阳性吲哚试验大肠杆菌课件.ppt

1、 第一节肠杆菌科1肠道杆菌（enteric bacilli）的概念:肠杆菌科（Enterobacteriaceae）共30个属，120个种，大多为肠道正常菌群，少数为致病菌，一部分在发生移位，或宿主免疫力低下时，可成为条件致病菌。第一节 概 述2正常菌群致病菌埃稀菌属变形杆菌属克雷伯菌属肠杆菌属沙雷菌属枸橼酸菌属致病性大肠埃稀菌志贺菌属沙门菌属耶尔森菌属大肠杆菌 肠外感染普通变形杆菌：肠外感染、食物中毒医院感染EPEC.ETECEIEC.EHECEAggEC肠内感染食物中毒A群痢疾志贺菌B群福氏志贺菌C群鲍氏志贺菌D群宋内氏志贺菌急性菌痢慢性菌痢中毒性菌痢伤寒沙门菌甲、乙、丙鼠伤寒沙门菌猪霍乱

2、沙门菌肠炎沙门菌肠热症食物中毒败血症小肠结肠炎耶尔森菌 食物中毒鼠疫耶尔森菌 鼠疫 肠道杆菌345 共性：(一)生物学特性 1.形态染色：均为革兰阴性杆菌，无芽孢、有菌毛，部分有荚膜或包膜，大多有周鞭毛（除志贺菌、克雷伯、鼠疫耶尔森菌之外）。2.营养要求：需氧或兼性厌氧。常用选择培养基：S S (Salmonella-shigella)。EMB (Eosin-methylene-blue)MAC (Mac Conkey)3.生化反应：具丰富的酶，生化反应活跃,并各不相同，为鉴定的主要依据。6 致病性越强，生化反应能力越弱。非致病菌（除变形杆菌外）均分解乳糖产酸，致病菌不发酵乳糖。常用生化反应培

3、养基：KIA、MIU 定科试验：革兰阴性杆菌、触酶阳性、氧化酶阴性、硝酸盐还原试验阳性4、抗原构造：有多种抗原 菌体抗原（O抗原）：脂多糖，耐热（100不被破坏），有属、种特异性，又有类属抗原和特异性抗原之分，类属抗原可引起交叉反应，凝集为颗粒状。H抗原 鞭毛蛋白，不耐热（60 30min即可破坏），特异性强，凝集为絮状。7 表面抗原(K)：包绕于O抗原的外面的多糖（不耐热），不同细菌有不同的名称（如大肠杆菌及志贺菌的K抗原，沙门菌的Vi抗原）抗原是肠道杆菌血清学分群和分型的依据。5、遗传变异 S-R变异 H-O变异 耐药性变异 6、传播途径 经消化道以饮食、饮水为媒介 条件致病菌：体内感染（

4、免疫力下降、移位），为医院感染主要病原菌群。8 （二）（二）微生物学检验微生物学检验 标本：肠内标本：新鲜粪便 肠外标本：血液、体液、尿液等 分离培养 血液 肉汤增菌 血平板分离 尿液、伤口分泌物 MAC分离 粪便：SS、EMB分离9检验程序检验程序 标本 直接检查直接检查 分离培养：选择培养基分离培养：选择培养基 BAP，SS，EMHMAC 可疑菌落可疑菌落 药物敏感试验药物敏感试验 鉴定鉴定 生化，血清学鉴定，补充试验生化，血清学鉴定，补充试验10 鉴定依据：革兰染色 触酶、氧化酶、硝酸盐还原 KIA、MIU、IMViC,其他生化反应 血清玻片凝集（鉴定到种、型或血清型）11项目项目埃希菌

5、属埃希菌属志贺菌属志贺菌属沙门菌属沙门菌属变形菌属变形菌属形态形态培养培养特点特点请列表比较请列表比较 分解乳糖分解乳糖 IMViC+-IMViC+-条件致病条件致病/少数致病少数致病 不分解乳糖，动力不分解乳糖，动力-IMViC-+-IMViC-+-，H H2 2S-S-致病致病 不分解乳糖，动力不分解乳糖，动力+IMViC-+-+IMViC-+-+，H H2 2S+S+致病致病不分解乳糖不分解乳糖/迁徙生长迁徙生长 IMViC-+IMViC-+，尿素，尿素+条件致病条件致病12SS琼脂平板琼脂平板伤寒沙门菌落较小、黑色伤寒沙门菌落较小、黑色大肠埃希菌落较大、红色大肠埃希菌落较大、红色中国蓝

6、琼脂平板中国蓝琼脂平板大肠埃希菌菌落特征大肠埃希菌菌落特征（分解乳糖）（分解乳糖）双糖铁双糖铁吲哚试验吲哚试验 I枸橼酸盐试验枸橼酸盐试验 C13（三）临床意义（三）临床意义 1.致病物质：菌毛、内毒素、肠毒素 2.所致疾病（1）肠道感染：急慢性肠道感染、食物中毒（2）肠道外感染：败血症、泌尿系统感染、伤口等 3.耐药性：（ESBL）埃希菌属和克雷伯菌属产超广谱内酰胺酶内酰胺酶的耐药菌株。14 二二 埃希菌属埃希菌属 埃希菌属 （Escherichia）大肠埃希菌（E.coli）蟑螂埃希菌（E.blattae）格森埃希菌（E.fergusonii）赫尔曼埃希菌（E.hermannii）伤口埃希

7、菌（E.vulneris）分布及种类：15u1.形态染色形态染色 0.40.7 m 13m 短杆菌短杆菌革兰染色阴性革兰染色阴性有鞭毛有鞭毛有菌毛有菌毛埃希菌属生物学特性16埃希菌属生物学特性17埃希菌属生物学特性182.培养特性兼性厌氧，营养要求不高普通平板：中等大小圆形凸起，光滑灰白色。血平板：某些菌株呈溶血S S、MAC平板：分解乳糖产酸呈粉红色菌落EBM：兰紫色菌落，有金属光泽液体培养基：混浊生长19 S S 大肠埃希菌大肠埃希菌20MAC21EMB兰紫色菌落兰紫色菌落223、生化反应 分解葡、乳、麦、甘，产酸产气，蔗糖因株而异 I M Vi C：+，脲酶：肠内感染菌株：不发酵/迟缓发

8、酵乳糖，KIA,MAC中可产碱。23阳阳性性吲哚试验吲哚试验大肠杆菌：大肠杆菌：+产气杆菌：产气杆菌：-24常用鉴定试验常用鉴定试验甲基红试甲基红试验验大肠杆菌：大肠杆菌：+产气杆菌：产气杆菌：-25阳性阳性阴性阴性VP试验试验26枸橼酸盐利用试验枸橼酸盐利用试验大肠杆菌：大肠杆菌：-产气杆菌：产气杆菌：+27阳性阳性阴性阴性28大肠埃希菌大肠埃希菌IMViC试验（）试验（）右侧为对照（）右侧为对照（）埃希菌属埃希菌属IMViC试验试验2930KIA上生长现象上生长现象产酸产气产酸产气31阴性阴性阳性阳性硝酸盐还原试验硝酸盐还原试验324、抗原构造：有O、H和 K三种 O 抗原是血清学分型的基

9、础，约170种。H 抗原大于56种 血清型的表示式：O：K：H，如：O111：K58：H2；O157：H733埃希菌属抗原结构345、抵抗力：自然界水中存活数周或数月。胆盐、煌绿可抑制其生长，对氯霉素、链、庆大酶素敏感。易产生耐药性：出现了产超广谱-内酰胺酶（Extended-Spectrum-lactamase：ESBLs）菌株，则对第三代头孢菌素（头孢噻肟、头孢他定、头孢哌酮、头孢曲松等）耐药。产ESBLs的革兰阴性菌除了大肠埃希菌之外，常见的还有阴沟肠杆菌、粘质沙雷氏菌、弗劳地枸橼酸菌、铜绿假单孢菌 35（二）微生物学检验（二）微生物学检验1.标本采集2.检验程序及方法36 血 液 肉汤

10、增菌血平板分离脓汁、痰、分泌物、尿粪便、直肠拭子 MAC、EMB分离37 1824H 可疑菌落涂、染、检肠道外感染肠道感染初步鉴定菌落特征、革兰染色 KIA、MIU最终鉴定：系统生化反应报 告ETEC生化反应肠毒素测定 EPEC EIEC EHEC血清玻片凝集3738大肠埃希菌的初步鉴定大肠埃希菌的初步鉴定 KIA MIU斜面 底层 产气 H2S动力 吲哚 脲酶M VP C 触媒氧化酶硝酸盐 A A +/-+/-+K A +K A +K A +/-+39微生物学检验微生物学检验n最终鉴定：必要时可用系列生化反应做最后最终鉴定：必要时可用系列生化反应做最后鉴定，亦可用肠杆菌科诊断试剂盒。鉴定，亦

11、可用肠杆菌科诊断试剂盒。401.致病物质：K抗原：抗吞噬，或抵抗抗体和补体的作用 菌毛：ETEC的菌毛称定植因子(CFA)毒素：括内毒素和外毒素（肠毒素）肠毒素：1）不耐热肠毒素（不耐热肠毒素（heat labile toxin,LT）,6530min可破坏。可破坏。2）耐热肠毒素（）耐热肠毒素（heat stable toxin,ST）分泌大量）分泌大量 肠液而导致腹泻肠液而导致腹泻 （三）临床意义412.所致疾病 1）肠道外感染：移位到肠外组织、器官，引起化脓性感染，如泌尿系统感染、胆囊炎、腹膜炎等。2）肠内感染：腹泻（轻微腹泻霍乱样腹泻）42肠产毒型大肠埃希菌（entertoxigeni

12、c E coli,ETEC）肠致病型大肠埃希菌 (enteropathogenic E.coli,EPEC)肠侵袭型大肠埃希菌（enteroinvasive E.coli,EIEC）肠出血型大肠埃希菌 (enterohemorrhagic E.coli EHEC)肠聚集型大肠埃希菌 (enteroaggrehative E coli EAggEC)致病性大肠杆菌：43引起腹泻的大肠杆菌种类及主要特征菌株 侵袭部位 疾病与症状 致病机制旅行者腹泻，婴幼儿腹泻，水样，伴恶心呕吐、腹痛、脱水、低热肠毒素致大量分泌液体、电解质婴幼儿腹泻，水样或粘液便，发热，恶心呕吐粘附、破坏上皮细胞志贺样腹泻，水样致脓血便，含红、白细胞、黏液，发热腹痛侵袭和破坏肠粘膜上皮细胞出血性结肠炎，水样便以血便，剧烈腹痛，低热，HUS等溶原性噬菌体编码SLT-I或II中断肠黏膜上皮细胞蛋白质合成婴儿腹泻，持续水样便，呕吐，低热，脱水聚集性黏附上皮细胞，阻断液体吸收小肠小肠结肠结肠小肠ETEC（产毒）EPEC（致病）EIEC（侵袭）EHEC（出血）FAggEC凝集44