枯草杆菌摇瓶发酵生产淀粉酶课件.ppt

1、枯草杆菌摇瓶发酵生产淀粉酶枯草杆菌摇瓶发酵生产淀粉酶外观：棕褐色液体1，求得测试酶液的浓度。扩大培养多采用摇瓶培养，即在锥形瓶中加入一定量的液体培养基，在摇床上以一定转速摇动进行恒温培养。2、仪器耗材：恒温培养箱、冰箱、高压灭菌锅、无菌操作台、摇床、托盘天平、分析天平、电炉、白色搪瓷杯、三角瓶、量筒、纱布、绳子、pH 试纸、玻棒等。稀碘液：吸取原碘液2.（优选）枯草杆菌摇瓶发酵生产淀粉酶23 g磷酸氢二钠(Na2HPO412H2O)和8.酶的提取与分离纯化的工艺流程用途：耐高温-淀粉酶具有极好的耐热性，能广泛应用于淀粉、酒精、啤酒、味精、酿造、纺织退浆等工业上。酶活力：20000u/ml。(3

2、)在一定的条件下，将一定量的酶液和底物溶液混合均匀，适时记下反应开始的时间。5 mL稀释好的待测酶液，立即计时，摇匀，准确反应5 min；0条件下，1小时液化可溶性淀粉的克数。外观：棕褐色液体酶活力：样品中酶总共有多少个酶单位。可溶性淀粉溶液(20 g/L)：称取2.2)富集培养:投其所好，取其所抗。可用以比较每单位质量酶蛋白的催化能力。磷酸缓冲液(pH=6.1、将酶与反应底物混合均匀，在一定条件下反应一段时间；发酵液发酵液预处理（细菌絮凝）预处理（细菌絮凝）固液分离（离心、过滤）固液分离（离心、过滤）菌体（胞内酶）菌体（胞内酶）动植物源酶动植物源酶液体（胞外酶）液体（胞外酶）细胞破碎细胞破碎

3、提取提取固液分离固液分离液体液体工业、食品、饲料工业、食品、饲料浓缩浓缩（蒸发、超滤、沉淀）（蒸发、超滤、沉淀）浓缩液浓缩液配方配方干燥干燥医药、分析、科研医药、分析、科研液体酶液体酶固体酶固体酶浓缩浓缩分离纯化分离纯化（离心、沉淀、膜分离、（离心、沉淀、膜分离、层析、电泳、萃取、结晶）层析、电泳、萃取、结晶）配方、制剂配方、制剂干燥干燥液体酶液体酶固体酶固体酶v=-dS/dt=dP/dt4)初筛：选出产酶菌种，以多为主。耐高温-淀粉酶采用地衣芽孢杆菌经深层培养，提取等工序精制而成，能随机水解淀粉、糖原及其降解物内部的-1，4葡萄糖苷健使得胶状淀粉溶液的粘度迅速下降，产生可溶性糊精和寡聚糖，过

4、度的水解可产生少量葡萄糖和麦芽糖。酶的反应速度受到许多条件的影响：底物浓度、温度、pH、金属离子等溶解性：易溶于水1）、移液管、试管、烧杯、容量瓶、玻璃棒、秒表。注意：若不能即时测出结果的，则要及时终止反应，然后再测定。酶活力测定的基本步骤：（优选）枯草杆菌摇瓶发酵生产淀粉酶v=-dS/dt=dP/dt按产品的适用温度分为:中温a一淀粉酶活力：2、测定反应液中底物或产物的变化量。液体为2000 u/ml1，中温-淀粉酶分为固体和液体两种剂型。磷酸缓冲液(pH=6.按产品的适用温度分为:2，酶活力定义：1ml酶液(1g酶粉)在60，pH6.对同一种酶，比活力可以代表酶的纯度，比活力愈高，表示酶愈

5、纯。热稳定性：需Ca 2+150ppm，最适作用温度 60-70，在70-90之间，随着温度升高，其反应速度加快，但失活也加快，适用于最高达90的液化过程。外观：棕褐色液体按产品的适用温度分为:0条件下，1分钟液化可溶性淀粉的毫克数。5 mL稀释好的待测酶液，立即计时，摇匀，准确反应5 min；比活力：每mg蛋白质中有多少个酶单位。其中化学滴定、紫外、可见光比色法最为常用。0 mL反应液，加到预先盛有0.酶的提取与分离纯化的工艺流程最适反应条件：最适底物浓度、最适pH、最适温度、最适离子强度、必要的辅助因子；1，求得测试酶液的浓度。其中化学滴定、紫外、可见光比色法最为常用。盐酸溶液：c(HCI

6、)=0.2，酶活力定义：1ml酶液(1g酶粉)在60，pH6.国际上另一个常用的酶活力单位是卡特（Kat）。其中化学滴定、紫外、可见光比色法最为常用。注意：若不能即时测出结果的，则要及时终止反应，然后再测定。化学测定法、光学测定法、气体测定法等。碘、碘化钾、-淀粉酶制剂、磷酸氢二钠、柠檬酸、盐酸、可溶性淀粉（湖州展望化学药业有限公司）。酶活力：20000u/ml。4)初筛：选出产酶菌种，以多为主。连续反应法：基于反应过程中光谱吸收、酸碱度等变化用仪器跟踪反应的进程、记录结果。23 g磷酸氢二钠(Na2HPO412H2O)和8.扩大培养多采用摇瓶培养，即在锥形瓶中加入一定量的液体培养基，在摇床上

7、以一定转速摇动进行恒温培养。根据底物或产物的物理化学性质按产品的适用温度分为:按产品的适用温度分为:3)分离获得纯培养(pure culture)的微生物。1、菌种：枯草杆菌（已活化好，每组1支）碘、碘化钾、-淀粉酶制剂、磷酸氢二钠、柠檬酸、盐酸、可溶性淀粉（湖州展望化学药业有限公司）。液体剂型酶制剂和固体剂型酶制剂。2，酶活力定义：1ml酶液(1g酶粉)在60，pH6.-淀粉酶制剂的卫生要求1961年国际生物化学与分子生物学联合会规定：在特定条件下，每1 min 催化1 mol 的底物转化为产物的酶量定义为1 个酶活力单位。1g固体酶粉(或1 mL液体酶)，于70、pH=6.用途：耐高温-淀

8、粉酶具有极好的耐热性，能广泛应用于淀粉、酒精、啤酒、味精、酿造、纺织退浆等工业上。在酶纯化过程中，比活力增高。固体分为 2000、4000u/g,6000u/g 三种。最适反应条件：最适底物浓度、最适pH、最适温度、最适离子强度、必要的辅助因子；在喷射液化工艺中瞬间温度达 105-110，仍能有效水解淀粉。5 mL盐酸溶液和5.也称酶活性，酶催化一定化学反应的能力。注意：若不能即时测出结果的，则要及时终止反应，然后再测定。广泛应用于淀粉糖工业、酒精、啤酒、味精、酿造、烘焙、饲料、纺织退浆、医药等领域。可用以比较每单位质量酶蛋白的催化能力。碘、碘化钾、-淀粉酶制剂、磷酸氢二钠、柠檬酸、盐酸、可溶

9、性淀粉（湖州展望化学药业有限公司）。发酵生产中多用液体深层发酵法制备酶。外观：棕褐色液体 溶解性：易溶于水000 1 g)或准确吸取酶液1.3)分离获得纯培养(pure culture)的微生物。5 mL盐酸溶液和5.5 mL盐酸溶液和5.3、工艺条件：查资料，自行设计酶的反应速度受到许多条件的影响：底物浓度、温度、pH、金属离子等化学测定法、光学测定法、气体测定法等。2、仪器耗材：恒温培养箱、冰箱、高压灭菌锅、无菌操作台、摇床、托盘天平、分析天平、电炉、白色搪瓷杯、三角瓶、量筒、纱布、绳子、pH 试纸、玻棒等。中温-液化型淀粉酶系用枯草芽孢杆菌（Bacillus Subtilis)经发酵提炼

10、精制而成。微生物发酵法是酶制剂生产的主要方法。1、将酶与反应底物混合均匀，在一定条件下反应一段时间；0 mL反应液，加到预先盛有0.连续反应法：基于反应过程中光谱吸收、酸碱度等变化用仪器跟踪反应的进程、记录结果。-淀粉酶alpha-amylase在特定条件下，每秒催化1 mol底物转化为产物的酶量定义为1卡特（Kat）。酶的提取与分离纯化的工艺流程酶可由动物（如胰蛋白酶、胃蛋白酶）、植物（如木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶）和微生物（细菌、霉菌、酵母）产生，其中工业酶制剂大多数由微生物发酵法生产。按产品的适用温度分为:(4)反应到一定的时间，取出适量的反应液，运用各种生化检测技术，测定产物的生成量或底物

11、的减少量。凡是能催化淀粉（或糖元）分子及其分子片段中的-葡萄糖苷键水解的酶，统称为淀粉酶，包括-淀粉酶，糖化酶，-淀粉酶，异淀粉酶，环状糊精生成酶，麦芽寡糖生成酶等。耐高温-淀粉酶采用地衣芽孢杆菌经深层培养，提取等工序精制而成，能随机水解淀粉、糖原及其降解物内部的-1，4葡萄糖苷健使得胶状淀粉溶液的粘度迅速下降，产生可溶性糊精和寡聚糖，过度的水解可产生少量葡萄糖和麦芽糖。2、仪器耗材：恒温培养箱、冰箱、高压灭菌锅、无菌操作台、摇床、托盘天平、分析天平、电炉、白色搪瓷杯、三角瓶、量筒、纱布、绳子、pH 试纸、玻棒等。发酵结束后：检查是否染菌凡是能催化淀粉（或糖元）分子及其分子片段中的-葡萄糖苷键

12、水解的酶，统称为淀粉酶，包括-淀粉酶，糖化酶，-淀粉酶，异淀粉酶，环状糊精生成酶，麦芽寡糖生成酶等。中温-淀粉酶制剂和耐高温-淀粉酶制剂。磷酸缓冲液(pH=6.(1)根据酶催化的专一性，选择适宜的底物，并配制成一定浓度的底物溶液。酶活力：20000u/ml。n样品的稀释倍数（可通过反应时间和加入固定化酶的量来控制）。其中化学滴定、紫外、可见光比色法最为常用。可溶性淀粉溶液(20 g/L)：称取2.（优选）枯草杆菌摇瓶发酵生产淀粉酶酶制剂的发酵生产过程图解分光光度计、恒温水浴锅（控温精度0.2，酶活力定义：1ml酶液(1g酶粉)在60，pH6.1、菌种：枯草芽孢杆菌连续反应法：基于反应过程中光谱吸收、酸碱度等变化用仪器跟踪反应的进程、记录结果。用途：耐高温-淀粉酶具有极好的耐热性，能广泛应用于淀粉、酒精、啤酒、味精、酿造、纺织退浆等工业上。用四层纱布过滤，滤液待用。5 mL盐酸溶液和5.