登革热病例的标本采集和实验室检测课件.ppt

1、医学ppt1登革热病例的标本采集和实验室检测医学ppt2登革热病例的实验室诊断n单份血清特异性IgG抗体或IgM抗体阳性n急性期、恢复期血清的登革IgG抗体滴度4倍增长nRT-PCR或荧光PCR检测到登革病毒基因n从急性期患者血清、脑脊液、血细胞、组织中分离到登革病毒医学ppt3登革热病例的标本采集医学ppt4全血标本全血标本采集流程：采集流程：无菌采集发病后0-5d的患者静脉血3ml，加入到无菌干燥的采血管中，标明采样日期和病人的姓名，立即送至实验室分离血清全血不能冷冻；运送过程尽量减少颠簸，避免溶血，最好于24小时内分离到血清。医学ppt5血清标本血清标本分离流程：分离流程：尽量采集病人的

2、急性期和恢复期血清。采集时间：第一份血应在发病3天内采集，最迟不晚于发病后7天。第二份血应在发病24周采集。无菌采集患者静脉血3ml，加入到无菌干燥的试管中，标明病人姓名、采集日期，并做好病人性别、年龄、发热日期、出疹日期的资料登记。常温送到实验室分离血清。2000rpm离心10分钟，分离血清；如果没有离心机，血标本应静置，直到血清析出；小心吸取血清，避免吸到红细胞；在无菌条件下，移至无菌的螺口离心管中；短期（7天内）保存置于48，长期保存于20。医学ppt6脑脊液标本脑脊液标本分离流程：分离流程：标本采集应由临床医生完成。由腰椎穿刺无菌采集脑脊液35ml，放于无菌螺口离心管内。标本采集后应立

3、即4送检。医学ppt7蚊标本蚊标本采集、处理流程：采集、处理流程：采集吸过血的埃及伊蚊、白纹伊蚊或其它可疑蚊种，用10%葡萄糖液喂养至胃血消化完，-20冷冻。按蚊种及捕获地点分组，20-50只/组，用生理盐水冲洗后加入1ml标本处理液，充分研磨，10000RPM，4，离心10min，取上清液。-上清液于4 作用2h,接种C6/36细胞分离病毒。-上清液分离核酸，进行RT-PCR或荧光PCR检测登革病毒 核酸。医学ppt8标本的包装运输生物安全手册(WHO 3rd edition):运送感染性材料的基本三层包装：内层容器、第二层包装、外层包装医学ppt9内层包装：防水、防漏、贴好标签、标本独立包

4、装 第二层包装：防水、防漏（带吸收性材料）外层包装：为第二层包装提供物理性保护、保持低温（冰袋，4）医学ppt10登革热病例的实验室检测方法医学ppt11胶体金快速检测登革热特异性抗体IgM/IgG标本类型：血清阳性结果必须经病毒分离、双份血清抗体滴度检测或病毒核酸检测，才能确诊为登革热病毒感染。医学ppt12ELISA检测登革热特异性抗体IgM/IgG标本类型：血清、脑脊液 ELISA原理：底物被酶高效催化成为有色产物，即间接放大了抗原抗体之间的免疫反应，检测样品的吸光度值可确定样品中是否存在登革热抗体IgM/IgG。医学ppt13C6/36细胞培养分离登革病毒标本类型：血清、脑脊液、蚊匀浆液正常C6/36病变C6/36（+）CPE:细胞皱缩脱落、胀大成空泡、折光度增大、内容物增多医学ppt14RT-PCR检测登革病毒基因标本类型：血清、脑脊液、蚊匀浆液产物电泳，根据条带大小判断目的核酸存在与否医学ppt15根据基因型不同，设计通用型、I、II、III、IV型探针，标上不同荧光基团，根据不同颜色的PCR扩增曲线进行结果判断实时荧光PCR检测登革病毒基因标本类型：血清、脑脊液、蚊匀浆液医学ppt16谢谢！此课件下载可自行编辑修改，供参考！感谢您的支持，我们努力做得更好！