高级仪器分析技术实验一标准课件.pptx
- 【下载声明】
1. 本站全部试题类文档,若标题没写含答案,则无答案;标题注明含答案的文档,主观题也可能无答案。请谨慎下单,一旦售出,不予退换。
2. 本站全部PPT文档均不含视频和音频,PPT中出现的音频或视频标识(或文字)仅表示流程,实际无音频或视频文件。请谨慎下单,一旦售出,不予退换。
3. 本页资料《高级仪器分析技术实验一标准课件.pptx》由用户(晟晟文业)主动上传,其收益全归该用户。163文库仅提供信息存储空间,仅对该用户上传内容的表现方式做保护处理,对上传内容本身不做任何修改或编辑。 若此文所含内容侵犯了您的版权或隐私,请立即通知163文库(点击联系客服),我们立即给予删除!
4. 请根据预览情况,自愿下载本文。本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。
5. 本站所有资源如无特殊说明,都需要本地电脑安装OFFICE2007及以上版本和PDF阅读器,压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 高级 仪器 分析 技术 实验 标准 课件
- 资源描述:
-
1、高级仪器分析技术实验一水的纯度测定及电导率仪的使用一、电导率仪的使用液体中的电流流动在固体导体中,电流是通过自由电子的移动而产生的。在液体导体中,电流是通过自由离子的移动而产生的。传输电流的离子物质被称为电解液。电解液的实质是自由离子。分子水解产生带正电的阳离子和带负电的阴离子。电导率p以数字表示溶液传导电流的能力。p在国际单位制中,电导率的单位称为西门子每米(S/m),其它单位有:mS/m,S/cm,S/cm。1S/m=1000mS/m =1000000S/m =10mS/cm =10000S/cmp电阻率的倒数为电导率,用希腊字母表示,=1/。除非特别指明,电导率的测量温度是标准温度(25
2、 C)物理意义p电导率是表示物质导电的性能。电导率越大则导电性能越强,反之越小。另外:电导是电阻的倒数,电导率是电阻率的倒数。p电导率是以数字表示溶液传导电流的能力。水的电导率与其所含无机酸、碱、盐的量有一定的关系,当它们的浓度较低时,电导率随着浓度的增大而增加,因此,该指标常用于推测水中离子的总浓度或含盐量。应用领域1.电厂-水处理;2.水厂和污水厂-废水处理;3.造纸-生产过程/废水处理;4.化工炼油-生产过程/废水处理;5.冶金和采矿-生产过程/废水处理;6.食品和饮料-生产过程/废水处理;7.医药行业-生物反应和发酵/废水处理;8.半导体-生产过程/废水处理/高纯水生产。测量原理-电导
3、式测量原理p将相互平行且距离是固定值L的两块极板(或圆柱电极),放到被测溶液中,在极板的两端加上一定的电势。然后通过电导仪测量极板间电导。p电导率的测量需要两方面信息。一个是溶液的电导G,另一个是溶液的几何参数S。电导可以通过电流、电压的测量得到。根据关系式S=G可以等到电导率的数值。测量原理 欧姆定律:I=U/R =U GG=电导 S=1/溶液电导率C mS/cm,S/cm:其中:d为极板间距,A为极板面积又电极常数 =d/A cm-1则 溶液电导率C只与溶液特性有关而与测量传感器几何尺寸无关。电导率仪p电导率测定仪是一款多量程仪器,能够满足从去离子水到海水等多种应用检测要求。仪器能够提供温
4、度补偿,并能设置温度系数,因此能够用于测量温度系数与水不同的液体样品。仪器测量原理电导率仪由振荡器、放大器和指示器等部分组成。电导率仪的工作原理如图所示。E为振荡器产生的交流电压,Rx为电导池的等效电阻,Rm为分压电阻,Em为Rm上的交流分压。由欧姆定律可知:Kcell为电导池常数,当E、Rm和Kcell均为常数时,由电导率的变化必将引起Em作相应变化,所以测量Em的大小,也就测得溶液电导率的数值。将Em送至交流放大器放大,再经过讯号整流,以获得推动表头的直流讯号输出,表头直读电导率。)()(cellxmmKmmRRERmRERE1.振荡器;2.电导池;3.放大器;4.指示器。影响因素p温度:
5、电导率与温度具有很大相关性。金属的电导率随着温度的增高而降低。半导体的电导率随着温度的增高而增高。在一段温度值域内,电导率可以被近似为与温度成正比。为了要比较物质在不同温度状况的电导率,必须设定一个共同的参考温度。电导率与温度的相关性,时常可以表达为,电导率对上温度线图的斜率。p掺杂程度:固态半导体的掺杂程度会造成电导率很大的变化。增加掺杂程度会造成高电导率。水溶液的电导率高低相依于其内含溶质盐的浓度,或其它会分解为电解质的化学杂质。水样本的电导率是测量水的含盐成分、含离子成分、含杂质成分等等的重要指标。水越纯净,电导率越低(电阻率越高)。水的电导率时常以电导系数来纪录;电导系数是水在 25C
6、 温度的电导率。p各向异性:有些物质会有异向性(anisotropic)的电导率,必需用 3 3 矩阵来表达(使用数学术语,第二阶张量,通常是对称的)。电导率测量为什么需要温度补偿?p 离子的迁移速度迁移速度与温度有关p 物质的离解程度离解程度与温度有关pT=ref(1+(T-Tref)pwith temperature coefficient:p=(T-ref)/ref(T-Tref)pref=conductivity at reference emperature(e.g.25 C)pT=conductivity atprocesstemperaturepTref=reference te
7、mperature(e.g.25 C)pT=process temperature电导率测量是与温度相关的。温度对电导率的影响程度依溶液的不同而不同,可以用下面的公式求得:Gt=Gtcal1+(T-Tcal)其中:Gt=某一温度(C)下的电导率 Gtcal=标准温度(C)下的电导率 Tcal=温度修正值 =标准温度(C)下溶液的温度系数。(DDS-11C型对被测液能作标准温度系数2%)缩短电泳时间,降低电压,增强凝胶浓度(3)供试品溶液制备 装好索氏提取装置,精密称取干燥茶叶粉末50 g,置于卷好的滤纸套筒中,放入索氏提取器,在圆底烧瓶中加入50 mL95%乙醇,水浴(95 C)加热,连续提取
8、约1.电导率仪的工作原理如图所示。自检结束,仪器自动寻找光源最大能量,查找完毕,仪器自动停留在420 nm处,并自动调100%T和0%T。泵头中没有液体,充满气泡其中:d为极板间距,A为极板面积DNA分子在碱性缓冲液中带负电荷,在外加电场作用下向正极泳动。电导率是表示物质导电的性能。5TBE琼脂糖凝胶电泳中溴酚蓝的速率约与长约300bp的线性双链DNA相同,而二甲苯氰FF约与长4kb的DNA相同。不同流动相之间转换时应注意溶剂的互溶性2)分子大小相近的DNA带不易分辨下表列出了常用溶液的值。控制电压保持在60-80V(15v/cm),电流在40mA以上。镀铂黑的电极,只能用化学方法清洗,用软刷
9、子机械清洗时会破坏镀在电极表面的镀层(铂黑)。为了要比较物质在不同温度状况的电导率,必须设定一个共同的参考温度。盛被测溶液的容器必须清洁,无离子玷污。简言之,浓度越大,分子孔径就越小,DNA迁移速率就越低,反之迁移速率就大。为保证测量精度,电极使用前应用于小0.核查所用电泳缓冲液是否有足够的缓冲能力又电极常数 =d/A cm-1 下表列出了常用溶液的值。要得到其他溶液的值,只要测量某个温度范围内的电导率,并以温度为纵轴绘出相应的电导率的变化曲线,与标准温度相对应的曲线点为该溶液的值。使用方法p开机:按下电源开关,预热30min。p测量:(1)调节“常数”补偿旋钮使显示值与电极上所标常数值一致。
10、(2)调节“温度”补偿旋钮至待测溶液实际温度值。(3)先用蒸馏水清洗电极,滤纸吸干,再用被测溶液清洗一次,把电极浸入被测溶液中,用玻璃棒搅拌溶液,使溶液均匀,读出溶液的电导率值。p在测量过程中,若显示屏首位为1(溢出),这表示被测溶液的电导率值超出量程范围,此时应将【RANGE】旋钮旋到高一档进行测量,或者将样品稀释一定倍数进行测量。p结束:用蒸馏水清洗电极;关机。电极常数选择电导率范围及对应电极常数推荐表校正方法p精确配置标准溶液;p调节标准溶液温度至参照标准温度(一般为25),即250.1。p按下式计算常数J:J=K/K测式中K为溶液标准电导率(查下表可得)p测量标准液电导率、计算并修改常
11、数数值。p测量标准液电导率用以验证。维护保养及注意事项p电极使用前必须放入在蒸馏水中浸泡数小时,经常使用的电极应放入(贮存)在蒸馏水中。p量程正确设置方法:置与溢出档的高一档量程进行测量,能在低一档量程内测量的,不放在高一档量程内测量。p为保证仪器的测量精度,必要时在仪器的使用前,用该仪器对电极常数进行重新标定。同时应定期进行电导电极常数标定。p盛被测溶液的容器必须清洁,无离子玷污。p在测量高纯水时应避免污染,正确选择电导电极常数并最好采用密封、流动的测量方式(否则电导率增加很快,因为空气中的CO2溶入水里变成碳酸根离子)。p仪器内置的温度系数为2%/,与此温度系数不符的溶液使用温度补偿将会有
12、误差。因此,进行高精度测量或检测高纯水时,应采用无温度补偿方式进行,然后查表,或者将被测溶液恒温在25,求其在25时的电导率值。p为保证测量精度,电极使用前应用于小0.5S/cm的去离子水(或蒸馏水)冲洗二次,然后用被测试样冲洗后方可测量。p出现异常情况,联系管理员。p测量时应采用配套使用的,不要采用其它型号的。p测量低电导值的溶液时,请先在超纯水中清晰并浸泡2个小时以上。p测量过程中,从甲溶液转到乙溶液时,先用蒸馏水清洗后,在用乙溶液清洗,不能用滤纸擦拭。p电极使用完毕后应该清洗干净,甩干后妥善保存(可浸泡在纯水中保存),避免碰撞损坏。p防止电极的插头和引线潮湿,否则将会出现测量误差。p电极
13、长期使用,电极常数会发生变化,影响测量准确性,此时应重新标定电极常数。电导电极的贮存与清洗p 电导电极的清洗 1.可以用含有洗涤剂的温水清洗电极上有机成分污垢,也可以用酒精清洗。2.钙、镁沉淀物最好用10柠檬酸。3.镀铂黑的电极,只能用化学方法清洗,用软刷子机械清洗时会破坏镀在电极表面的镀层(铂黑)。注意:某些化学方法清洗可能在生活破坏被轻度污染的铂黑层。4.光亮的铂电极,可以用软刷子机械清洗。但在电极表面不可以产生裂痕,绝对不可以使用螺丝起子之类硬物清理电极表面,甚至在用软刷子清洗时也要特别注意。p电导电极的贮存 电极(长期不用)应贮存在干燥的地方。电极使用前必须放入(贮存)在蒸馏水中数小时
14、,经常使用的电极可以放入(贮存)在蒸馏水中。二、水的纯度测定p实验目的1.理解电导率仪的工作原理,掌握其使用方法。2.测定各种水体的纯度。1)小DNA带走出凝胶下表列出了常用溶液的值。注意比色皿内的溶液面高度不应低于25毫米,大约2.电导率仪的工作原理如图所示。含 5mM p-甲苯亚磺酸和100 EDTA电极使用前必须放入在蒸馏水中浸泡数小时,经常使用的电极应放入(贮存)在蒸馏水中。温度:电导率与温度具有很大相关性。注意:用于电泳的缓冲液和用于制胶的缓冲液必须是相同的。测量过程中,从甲溶液转到乙溶液时,先用蒸馏水清洗后,在用乙溶液清洗,不能用滤纸擦拭。电极使用完毕后应该清洗干净,甩干后妥善保存
15、(可浸泡在纯水中保存),避免碰撞损坏。4 柱温箱微波炉中加热时间不宜过长。=10mS/cm自检结束,仪器自动寻找光源最大能量,查找完毕,仪器自动停留在420 nm处,并自动调100%T和0%T。被测试的样品中不能有气泡和漂浮物。2倍,这一特性与琼脂糖凝胶的浓度无关;Tris-磷酸盐缓冲液(TPE)测量标准液电导率、计算并修改常数数值。长期不用时,清洗干净后,使用柱子说明书中指明的溶剂保存。做好平常的保养可以延长仪器的使用寿命p实验原理 水的纯度取决于水中可溶性电解质的含量。由于一般水中含有极其微量的Na+、K+、Ca2+、Mg2+、CO32、Cl、SO42等多种离子,所以,具有导电能力。离子浓
16、度愈大,导电能力越强,电导率越大;反之,水的纯度越高,离子浓度愈小,电导率越小。因此通过测定电导率可以鉴定水的纯度。p实验数据测量25、40、60的5种水样的电导率并记录。p思考与讨论1.温度对电导率测定值有何影响?为什么?2.各种水样的纯度如何?应该如何选用?高级仪器分析技术实验二铁的分光光度计法测定一、722型分光光度计的使用p1仪器性能的检查 (1)预热:接通电源,让仪器预热至少二十分钟,使仪器进入热稳定工作状态。(2)调零:仪器接通电源后,即进入自检状态。显示器实时显示仪器的自检状态。当仪器发生故障时,显示器会自动显示故障位置。自检结束,仪器自动寻找光源最大能量,查找完毕,仪器自动停留
17、在420 nm处,并自动调100%T和0%T。显示器上显示420 nm和“100.0%T”。仪器此时进入测试状态。p2使用方法 (1)按“方式键”(Mode)将测试方式设置为吸光度方式。(2)调节波长设置想要的分析波长420nm。(3)将参比溶液和被测溶液分别倒入比色皿中。注意比色皿内的溶液面高度不应低于25毫米,大约2.5毫升;被测试的样品中不能有气泡和漂浮物。(4)打开样品室盖,将盛有溶液的比色皿分别插入比色皿槽中,盖上样品室盖。注意:一般情况下,参比样品放在样品架的第一个槽位中;仪器所附的比色皿,其透视率是经过测试匹配的,未经匹配处理的比色皿将影响样品的测试精度;比色皿的透光部分表面不能
18、有指印和溶液痕迹。(5)将参比溶液推入光路中,按“100%T”键调整零吸光度。(6)将被测溶液推或拉入光路中,此时,显示器上所显示的是被测样品的吸光度数值。二、磺基水杨酸显色法测定铁p实验目的1.掌握用磺基水杨酸显色法测定铁的原理和方法。2.掌握722型分光光度计的使用方法。p实验原理1.伯朗比尔定律t0lgIIdcA 是摩尔吸光系数,其大小与入射光波长、溶液的性质、温度等有关。若入射光波长、比色皿(溶液)的厚度d一定时,吸光度只与溶液的浓度c成正比。电源及地线问题流动相各溶剂不相溶或混和不均匀掌握722型分光光度计的使用方法。一般迁移速率超螺旋环状线状DNA单链开环。将对测定稳定常数有何影响
19、?流动相(pH值、均匀度、气泡等)1)小DNA带走出凝胶出现异常情况,联系管理员。在 pH911.因此通过测定电导率可以鉴定水的纯度。(一)有机酸分析系统流程图7 混合室咖啡因(C8H10N4O2)又名咖啡碱,属甲基黄嘌呤化合物,具有提神醒脑等刺激中枢神经的作用,可溶于水、醇、氯仿、二氯甲烷等溶剂。二、磺基水杨酸显色法测定铁7 混合室水厂和污水厂-废水处理;首先要确认是色谱柱堵塞还是系统堵塞(2)调零:仪器接通电源后,即进入自检状态。购买新柱后一定要仔细阅读说明书,确认柱的使用条件以及清洗再生步骤,按照说明书条件测试色谱柱柱效,记录使用压力4)DNA链巨大,常规凝胶电泳不合适 本实验选用磺基水
20、杨酸(简写为H3R)与Fe3+形成的配位平衡体系,H3R和Fe3+等试剂与配合物的吸收光谱不重合,因此可用分光光度法测定。因溶液pH的不同,形成配合物的组成也不同。2.等摩尔系列法求配合物组成及稳定常数 在 pH911.5 的 NH3H2O-NH4Cl 溶液中,Fe3+与磺基水杨酸反应生成三磺基水杨酸铁黄色配合物。该配合物很稳定,试剂用量及溶液酸度略有改变都无影响。Ca2+、Mg2+、Al3+等与磺基水杨酸能生成无色配合物,在显色剂过量时,不干扰测定。F-、NO3-、PO43-等离子对测定无影响。Cu2+、Co2+、Ni2+、Cr3+等离子大量存在时干扰测定。由于Fe2+在碱性溶液中易被氧化,
21、所以。本法所测定的铁实际上是溶液中铁的总含量。磺基水杨酸铁配合物在碱性溶液中的最大吸收波长为420nm,故在此波长下测量吸光度。p实验原理p1.工作曲线的绘制在6 只 50 mL 容量瓶中,用吸量管分别加入0.00、1.00、2.00、3.00、4.00、5.00mL浓度为0.1 mg/L的铁盐标准溶液,各加 4 mL 10%NH4Cl溶液和2 mL 20%磺基水杨酸溶液,滴加氨水(1+1)直到溶液变黄色后,再多加1mL,加水稀释至刻度,摇匀。(用NH3-NH4Cl作为缓冲溶液)注意:A.在用磺基水杨酸铁测定Fe3+时,在pH=10 时形成的配合物稳定,且不容易受干扰,所以在pH9-11.5下
22、测定黄色3:1配位比的产物,pH对实验成败很关键,用NH3-NH4Cl作为缓冲溶液。B.用移液管移取试剂,注意顺序,并且不能混用移液管。C.比色皿的使用中,每改变一次试液浓度,比色皿都要洗干净。应该按照浓度从低到高测量,以减少影响。用分光光度计于420 nm波长下,以试剂空白作参比溶液,调节透光度为100%,测出各标准溶液的吸光度。以吸光度为纵坐标,铁含量为横坐标,绘制工作曲线。表1 作工作曲线所配的系列溶液p2.试液中铁含量的测定用吸量管加待测试液 5.00mL于 50mL容量瓶中,在与标准溶液相同条件,按上述方法显色,测量其吸光度。从工作曲线中查得相应的铁含量,计算原试液中铁的含量。注意:
23、待测溶液一定要在工作曲线线形范围内,如果浓度超出直线的线形范围,则有可能偏离朗伯-比耳定律是光吸收的基本定律,就不能使用吸光光度法测定。p实验结果表2 标准曲线法数据记录及结果 根据记录结果以吸光度为纵坐标,铁含量为横坐标,绘制工作曲线,从工作曲线上查出原试液中铁的含量()mg/L。1.标准溶液是否要准确移取?2.加NH4Cl的作用是什么?3.为什么要用氨水滴至溶液呈黄色?4.实验中若(1)每个溶液的浓度都不一样(2)温度有较大的变化(3)比色皿的透光面不洁净将对测定稳定常数有何影响?p思考与讨论高级仪器分析技术实验三琼脂糖凝胶电泳实验一、琼脂糖凝胶电泳原理p什么是电泳技术?电泳法,是指带电荷
24、的供试品(蛋白质、核苷酸等)在惰性支持介质(如纸、醋酸纤维素、琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶等)中,于电场的作用下,向其对应的电极方向按各自的速度进行泳动,使组分分离成狭窄的区带,用适宜的检测方法记录其电泳区带图谱或计算其百分含量的方法。电泳技术的分类p电泳法可分为自由电泳(无支持体)及区带电泳(有支持体)两大类。p自由电泳包括 Tise-leas式微量电泳、显微电泳、等电聚焦电泳、等速电泳及密度梯度电泳。p区带电泳则包a括滤纸电泳(常压及高压)、薄层电泳(薄膜及薄板)、醋酸纤维薄膜电泳、非凝胶性支持体区带电泳(支持体有:淀粉,纤维素粉,玻璃粉,硅胶等)、凝胶支持体区带电泳(琼脂、琼脂糖、淀粉胶、
25、聚丙烯酰胺凝胶)等。做琼脂糖凝胶电泳的目的1.检测所提取的DNA时2.检验PCR产物3.观察限制性内切酶的切割结果4.切胶回收纯化某个片段琼脂糖凝胶电泳:实验原理p琼脂糖是由琼脂分离制备的链状多糖。其结构单元是 D-半乳糖和3.6-脱水-L-半乳糖。许多琼脂糖链依氢键及其它力的作用使其互相盘绕形成绳状琼脂糖束,构成大网孔型凝胶。其本身不带有电荷。因此该凝胶适合于免疫复合物、核酸与核蛋白的分离、鉴定及纯化。pDNA分子在碱性缓冲液中带负电荷,在外加电场作用下向正极泳动。pDNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时,有电荷效应与分子筛效应。不同DNA的分子量大小及构型不同,电泳时的泳动率就不同,从而分出不同的
展开阅读全文