诺华诊断核酸检测系统介绍课件.ppt

1、诺华诊断核酸检测系统介绍诺华诊断核酸检测系统介绍诺华诊断公司介绍核酸检测及检测方法简介-核酸检测原理介绍-TMA检测方法原理及过程简介核酸检测设备与试剂-全自动核酸检测分析系统TIGRIS-检测试剂ULTRIO TIGRIS检测流程-操作者工作流程-系统内部检测流程内 容诺华诊断（前chiron公司）专注诺华诊断是专门致力于预防输血传染性疾病的公司。从我们的产品设计，到客户服务支持，诺华诊断是专门致力于预防输血传染性疾病的公司。从我们的产品设计，到客户服务支持，100%专注于提高血液的安全水平，保障血液供应安全。专注于提高血液的安全水平，保障血液供应安全。创新作为作为HCV病毒的发现者（病毒的

2、发现者（1987年），诺华诊断一直注重提高创新研发能力，包括率先完成年），诺华诊断一直注重提高创新研发能力，包括率先完成HIV病毒的基因组序列测定，病毒的基因组序列测定，HCV病毒的发现及病毒检测方法的建立等。在核酸检测病毒的发现及病毒检测方法的建立等。在核酸检测（NAT）血液筛查领域，诺华诊断与合作伙伴共同开发了第一个获得美国）血液筛查领域，诺华诊断与合作伙伴共同开发了第一个获得美国FDA批准的可批准的可用于血液筛查的核酸检测试剂用于血液筛查的核酸检测试剂HIV-1/HCV，第一个包含，第一个包含HBV检测的多项联检试剂检测的多项联检试剂ULTRIO，第一台全自动核酸检测系统第一台全自动核酸

3、检测系统TIGRIS等。等。成功全球血液核酸检测领域的市场领导者全球血液核酸检测领域的市场领导者 美国市场占有率超过美国市场占有率超过90%；亚太区；亚太区10个进行核酸检测的国家和地区，有个进行核酸检测的国家和地区，有9个采用诺华产品。个采用诺华产品。黄病毒家族成员之一；单股正链RNA病毒自1999年以来，美国每年夏天都会经历西尼罗病毒的爆发；已报告的人类感染病例20000，死亡至少785人。2002年8月28日-2003 年3月1日，CDC 接到61例可能是经过输血传播WNV的报告。经保留血样的检测结合流行病学调查，21例被确认为经输血传播的WNV感染（共涉及到14名供血者）2003年6月

4、3日起，美国红十字会所属全部血液中心和美国其他采供血机构启动血液（包括成分）的WNV检测。至今尚没有特异有效的血清学检测方法。WNV病毒9个月后个月后October 200219June 2003FDA 要求要求开发用于西尼罗河病毒的核酸检测血开发用于西尼罗河病毒的核酸检测血液筛查方法和补充性试验方法液筛查方法和补充性试验方法PROCLEIX WNV 检测方法检测方法于于2003年年6月月19日上市日上市诺华诺华 实现实现25对血液筛查领域的专注以及创新能力，保证了我们可以快速应对对血液筛查领域的专注以及创新能力，保证了我们可以快速应对可能出现的对血液安全构成威胁的各种紧急疫情或病原体可能出现

5、的对血液安全构成威胁的各种紧急疫情或病原体西尼罗河病毒西尼罗河病毒诺华诊断（前chiron公司）检测平台及检测试剂+全自动核酸检测分析系统TIGRIS三项联检核酸检测试剂ULTRIO混样设备-TECAN可支持4，8，16人份样品的混样处理诺华诊断公司介绍核酸检测及检测方法简介-核酸检测原理介绍-TMA检测方法原理及过程简介内 容DNA/RNA核苷酸 A,G,C,T,or U碱基对C-G C-G A-T(DNA only)A-U(RNA only)A-T(DNA only)A-U(RNA only)核酸检测基础知识定义寡核苷酸:OligonucleotideOligonucleotideTarg

6、etTarget核酸检测基础知识定义探针:TargetTargetOligonucleotideOligonucleotide靶标捕获靶标捕获 扩增扩增检测检测检测过程简介检测过程诺华诊断公司介绍核酸检测及检测方法简介-核酸检测原理介绍-TMA检测方法原理及过程简介核酸检测设备与试剂-全自动核酸检测分析系统TIGRIS-检测试剂ULTRIO 内 容检测平台TIGRISPROCLEIX TIGRIS SystemPROCLEIX TIGRIS 系统是第一个，也是唯一一个真正实现全自动核酸检测的系统，可以完成：样品吸取核酸靶标捕获扩增检测结果报告产物灭活样品处理开始后，每个小时仅需要一分钟人工操作

7、，添加耗材，最大地提高了工作效率软件管理所有的系统操作，减少人为的操作和可能带来的误差全自动化将操作者从简单重复性操作中解放出来，而把精力放在对结果的分析上 一体化系统设计，轻松满足实验室空间要求封闭的系统环境，保证样品与结果的完整性尽可能少的操作者与样品的接 触，保护操作者安全确保仪器性能及检测结果的标 准化PROCLEIX TIGRIS System内置条码扫描，对样品及试剂进行全程跟踪自动液面探测及加样体积校正功能，确保样品及试剂的精确添加精密的机械系统，保证系统及结果的一致性和可靠性软件自动进行系统维护保养等操作PROCLEIX TIGRIS System可以同时处理单人份检测样品和小

8、混样样品同时使用多种条码格式（Code 128,Codabar,Code 39,Interleaved 2 of 5）减少对反应管死体积的要求兼容所有的工业标准尺寸的反应管（1275mm16100mm）PROCLEIX TIGRIS System初筛和确认实验可在同一平台上同时进行不间断装载样品和消耗品，灵活处理检测任务检测通量：1000个单人份检测/14小时。PROCLEIX TIGRIS SystemAssay Reagents(ARs)靶标捕获试剂(TCR)内标试剂扩增试剂 酶试剂 检测探针试剂鉴别探针试剂选择试剂Assay Fluids检测用液体检测用液体洗液油灭活缓冲液自检测液1自检

9、测液2系统液防腐剂一次性耗材一次性耗材MTUs(多联反应管)DiTis(一次性移液器吸头，1000ml)其他实验室消耗品其他实验室消耗品废物垃圾袋（套）标准品标准品&质控品质控品检测试剂和耗材检测试剂 ULTRIO第一个三合一的多重检测血液筛查试剂第一个三合一的多重检测血液筛查试剂基于独特的基于独特的TMA技术，在一个试管中同时检测技术，在一个试管中同时检测HIV-1,HBV,HCV所有反应步骤在同一管中进行，无需样品转移和传递所有反应步骤在同一管中进行，无需样品转移和传递内标分子监控整个反应过程，确保结果可靠内标分子监控整个反应过程，确保结果可靠初筛和鉴别试验在同一平台上同时进行初筛和鉴别试

10、验在同一平台上同时进行可以进行最大可以进行最大16人份混合样品的检测人份混合样品的检测检测的病毒包括所有亚型：检测的病毒包括所有亚型：HIV-1 Group M,Subtypes A,B,C,D,E,F,G HIV-1 Groups N and O HCV Genotypes 1,2,3,4,5,6 HBV Genotypes A,B,C,D,E,F,G必须同批号使用 纪录为成套试剂，并使用Assay ReagentsAssay Reagents靶标捕获试剂靶标捕获试剂TCRTCR扩增试剂（扩增试剂（A A）酶试剂（酶试剂（E E）检测探针试剂（检测探针试剂（P P）选择试剂（选择试剂（S S

11、）Assay Reagents靶标捕获试剂 (wTCR)去污剂病毒裂解捕获寡核苷酸与靶标核酸分子结合磁珠颗粒 固相磁力分离 内标全程监控系统检测性能引物核苷酸A,G,C,T,U辅酶因子扩增试剂(A)逆转录酶（RT）以单链RNA或DNA为模板，合成互补DNA RNAse H活性 RNA聚合酶（RP）以双链DNA为模板，转录合成单链RNA分子酶试剂(E)标记有Acridinium Ester(AE)分子的寡核苷酸不同的探针，序列分别与内标病毒扩增子互补检测探针试剂(P)降解游离探针分子上标记的 AE分子选择试剂(S)Assay Fluids检测用液体检测用液体通用试剂洗液洗液灭活液缓冲液灭活液缓冲

12、液 油油系统液防腐剂系统液防腐剂自检测液自检测液 1 1自检测液自检测液 2 2Assay FluidsULTRIO初筛和鉴别试剂初筛和鉴别试剂 分析灵敏度分析灵敏度 病毒类型病毒类型检测试剂检测试剂95%Limit of DetectionHIV-1 Ultrio28.79 c/mL(25.85 32.68)HIV-1dHIV-132.15 c/mL(28.74 36.70)HCVUltrio3.01 IU/mL(2.71 3.42)HCVdHCV3.17 IU/mL(2.85 3.59)HBVUltrio10.44 IU/mL(9.20-12.16)HBVdHBV8.52 IU/mL(7.

13、56-9.84)初筛和鉴别试验在同一平台进行，并且两种方法灵敏度相当，可以保证准确快速完成病毒种类的鉴别试验。诺华诊断公司介绍核酸检测及检测方法简介-核酸检测原理介绍-TMA检测方法原理及过程简介核酸检测设备与试剂-全自动核酸检测分析系统TIGRIS-检测试剂ULTRIO TIGRIS检测流程-操作者工作流程-系统内部检测流程内 容检测方案的选择方案1 单人份检测 提供最高的检测灵敏度（1，2，3，4）。高效的检测流程，与血清学同步进行，不影响血液的发放。方案2 混样检测（可进行4，8，16人份混合）节约检测成本。1.Reddy R.Presentation.Aug/Sep 2009 2.Ca

14、stro et al.,2006,Vox Sanguinis,91(Suppl.3),p77,P-113.Brojer et al.,2006,Hepatology,44:1666-1674 4.Zanetti et al.,2006,J Clin Virol,36 Suppl.1,S51-55检测方案的选择混样规模与灵敏度及窗口期缩短时间的关系病毒HIV-1HCVHBV复制周期（天）0.850.452.56新加坡：单人份检测“Failure of routine HIV-1 tests in a case involving transmission with preseroconversi

15、on blood components during the infectious window period”:Ling et al.,JAMA,vol.284 July 2000 1997年，发生一起HIV输血传播，一名献血者捐献的血液感染了两名受血者（血小板，红细胞）。测序结果证实输血传播。献血者抗体，抗原检测均为阴性。定量检测结果病毒水平5-39 copies/ml。NAT检测结果表明，该样品可以被单人份检测办法检出，而被混样检测漏掉。2000年，新加坡开始实行核酸检测，并且为单人份检测。南非（SANBS）：2005.10-2007.9，1,460,000份样品单人份检测Reddy R

16、.Presentation.Aug/Sep 2009HBVJ.P.Allain.ISBT Nagoya 2009多中心合作项目（COE）2009.4.16-2009.11.17，有四个血液中心参与，共检测样品40107份。全部进行单人份检测HBV NAT检出率1:1294（31/40107）其中，6例窗口期样品，病毒载量为13，25.6及12IU/mL （4例）。隐匿性乙肝（OBI）25例。全部病毒载量12IU/mL或不可测。混样设备-TECAN混样方式P16256样品管 16个混样管混样方式P8384样品管 48个混样管混样方式P4320样品管 80个混样管AR baySample bayF

17、luid drawerWaste drawerPROCLEIX TIGRIS System操作者流程仪器工作流程PROCLEIX TIGRIS System核酸检测工作流程核酸检测工作流程1:准备试剂PROCLEIX TIGRIS System操作者流程操作者流程0:实验室消毒准备试剂准备试剂试剂运输温度开瓶后储存温度 是否需要RPI处理?TCR2-8度2-8度(as wTCR)yes内标干冰冷冻N/Ano扩增试剂酶试剂检测探针 鉴别探针 干冰冷冻2-8度yes选择试剂常温常温only for Selection Recovery试剂准备孵育器（RPI）自动化，标准化试剂准备，使实验结果更可靠

18、PROCLEIX TIGRIS System File 1 冷冻试剂(1h45m)File 2 冷藏试剂(1h)File 3 过夜准备(8-16h)File 4 选择试剂的恢复(1h)2:装载耗材（MTU,DiTi）PROCLEIX TIGRIS System操作者流程操作者流程3:下层液体管理PROCLEIX TIGRIS System操作者流程操作者流程替换液体，扫描条码，清空垃圾袋替换液体，扫描条码，清空垃圾袋System FluidSystem FluidWash BWash BWash AWash AAuto Auto Detect 2Detect 2Oil Oil Bar Code

19、 Bar Code ScannerScannerTiplet WasteTiplet WasteDeactivatioDeactivation Fluidn FluidA AB BA AB BA AB BAuto Auto Detect 1Detect 1Liquid WasteLiquid Waste 1 1Liquid WasteLiquid Waste 2 2MTU WasteMTU Waste清空垃圾清空垃圾系统排空（Prime）所有的液体管道全部需要排空排空需要约排空需要约2020分钟分钟4:日保养PROCLEIX TIGRIS System操作者流程操作者流程记录实验室条件 检查系

20、统托盘，外表面，真空压力清洗DiTi Cone和试剂加样器管道5:创建工作列表PROCLEIX TIGRIS System操作者流程操作者流程6:装载试剂PROCLEIX TIGRIS System操作者流程操作者流程酶试剂酶试剂选择试剂选择试剂检测探针试剂检测探针试剂扩增试剂扩增试剂AR baywTCRPROCLEIX TIGRIS System操作者流程操作者流程7:装载样品PROCLEIX TIGRIS System操作者流程操作者流程每个样品架可以摆放20个样品管系统样品盘可以同时摆放9个样品架8:开始检测PROCLEIX TIGRIS System操作者流程操作者流程操作者确认样品开

21、始加样后，即可以离开操作者确认样品开始加样后，即可以离开TIGRIS 会提醒操作者结果输出的时间及需要用户返回的时间:Load MTUsLoad RacksLoad DiTisPROCLEIX TIGRIS System仪器工作流程仪器工作流程样品、试剂准备，仪器调试保养1 hrs一个熟练的操作者可以同时操作多达三台系统 样品处理开始后，每个小时仅需要一分钟人工操作，添加MTU系统连续上样，可以灵活添加新的样品系统预先通报操作者何时添加新的耗材及样品PROCLEIX TIGRIS System操作者流程操作者流程Logon admin*Tigris System Capacity Tigris

22、 System User Interface Tigris System User Interface样品样品wTCRwTCRMTUsMTUsPROCLEIX TIGRIS System仪器工作流程仪器工作流程结果报告Invalid results in blueInvalid results in blueReactive results in redReactive results in redNegative Negative CalibratorCalibratorHIV CalibratorHIV CalibratorHCV CalibratorHCV CalibratorHBV C

23、alibratorHBV Calibrator结果报告LIS文件样品自动灭活处理样品自动灭活处理PROCLEIX TIGRIS System仪器工作流程仪器工作流程,扩增扩增(TMA(TMA)AmpAmp,OilOil,Enzyme Enzyme AdditionAddition样品处理样品处理 Viral LysisViral Lysis Target Capture Target CaptureWashesWashes检测检测(HPA)(HPA)Hybridization Hybridization of Probeof ProbeSelectionSelection结果结果(DKADKA)Automatic RLU Automatic RLU ReadingReading加样加样wTCRwTCRCalibratorsCalibrators,Specimens,Specimens,ControlsControlsTIGRIS AUTOMATIONTIGRIS AUTOMATIONPROCLEIX TIGRIS系统介绍系统介绍Thank You!Question?C