金黄色葡萄球菌检验与计数PPT课件.ppt

1、金黄色葡萄球菌检验与计数有粉红色菌晕的菌落计数为金黄色葡萄球菌公式引用于ISO 6888-1:1999(E)革兰氏染色阳性，呈葡萄串状排列。第三法 PetrifilmTM测试片法一般认为引起人中毒的最小剂量是1.5%氯化钠肉汤：为葡萄球菌选择性增菌培养基，因金黄色葡萄球有耐受高盐的特性，因而能在此增菌液中生长，除某些嗜高盐的海洋菌外，大多数细菌都被增菌液中的高盐所抑制。金黄色葡萄球菌肠毒素：是金黄色葡萄球菌一种重要的致病物质。选择适宜稀释度的样品匀液，各取1mL分别加入纸片因此，两种试验所得结果可完全不同。金黄色葡萄球菌肠毒素：是金黄色葡萄球菌一种重要的致病物质。另一种是菌细胞释放于培养基中，

2、为游离凝固酶。耐盐性强，在含1015%的氯化钠培养基中仍能生长，可用于筛选菌种。Baird-Parker平板361培养18h24h或45h48h。接种Baird-Parker平板361培养4548h。血浆：血浆凝固酶试验可选用人血浆或兔血浆。耐热，经100煮沸30min不被破坏，也不受胰蛋白酶的影响。用于做血浆凝固酶菌落数玻片法只能检测结合凝固酶，而试管法可检测两种凝固酶。B:某一稀释度血浆凝固酶阳性的菌落数；金黄色葡萄球菌检验金黄色葡萄球菌检验样品的稀释样品的稀释增菌与分离培养增菌与分离培养金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌空白培养基空白培养基培养基培养基 用途用途 测试菌株测试菌株参考培养基参考

3、培养基控制方法控制方法判定判定标准标准特性反应特性反应Baird-Baird-ParkerParker生长率生长率金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌ATCC6538ATCC6538；金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌ATCC25923ATCC25923 TSA TSA 定量定量PR0.PR0.5 5黑色黑色/灰色菌灰色菌落带透明带落带透明带选择性选择性大肠埃希氏菌大肠埃希氏菌ATCC25922ATCC25922或或87398739 -定性定性全部全部抑制抑制特异性特异性表皮葡萄球菌表皮葡萄球菌ATCC12228ATCC12228 -定性定性-黑色黑色/灰色菌灰色菌落无透明带落无透明带分子量约为3000左右

4、。大肠埃希氏菌ATCC25922或8739不要用力振摇试管，以免凝块振碎。样品的接种、培养与典型菌落的确认报告在25g（mL）样品中检出或未检出金黄色葡萄球菌。2m，大小不一，平均直径约为0.增菌培养：吸取5mL上述样品匀液，接种于50mL 7.典型菌落计数与计算公式的应用黑色/灰色菌落无透明带血平板1824h，Baird-Parker平板1824h或4548h。结果如可疑，挑取营养琼脂小斜面的菌落到5mL BHI，361培养18h48h，重复实验。B:某一稀释度血浆凝固酶阳性的菌落数；根据对样品污染状况的估计，选择23个适宜稀释度的的样品匀液(液体样品可包括原液)，每个稀释度分别吸取1ml，

5、以0.根据对样品污染状况的估计，选择23个适宜稀释度的的样品匀液(液体样品可包括原液)，每个稀释度分别吸取1ml接种到胰酪大豆肉汤管，每稀释度接种3管。公式二的使用范围：平板菌落数均在20 cfu200 cfu之间。所有稀释度平板合计菌落数均在20200间：金黄色葡萄球菌PetrifilmTM确认反应片接种Baird-Parker平板金黄色葡萄球菌的生物学特性d：稀释因子(第一稀释度)。在血平板上可形成明显透明的溶血环。血浆凝固酶试验血浆凝固酶试验 结果报告结果报告 。金黄色葡萄球菌计数金黄色葡萄球菌计数样品的接种、培养与典型菌落的确认样品的接种、培养与典型菌落的确认因此，两种试验所得结果可完

6、全不同。检样25g(mL)+225mL稀释，匀质，10倍系列稀释否则为无致病力的菌株。金黄色葡萄球菌的菌落形态：呈金黄色，有时也呈白色，大而突起，圆形、不透明、表面光滑，周围有透明的溶血环。T=65450.d：稀释因子(第一稀释度)。T：两个稀释度平板上确认的金黄色葡萄球菌菌落总数之和；一般认为，血浆凝固阳性的金黄色葡萄球菌菌株有致病力。-尽可能避免1100MPN/g或ml的出现。有粉红色菌晕的菌落计数为金黄色葡萄球菌选择适宜稀释度的样品匀液，各取1mL分别加入纸片5%氯化钠肉汤：为葡萄球菌选择性增菌培养基，因金黄色葡萄球有耐受高盐的特性，因而能在此增菌液中生长，除某些嗜高盐的海洋菌外，大多数

7、细菌都被增菌液中的高盐所抑制。6%的阳性菌在1h内出现凝固。肠毒素是一种可溶性蛋白质，由单个无分枝的肽链组成。金黄色葡萄球菌的生物学特性检样25g(mL)225mL生理盐水或磷酸盐缓冲液用于做血浆凝固酶菌落数分子量约为3000左右。C:某一稀释度用于血浆凝固酶试验的菌落数；金黄色葡萄球菌PetrifilmTM确认反应片另一种是菌细胞释放于培养基中，为游离凝固酶。金黄色葡萄球菌可产生两种凝固酶：一种是与细胞壁结合的凝固酶，为结合凝固酶；除典型紫红色菌落外其他颜色的菌落革兰氏染色阳性，呈葡萄串状排列。选择适宜稀释度的样品匀液，各取1mL分别加入纸片同时以血浆凝固酶试验阳性和阴性葡萄球菌菌株的肉汤培

8、养物作为对照。因此，两种试验所得结果可完全不同。金黄色葡萄球菌ATCC259232m，大小不一，平均直径约为0.金黄色葡萄球菌ATCC25923否则为无致病力的菌株。易溶于水，难溶于有机溶剂。可产生金黄色色素，色素为脂溶性，不溶于水，故色素只局限于菌落内，不渗至培养中。5%氯化钠肉汤：为葡萄球菌选择性增菌培养基，因金黄色葡萄球有耐受高盐的特性，因而能在此增菌液中生长，除某些嗜高盐的海洋菌外，大多数细菌都被增菌液中的高盐所抑制。在陈旧培养物中，衰老的菌体常转为革兰氏阴性。接种Baird-Parker平板5%氯化钠肉汤中呈混浊生长，污染严重时在10%胰酪胨大豆肉汤内呈混浊生长。BHI肉汤和营养琼脂

9、小斜面PetrifilmTM测试片法适用于肉及其制品，奶制品等。T=AB/Cd结果报告：MPN/g或MPN/mL报告在25g（mL）样品中检出或未检出金黄色葡萄球菌。典型菌落计数与计算公式的应用典型菌落计数与计算公式的应用公式应用例一公式应用例一公式应用例二公式应用例二 第二法第二法 MPNMPN法法接种和培养接种和培养大豆肉汤大豆肉汤管管结果报告结果报告适用范围适用范围而其他细菌因不产生耐热DNA酶没有该反应。分子量约为3000左右。革兰氏染色阳性，呈葡萄串状排列。其他依次为D、C、B和E型。金黄色葡萄球菌在测试片上生成为暗紫红色的菌落，可以直接完成鉴定和计数。T=AB/CdT=65450.

10、选择适宜稀释度的样品匀液，各取1mL分别加入纸片革兰氏染色阳性，呈葡萄串状排列。5%氯化钠肉汤或10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤因此，两种试验所得结果可完全不同。易溶于水，难溶于有机溶剂。根据对样品污染状况的估计，选择23个适宜稀释度的的样品匀液(液体样品可包括原液)，每个稀释度分别吸取1ml，以0.将所有紫红色菌落计数为金黄色葡萄球菌耐盐性强，在含1015%的氯化钠培养基中仍能生长，可用于筛选菌种。将上述培养物，分别划线接种到Baird-Parker平板和血平板，血平板361培养18h24h。因此，两种试验所得结果可完全不同。液体样品：以无菌吸管吸取25mL样品至盛有225mL磷酸盐缓冲稀释液或生

11、理盐水的无菌锥形瓶(瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠)中，充分混匀，制成1:10的样品匀液。血浆凝固酶：与金黄色葡萄球菌的致病力密切相关。6%的阳性菌在1h内出现凝固。这两种酶均与金黄色葡萄球菌的致病性有关。玻片法只能检测结合凝固酶，而试管法可检测两种凝固酶。这两种酶均与金黄色葡萄球菌的致病性有关。影响血浆凝固酶试验的因素第三法PetrifilmTM测试片法增菌培养：吸取5mL上述样品匀液，接种于50mL 7.金黄色葡萄球菌PetrifilmTM确认反应片含有显色剂和耐热去氧核糖核酸(DNA)，金黄色葡萄球菌可生产耐热DNA酶，此酶与反应片上的显色剂反应，形成粉红色环。玻片法只能检测结合凝固酶，而

12、试管法可检测两种凝固酶。金黄色葡萄球菌计数同时以血浆凝固酶试验阳性和阴性葡萄球菌菌株的肉汤培养物作为对照。单位：cfu/g或者cfu/mL；金黄色葡萄球菌PetrifilmTM确认反应片含有显色剂和耐热去氧核糖核酸(DNA)，金黄色葡萄球菌可生产耐热DNA酶，此酶与反应片上的显色剂反应，形成粉红色环。T:样品中金黄色葡萄球菌落数；这两种酶均与金黄色葡萄球菌的致病性有关。T:样品中金黄色葡萄球菌落数；同时以血浆凝固酶试验阳性和阴性葡萄球菌菌株的肉汤培养物作为对照。而其他细菌因不产生耐热DNA酶没有该反应。5%氯化钠肉汤或10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤分子量约为3000左右。金黄色葡萄球菌ATCC25923金黄色葡萄球菌的生物学特性公式一：T=AB/Cd金黄色葡萄球菌的菌落形态：呈金黄色，有时也呈白色，大而突起，圆形、不透明、表面光滑，周围有透明的溶血环。谢谢观看！