平板上菌落直径平板上菌落直径2-3mm2-3mm,灰色到黑色,灰色到黑色,边缘淡色,周围有一浑浊带,外层有一透明圈。接种针边缘淡色,周围有一浑浊带,外层有一透明圈。接种针接触有奶油至树脂硬度。偶见非脂肪溶解的类似菌落耽接触有奶油至树脂硬度。偶见非脂肪溶解的类似菌落耽误浑浊带和透明圈。误浑浊带和透明圈。触媒实验触媒实验电镜下的金葡电镜下的金葡海博显色培基海博显色培基l 可产生不同色素可产生不同色素,如金黄色、白色及柠檬色,这,如金黄色、白色及柠檬色,这些色素为脂溶性,能溶于醇、乙醚、
8、氯仿及苯等有机些色素为脂溶性,能溶于醇、乙醚、氯仿及苯等有机溶剂中,溶剂中,因不溶于水,故色素只限于培养物,而不外因不溶于水,故色素只限于培养物,而不外渗至培养基中渗至培养基中。l 色素的形成依培养条件而异色素的形成依培养条件而异:通常在:通常在2222产生色产生色素较多;于素较多;于3737培养后,再置室温培养后,再置室温1d-2d1d-2d,色素产生,色素产生明显;在固体培养基中含有碳水化合物、牛乳或血清明显;在固体培养基中含有碳水化合物、牛乳或血清等,色素形成最好,有等,色素形成最好,有O O2 2及及COCO2 2环境下易形成色素,环境下易形成色素,而在无而在无O O2 2环境中不形成
9、色素。环境中不形成色素。l 耐盐性强耐盐性强,在含,在含5 5-10-10的氯化钠培养的氯化钠培养基中能生长,在含有基中能生长,在含有2020-30-30二氧化碳的二氧化碳的环境中培养,可产生大量的毒素。环境中培养,可产生大量的毒素。l 在肉汤培养基中生长迅速,在肉汤培养基中生长迅速,3724h3724h培养后,培养后,呈均匀混浊生长,延长培养时间,管底出现少呈均匀混浊生长,延长培养时间,管底出现少量沉淀,轻轻振摇,沉淀物上升,旋即消散,量沉淀,轻轻振摇,沉淀物上升,旋即消散,培养培养2d-3d2d-3d后可形成很薄的菌环,在管底则形成后可形成很薄的菌环,在管底则形成多量粘稠沉淀。多量粘稠沉淀
10、。l 在血琼脂平板上,形成的菌落较大,多数致在血琼脂平板上,形成的菌落较大,多数致病性菌株可产生病性菌株可产生溶血毒素溶血毒素,使菌落周围产生透,使菌落周围产生透明的溶血圈明的溶血圈(溶血溶血)。(四四)生化特性生化特性l 本属细菌大多数本属细菌大多数不能分解乳糖、葡萄糖、不能分解乳糖、葡萄糖、麦芽糖、蔗糖麦芽糖、蔗糖。产酸不产气产酸不产气。l 致病菌株能分解甘露醇,产酸致病菌株能分解甘露醇,产酸。甲基红阳甲基红阳性,性,V VP P为弱阳性,多数菌株能分解尿素产为弱阳性,多数菌株能分解尿素产氨,还原硝酸盐,不产生吲哚。氨,还原硝酸盐,不产生吲哚。(五五)毒素与酶毒素与酶l 葡萄球菌的致病力决
11、定于细菌产生的葡萄球菌的致病力决定于细菌产生的毒素毒素和酶和酶的能力。的能力。溶血毒素、杀白血球毒素、肠毒素、溶血毒素、杀白血球毒素、肠毒素、血浆凝固酶、溶纤维蛋白酶、透明质酸酶、脱血浆凝固酶、溶纤维蛋白酶、透明质酸酶、脱氧核糖核酸酶氧核糖核酸酶 1 1、溶血毒素、溶血毒素l 多数致病菌株能产生该毒素,使血琼脂平板菌落周多数致病菌株能产生该毒素,使血琼脂平板菌落周围出现溶血环,在试管中出现溶血反应。围出现溶血环,在试管中出现溶血反应。l 溶血毒素是一种外毒素,根据其对动物细胞的溶血溶血毒素是一种外毒素,根据其对动物细胞的溶血范围、抗原性、溶血时所需温度等不同可分为范围、抗原性、溶血时所需温度等
12、不同可分为、四种,其中以四种,其中以溶血素为主。溶血素为主。2 2、杀白血球毒素、杀白血球毒素l 能破坏人或兔的白细胞和巨噬细胞,使其能破坏人或兔的白细胞和巨噬细胞,使其失去活性,最后膨胀破裂。失去活性,最后膨胀破裂。l 致病性与非致病性葡萄球菌都能被吞噬细致病性与非致病性葡萄球菌都能被吞噬细胞吞噬,非致病性菌株在白细胞内很快被杀胞吞噬,非致病性菌株在白细胞内很快被杀死,而致病菌株则能在白细胞内生长繁殖。死,而致病菌株则能在白细胞内生长繁殖。3 3、肠毒素、肠毒素l 金黄色葡萄球菌的某些菌株能产生引起金黄色葡萄球菌的某些菌株能产生引起急性肠胃炎急性肠胃炎的肠的肠毒素。毒素。l 肠毒素共分肠毒素
13、共分6 6型型(A(A、B B、C1C1C 2C 2、D D、E)E),各型具有不同,各型具有不同的血清学特性,其中以的血清学特性,其中以A A型引起的食物中毒最多,型引起的食物中毒最多,B B型和型和C C型次之。型次之。l 该毒素为一种该毒素为一种可溶性蛋白质,耐热可溶性蛋白质,耐热,经,经l00l00煮沸煮沸30min30min不被破坏,也不受胰蛋白酶的影响。可使人、猫、猴引起不被破坏,也不受胰蛋白酶的影响。可使人、猫、猴引起急性胃肠炎症状。急性胃肠炎症状。4 4、血浆凝固酶、血浆凝固酶l 这是一种这是一种能使含有枸橼酸钠或肝素抗凝剂的兔或人能使含有枸橼酸钠或肝素抗凝剂的兔或人血浆发生凝
14、固的酶血浆发生凝固的酶。l 大多数致病性葡萄球菌产生此酶,而非致病性菌一大多数致病性葡萄球菌产生此酶,而非致病性菌一般不产生。因此,般不产生。因此,凝固酶是鉴别葡萄球菌有无致病性凝固酶是鉴别葡萄球菌有无致病性的重要指标的重要指标。l 凝固酶较耐热,在凝固酶较耐热,在l0030minl0030min或高压消毒后仍保存或高压消毒后仍保存部分活性,但易被蛋白分解酶破坏。部分活性,但易被蛋白分解酶破坏。5 5、溶纤维蛋白酶、溶纤维蛋白酶l 可使人、犬、豚鼠及家兔的已经凝固的纤维蛋白溶可使人、犬、豚鼠及家兔的已经凝固的纤维蛋白溶解解。溶纤维蛋白酶是一种激酶,可激活血浆蛋白酶原。溶纤维蛋白酶是一种激酶,可
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