最新01碱裂解法抽提大肠杆菌质粒课件.ppt
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1、01碱裂解法抽提大肠杆菌质粒碱裂解法抽提大肠杆菌质粒2.加加100l的溶液的溶液 I,使菌体充分悬浮,室,使菌体充分悬浮,室温静置温静置3min。注意点:必须充分混匀至看不见沉淀,注意点:必须充分混匀至看不见沉淀,可用移液器吹打或者用混匀器振荡。可用移液器吹打或者用混匀器振荡。3.加入加入200l溶液溶液II,温和上下颠倒,温和上下颠倒2-3次,次,溶液转变为澄清透明。溶液转变为澄清透明。注意点:不可剧烈振荡。注意点:不可剧烈振荡。4.加入加入150l溶液溶液III,上下颠倒混匀数次,上下颠倒混匀数次,静置静置2-3min。注意点:不可剧烈振荡,此时应出现白注意点:不可剧烈振荡,此时应出现白色
2、沉淀。色沉淀。5.12000 rpm离心离心5min。6.取上清,加等体积(取上清,加等体积(400l)的酚)的酚/氯仿氯仿/异戊醇,充分混匀,室温,异戊醇,充分混匀,室温,12000rpm离离心心5min。注意点:酚氯仿有腐蚀性,盖严离心管注意点:酚氯仿有腐蚀性,盖严离心管盖,避免接触酚氯仿,如接触立即用水盖,避免接触酚氯仿,如接触立即用水冲洗。冲洗。7.吸上层水相,再加吸上层水相,再加1ml(约约2.5倍体积)预倍体积)预冷的无水乙醇,混匀。冷的无水乙醇,混匀。注意点:一定避免吸到中间沉淀及下层注意点:一定避免吸到中间沉淀及下层酚氯仿。宁可损失一定上清。酚氯仿。宁可损失一定上清。8.4,12000rpm离心离心10min。9.弃上清,加入弃上清,加入0.5 ml 70乙醇,乙醇,4,12000 rpm离心离心5 min。10.弃上清,沉淀自然干燥弃上清,沉淀自然干燥10 min后,加后,加20l无菌水溶解。无菌水溶解。注意点:弃上清时尽量将酒精倾倒干净,注意点:弃上清时尽量将酒精倾倒干净,但注意不要将沉淀弃去。但注意不要将沉淀弃去。
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