第六章-组织培养灭菌及接种移栽操作技术课件.ppt

1、第六章第六章 操作技术操作技术教学目标：教学目标：熟练掌握组织培养相关的灭菌消毒方熟练掌握组织培养相关的灭菌消毒方法和无菌操作技术；掌握培养和驯化法和无菌操作技术；掌握培养和驯化移栽的方法步骤；理解灭菌和消毒的移栽的方法步骤；理解灭菌和消毒的区别。区别。第六章第六章 操作技术操作技术教学内容：教学内容：培养基的制备技术培养基的制备技术 灭菌技术灭菌技术 接种材料的选择与预处理接种材料的选择与预处理 接种接种 培养培养 移栽驯化移栽驯化第一节培养基制备技术第一节培养基制备技术1.1.母液配制与保存母液配制与保存2.2.培养基的配制培养基的配制确定培养基确定培养基称量称量计算计算溶解溶解分装分装定

2、容定容贴标签贴标签保存保存一、母液制备流程图一、母液制备流程图母液 mg/L 20 x 称量1、NH4NO3 1650 33000 33g2、KNO3 1900 38000 38g 3、CaCL22H2O 440 8800 8.8g 4、MgSO47H2O 370 7400 7.4g 5、KH2PO4 170 3400 3.4g标签标签 将1、2、4、5、按称量称好放入烧杯甲溶解；将3、称后放入烧杯乙溶解；再混合定溶至1升溶液，放入试剂瓶中备用。烧杯甲烧杯甲烧杯乙烧杯乙试剂瓶试剂瓶MS大量元素大量元素 50ml/L 2005.4.5标签标签培养基母液配制（以MS为例）：mg/L 1000 x

3、称量1、KI 0.83 830 0.832、H3BO3 6.2 6200 6.23、MnSO4.4H2O 22.3 22300 22.34、ZnSO4.7H2O 8.6 8600 8.65、Na2MoO4.H2O 0.25 250 0.256、CuSO4.5H2O 0.025 25 0.0257、CoCL2.6H2O 0.025 25 0.025 标签标签烧杯试剂瓶 以上七项按称量称重，放烧杯中溶解后定溶至1升，放试剂瓶中备用。MS微量元素 1ml/L 2005.4.5标签标签母液 Mg/L 200 x 称量1、FeSO4.7H2O 27.8 5560 5.56g2、Na2.EDTA.2H2O

4、 37.3 7460 7.46g 将1、2、分别称重后，分别溶解、再混和定溶至1升，放试剂瓶中备用。标签标签烧杯甲烧杯乙试剂瓶MS铁盐5ml/L2005.4.5标签标签母液（铁盐）mg/L 1000 x 称量1、烟酸 0.5 500 0.5g2、B6 0.5 500 0.5g3、B1 0.1 100 0.1g4、甘氨酸 2 2000 2g 上列四种按称量称重后溶解，定溶至1升，放试剂瓶中备用。标签标签烧杯试剂瓶MS有机元素 1ml/L 2005.4.5标签标签母液母液（肌醇）mg/L 200 x 称量 肌醇 100 20000 20g 将肌醇按称量称重后，放烧杯中溶解定溶至1升，置试剂瓶中备用

5、。标签标签烧杯试剂瓶MS肌醇5ml/L2005.4.5标签标签植物激素母液配制：常用植物激素有生长素、细胞分裂素、赤霉素等。一般按1mg/1ml浓度配制；使用时1ml/L即为1ppm。生长素类：IAA、NAA、2,4-D、IBA 生长素类配制时，先按要求浓度称好药品置小烧杯中，用 12ml0.1NNaOH溶解，再加蒸馏水定溶至所需浓度，再置滴瓶中备用。生长素1mg/ml2005.4.5滴瓶标签标签 细胞分裂素类：6-BA、KT、ZT配制细胞分裂素时宜先用0.5N盐酸溶解再加蒸馏水至所需浓度。赤霉素在水中分解，可溶于甲醇、乙醇中。GA3在水中不稳定，用95乙醇培成母液备用。标签标签烧杯移母液移母

6、液 调调PH值值 培养基熬制培养基熬制 灭菌灭菌称取蔗糖、琼脂称取蔗糖、琼脂 扎口扎口 定容定容 分装分装 二次定容二次定容接接 种种确定配方确定配方二、培养基制备二、培养基制备移母液移母液 调调PH值值 培养基熬制培养基熬制 灭菌灭菌称取蔗糖、琼脂称取蔗糖、琼脂 扎口扎口 定容定容 分装分装 二次定容二次定容接接 种种确定配方确定配方4.培养基制备培养基制备培养基配制（以1升培养基为例）：母液 母液 母液母液母液分装筒1、将母液、按标签取量加进分装筒。2、取琼脂710g，放钢精锅中，煮溶后加蔗糖30g,溶解后倒入分装筒定溶至1升。3、按需要加植物激素后，用1NNaOH或盐酸调pH5.8,分装

7、。瓶口塞上棉塞并用牛皮纸包扎好，放入高压灭菌锅中灭菌。钢精锅琼脂、蔗糖4、在分装容器，灭菌后的培养基可在室温下储存（最适宜的温度为10），并在2周内用完。第二节第二节 灭菌技术灭菌技术1.1.灭菌与消毒的区别灭菌与消毒的区别2.2.环境灭菌环境灭菌3.3.培养基的灭菌培养基的灭菌4.4.培养用品及器具等的消毒灭菌培养用品及器具等的消毒灭菌5.5.接种材料的消毒灭菌接种材料的消毒灭菌 消毒：消毒：杀死、消除或抑制杀死、消除或抑制部分部分微生微生物，使之不发生作用。物，使之不发生作用。灭菌：灭菌：用理化方法杀死物体表面和孔用理化方法杀死物体表面和孔隙内隙内一切一切微生物或生物体。微生物或生物体。思

8、考：灭菌和消毒有何区别？思考：灭菌和消毒有何区别？1.1.灭菌与消毒的区别灭菌与消毒的区别2.2.环境灭菌环境灭菌培养室灭菌培养室灭菌接种室灭菌接种室灭菌接种室灭菌方法接种室灭菌方法接种台喷雾消毒：接种台喷雾消毒：70%70%酒精；酒精；0.1%0.1%新洁尔灭。新洁尔灭。紫外灯照射：紫外灯照射：波长波长260nm260nm，距离小于，距离小于1.2m1.2m，20-30min20-30min。臭氧灭菌机：臭氧灭菌机：1-2h1-2h。熏蒸灭菌：熏蒸灭菌：5-8ml/m5-8ml/m3 3甲醛甲醛+5g/m+5g/m3 3 高锰酸钾；冰醋酸高锰酸钾；冰醋酸加热。加热。培养室灭菌方法培养室灭菌方

9、法 新建培养室用前一定要彻底熏蒸新建培养室用前一定要彻底熏蒸1 1次。次。方法与接种室同。方法与接种室同。隔隔2-5d2-5d用洗衣粉水或用洗衣粉水或3%3%来苏水拖地来苏水拖地1 1次，次，用用0.1-1.0%0.1-1.0%高锰酸钾液擦架高锰酸钾液擦架1 1次。次。3.3.培养基灭菌培养基灭菌 高压湿热灭菌高压湿热灭菌 某些激素某些激素（IAA）、维生素、氨基酸维生素、氨基酸（谷氨酰胺）采用过滤采用过滤灭菌灭菌1.1.外桶外桶 2.2.锅盖锅盖 3.3.安全阀安全阀 4.4.排气阀排气阀 5.5.气压表气压表 6.6.内桶内桶 7.7.排气软管排气软管 8.8.支架支架 手提式高压湿热灭菌

10、锅手提式高压湿热灭菌锅手提式高压湿热灭菌方法手提式高压湿热灭菌方法装锅装锅加水加水封盖封盖通电加热通电加热排冷空气排冷空气升温保压升温保压断电降压断电降压出锅冷却出锅冷却 自动高压湿热灭菌锅自动高压湿热灭菌锅电源电源水位指示灯水位指示灯温度、压力显示窗温度、压力显示窗温度压力设置钮温度压力设置钮压力表压力表放汽阀放汽阀装锅装锅加水加水封外盖封外盖升温排冷气升温排冷气升温保压升温保压降压降压出锅冷却出锅冷却 自动高压湿热灭菌方法自动高压湿热灭菌方法通电通电设置参数设置参数封内盖封内盖培养基高压灭菌所必需的最少时间培养基高压灭菌所必需的最少时间 容器体积容器体积(mL)121灭菌所需最少时间灭菌所

11、需最少时间(min)20-5015 75-150 20250-500 25100030一般为：120，1.1公斤/厘米2的高压下灭菌1520分钟。过滤灭菌过滤灭菌 滤膜滤膜0.45um0.45um以下以下1.1.过滤器先灭菌，灭菌过滤器先灭菌，灭菌温度不超过温度不超过121121。2.2.溶液先进行初滤溶液先进行初滤(滤膜滤膜0.65um)0.65um)4.4.培养用品及器具等的灭菌消培养用品及器具等的灭菌消毒方法毒方法玻璃器皿灭菌玻璃器皿灭菌 接种工具灭菌接种工具灭菌 实验服、口罩、滤纸灭菌实验服、口罩、滤纸灭菌 物体表面灭菌物体表面灭菌玻璃器皿及量具的清洗消毒玻璃器皿及量具的清洗消毒 玻璃

12、器皿灭菌玻璃器皿灭菌 干热灭菌：干热灭菌：160-180,1.5-2.0h 160-180,1.5-2.0h 湿热灭菌：湿热灭菌：121,20-40min 121,20-40min 接种前用酒精棉球擦试消毒，并在接种前用酒精棉球擦试消毒，并在酒精灯火焰上灼烧灭菌。酒精灯火焰上灼烧灭菌。接种工具灭菌接种工具灭菌 用前干热灭菌：用前干热灭菌：160-180,1.5-2.0h 160-180,1.5-2.0h 用前湿热灭菌：用前湿热灭菌：121,20-30min 121,20-30min 接种前用酒精棉球擦试，浸入接种前用酒精棉球擦试，浸入95%95%酒精酒精液中，并灼烧灭菌。液中，并灼烧灭菌。湿热

13、灭菌：湿热灭菌：121,20-30min 121,20-30min 实验服灭菌后置于缓冲间或密封好。实验服灭菌后置于缓冲间或密封好。实验服、口罩、滤纸灭菌实验服、口罩、滤纸灭菌 物体表面灭菌物体表面灭菌灭菌方式：灭菌方式：喷雾、涂抹杀菌喷雾、涂抹杀菌 消毒剂：消毒剂：70%70%酒精；酒精；1-2%1-2%来苏水；来苏水；0.25-1%0.25-1%新洁尔灭；洗衣粉；吐温新洁尔灭；洗衣粉；吐温-80-80应用：应用：桌面、墙面、双手、材料表面桌面、墙面、双手、材料表面玻璃器皿及量具的清洗与消毒玻璃器皿及量具的清洗与消毒1.洗涤场所及用具：洗涤场所及用具：场所：场所：洗涤室洗涤室 用品：用品：水

14、池水池 塑料盆塑料盆 塑料桶、三孔塑料桶、三孔鹅颈式水龙头，下水用过滤网，各种鹅颈式水龙头，下水用过滤网，各种规格刷子。规格刷子。2.洗涤液：洗涤液：洗衣粉洗衣粉 洗洁精洗洁精 高锰酸钾高锰酸钾 稀盐酸稀盐酸 重铬酸钾重铬酸钾+浓硫酸混合液浓硫酸混合液 3.3.洗涤方法：洗涤方法：新购玻璃器皿清洗方法：新购玻璃器皿清洗方法：先用先用1%1%稀盐酸洗后用洗衣粉清洗，稀盐酸洗后用洗衣粉清洗，用自来水或蒸馏水冲洗。用自来水或蒸馏水冲洗。用重铬酸钾用重铬酸钾+浓硫酸洗液浸泡浓硫酸洗液浸泡4h4h后，后，自来水彻底冲洗。自来水彻底冲洗。3.洗涤方法：洗涤方法：用过的玻璃器皿清洗：用过的玻璃器皿清洗：流水

15、冲洗后，泡入洗衣粉水中刷洗，流水冲洗后，泡入洗衣粉水中刷洗，后用自来水冲洗或在清水中漂洗。后用自来水冲洗或在清水中漂洗。污染瓶清洗：污染瓶清洗：用用0.1%kmno4液洗涤或高压灭菌后在液洗涤或高压灭菌后在洗衣粉中浸泡，再用自来水冲洗。洗衣粉中浸泡，再用自来水冲洗。5.注意事项：注意事项：瓶口要清洗干净瓶口要清洗干净 培养瓶上的标记要擦净培养瓶上的标记要擦净 冬季，用热水溶解洗衣粉后再洗冬季，用热水溶解洗衣粉后再洗 洗过玻璃器皿要沥干或烘干洗过玻璃器皿要沥干或烘干 移液管之类的量具和计量仪器不宜烘烤移液管之类的量具和计量仪器不宜烘烤 4.洗涤标准：洗涤标准：透明锃亮，内外壁水膜均一，不挂透明锃

16、亮，内外壁水膜均一，不挂 水水珠。珠。移液管清洗：移液管清洗：在溶化的洗衣粉水中吸洗，再用流水在溶化的洗衣粉水中吸洗，再用流水冲洗或用冲洗或用95%酒精吸弃数次。洗净后酒精吸弃数次。洗净后倒放，垂直晾干。倒放，垂直晾干。为了保证组培实验成功，接种材料接种为了保证组培实验成功，接种材料接种前必需消毒。因为植物材料表面常常带有各前必需消毒。因为植物材料表面常常带有各种微生物，一旦带入，就会迅速滋生，使实种微生物，一旦带入，就会迅速滋生，使实验前功尽弃。验前功尽弃。消毒的原则：杀死微生物而不伤及材料。消毒的原则：杀死微生物而不伤及材料。污染的种类：细菌性污染污染的种类：细菌性污染 真菌性污染真菌性污

17、染5.5.接种材料的消毒灭菌接种材料的消毒灭菌消毒灭菌步骤消毒灭菌步骤化学灭菌化学灭菌 常用化学灭菌剂常用化学灭菌剂常用灭菌剂的使用浓度与效果比较常用灭菌剂的使用浓度与效果比较灭菌剂灭菌剂 使用浓度使用浓度 持续时间持续时间 去除难易去除难易 效效 果果 次氯酸钙次氯酸钙 9-10%5-30min 易易 很好很好 次氯酸钠次氯酸钠 2%5-30min 易易 很好很好 氯化汞氯化汞 0.1-1%5-8min 较难较难 最好最好抗菌素抗菌素 4-50mg/L 30-60min 中中 较好较好 接种材料修剪与表面消毒灭菌接种材料修剪与表面消毒灭菌外植体清洗（三次）：用流水冲洗或洗衣粉漂洗；流水冲洗或

18、洗衣粉漂洗；用化学灭菌剂浸润灭菌，最好加吐温用化学灭菌剂浸润灭菌，最好加吐温-80-80等等表面活性剂表面活性剂(灭菌液的灭菌液的0.5%)0.5%)，一般，一般70%70%酒精酒精5 530S30S，0.1-1%0.1-1%升汞升汞5-8 min5-8 min；无菌水冲洗无菌水冲洗3-103-10次。次。注：灭菌液要浸没材料注：灭菌液要浸没材料接种材料表面消毒灭菌步骤接种材料表面消毒灭菌步骤:1.外植体的选择外植体的选择(1)(1)根据培养目的选择根据培养目的选择(2)(2)考虑种质、取材大小、时期和材料考虑种质、取材大小、时期和材料的生理状态，具有代表性的生理状态，具有代表性第三节第三节

19、外植体的选择与预处理外植体的选择与预处理 幼嫩幼嫩茎尖茎尖营养芽营养芽选择优良的种质选择优良的种质选择健壮无病虫害的植株选择健壮无病虫害的植株选择最适时期选择最适时期选择适宜大小选择适宜大小 2.接种材料预处理接种材料预处理(1)(1)接种材料预培养接种材料预培养(2)(2)就地套袋就地套袋(3)(3)接种材料修整接种材料修整与冲洗与冲洗 接种材料修整与冲洗接种材料修整与冲洗第四节第四节 接种接种接种程序接种程序无菌操作规程无菌操作规程接种程序（广义）接种程序（广义）7.外植外植 体体 移入培养基移入培养基1.培养材料选择培养材料选择2.接种材料预处理接种材料预处理3.接种环境灭菌接种环境灭菌

20、4.培养基制备与工培养基制备与工具灭菌具灭菌5.材料表面灭菌材料表面灭菌6.外植体切割外植体切割 5.材料表面灭菌材料表面灭菌1.叶片叶片0.5cm0.5cm2.微茎尖微茎尖0.2-0.5mm3.带节茎段带节茎段0.5-1.0cm 6.外植体切割外植体切割4.芽丛分离芽丛分离7.7.外植体接入培养基外植体接入培养基 接种方法接种方法D关紫外灯，开日光灯及风机，擦双手及台面关紫外灯，开日光灯及风机，擦双手及台面E擦拭接种工具并反复灼烧，擦拭接种工具并反复灼烧，烘烤培养皿烘烤培养皿 F接种完，清理台面并标识接种完，清理台面并标识B接种前接种前20min打开紫外灯打开紫外灯C接种员洗手，在缓冲间换鞋

21、、穿好实验服接种员洗手，在缓冲间换鞋、穿好实验服A接种前接种前4h接种室灭菌接种室灭菌无菌操作规程无菌操作规程复习思考题：复习思考题：1.1.比较灭菌和消毒的区别比较灭菌和消毒的区别 2.2.理解无菌操作对植物组培的重要意义理解无菌操作对植物组培的重要意义 3.3.组培各环节灭菌可以采用哪些灭菌方法？组培各环节灭菌可以采用哪些灭菌方法？4.4.保谓接种和无菌操作规程？说明组培接种保谓接种和无菌操作规程？说明组培接种程序是怎样的？程序是怎样的？案例式讨论案例式讨论总结总结复习提问：复习提问：1.1.概括说明接种材料表面灭菌的一般概括说明接种材料表面灭菌的一般步骤？步骤？2.2.接种室和培养室灭菌

22、方法有哪些？接种室和培养室灭菌方法有哪些？3.3.组培无菌操作有何要求？组培无菌操作有何要求？1.培养含义培养含义 2.培养方法培养方法 3.培养步骤培养步骤 4.外植体成苗途径外植体成苗途径第五节第五节 培养培养将植物材料经培养，将植物材料经培养，使之生长，分裂分化使之生长，分裂分化形成愈伤组织、芽、形成愈伤组织、芽、胚状体、原球茎胚状体、原球茎,进一进一步分化成再生植株或步分化成再生植株或产生代谢产物的过程。产生代谢产物的过程。一、培养含义一、培养含义通气性较好，便于通气性较好，便于操作，但营养分布操作，但营养分布不均，生长发育不不均，生长发育不一致。一致。营养分布均匀，生营养分布均匀，生

23、长发育整齐一致，长发育整齐一致，但通气性差。但通气性差。二培养方法二培养方法 培养步骤培养步骤初代培养初代培养继代培养继代培养生根培养生根培养三、培养步骤三、培养步骤一一.初代培养初代培养目的目的：获得无菌材料和无性繁殖系。获得无菌材料和无性繁殖系。无性繁殖系包括：芽丛、不定芽、无性繁殖系包括：芽丛、不定芽、胚状体、原球茎等。胚状体、原球茎等。培养基培养基：诱导或分化培养基。诱导或分化培养基。培养基中培养基中CTKCTK多，多，IAAIAA少。少。类型（根据发育方向）类型（根据发育方向）：丛生芽的发育不定芽的发育丛生芽的发育不定芽的发育 胚状体的发育胚状体的发育 原球茎的发育原球茎的发育顶芽顶

24、芽腋芽腋芽丛生芽的发育丛生芽的发育微型扦插微型扦插顶芽顶芽CTKCTK刺激刺激带芽的带芽的茎切段茎切段侧芽侧芽接种培养接种培养形成的茎梢节长，形成的茎梢节长，直立向上呈小灌木直立向上呈小灌木丛状丛状获得较多嫩茎梢获得较多嫩茎梢茎段培养茎段培养继代扩繁继代扩繁试管苗试管苗生根培养生根培养无愈伤组织产生无愈伤组织产生初代初代继代继代丛生芽的发育丛生芽的发育不定芽的发育不定芽的发育脱分化脱分化分化分化愈伤组织愈伤组织芽、芽丛芽、芽丛切割芽丛切割芽丛 继代培养继代培养大量芽丛大量芽丛试管苗试管苗生根培养生根培养外植体外植体初代初代继代继代不定芽的发育不定芽的发育愈伤组织培养愈伤组织培养 愈伤组织愈伤组

25、织具分裂能力的细胞具分裂能力的细胞已分化细胞已分化细胞脱分化脱分化继继 代代 愈伤组织愈伤组织分分 裂裂诱导期诱导期 分裂期分裂期 分化期分化期愈伤组织诱导愈伤组织诱导 双子叶植物双子叶植物 单子叶植物和裸子植物单子叶植物和裸子植物 幼年细胞和组织幼年细胞和组织 成年细胞和组织成年细胞和组织 二倍体细胞二倍体细胞 单倍体细胞单倍体细胞 根据培养目的选取外植体根据培养目的选取外植体愈伤组织诱导愈伤组织诱导 外植体大小一般为外植体大小一般为0.5cm0.5cm的圆柱形或的圆柱形或方形块方形块 添加植调剂和天然提取物利于诱导添加植调剂和天然提取物利于诱导和维持和维持 生长旺盛的愈伤组织一般呈乳黄色或

26、生长旺盛的愈伤组织一般呈乳黄色或白色或浅绿色或绿色，老化的多为黄色白色或浅绿色或绿色，老化的多为黄色或褐色或褐色脱分化因植物种类、器官及生理状况有脱分化因植物种类、器官及生理状况有大差异：大差异：禾谷类植物脱分化较难。禾谷类植物脱分化较难。细嫩组织脱分化较易；成熟组织较难。细嫩组织脱分化较易；成熟组织较难。花器脱分化较易；茎叶难。花器脱分化较易；茎叶难。诱导期诱导期诱导期长短与植物种类、生理状态有关。诱导期长短与植物种类、生理状态有关。诱导期长短与环境因素有关。诱导期长短与环境因素有关。母株生长在弱光下的外植体易于诱导，分裂母株生长在弱光下的外植体易于诱导，分裂频率高。频率高。增加增加O O2

27、 2和迅速释放和迅速释放COCO2 2利于细胞分裂。利于细胞分裂。添加植调剂诱导分裂效果好。添加植调剂诱导分裂效果好。合成代谢迅速。合成代谢迅速。分裂期分裂期特征：特征：细胞分裂快，结构细胞分裂快，结构疏松，缺少有组织疏松，缺少有组织的结构，颜色浅而的结构，颜色浅而透明。透明。分化期分化期特征：特征：形成瘤状结构的外形成瘤状结构的外表和内部分化；出表和内部分化；出现多种类型的细胞。现多种类型的细胞。石龙芮下胚轴石龙芮下胚轴培养产生胚状培养产生胚状体过程体过程体细胞胚状体的发育体细胞胚状体的发育外外 植植 体体愈伤组织愈伤组织小孢子小孢子游离单细胞游离单细胞器官器官胚胚 状状 体体试试 管管 苗

28、苗体细胞胚状体的发育体细胞胚状体的发育胚状体形成植株的特征：胚状体形成植株的特征：1.具两极性具两极性 2.胚状体的维管组织与外植体的维管胚状体的维管组织与外植体的维管组织无解剖结构上的联系组织无解剖结构上的联系 3.胚状体的维管组织的分布是独立的胚状体的维管组织的分布是独立的“Y”形形 4.数量多，速度快，结构完整，成苗数量多，速度快，结构完整，成苗率高率高影响胚状体形成的因素：影响胚状体形成的因素：铵态氮更利于胚状体发生铵态氮更利于胚状体发生GA、CTK抑制发生，抑制发生，2，4-D利于发生利于发生缩短的、呈珠粒状的、缩短的、呈珠粒状的、由胚性细胞组成的、类由胚性细胞组成的、类似嫩茎的器官

29、。似嫩茎的器官。原球茎的发育原球茎的发育 总结：总结：1.1.初代培养时外植体发育途径有几条？初代培养时外植体发育途径有几条？不同发育方式有什么特点不同发育方式有什么特点?2.?2.正常的愈正常的愈伤组织一般为何种颜色？其诱导有何特伤组织一般为何种颜色？其诱导有何特点？点？思考题：思考题：复习提问：复习提问：1.1.简要说明组培的大致流程？简要说明组培的大致流程？2.2.请说出组培初代培养时外植体有几请说出组培初代培养时外植体有几种发育方向？种发育方向？思考：思考：组培是如何实现快繁的？组培是如何实现快繁的？目的：目的：扩繁无根苗扩繁无根苗（生产上边扩繁边生根）（生产上边扩繁边生根）。扩繁方法

30、：扩繁方法：以几何级数增加，可切割茎以几何级数增加，可切割茎段段,分离芽丛、胚状体、原球茎。分离芽丛、胚状体、原球茎。培养基：培养基：基本培养基基本培养基或分化培养基或分化培养基实质：实质：增殖培养物，增殖培养物，二、继代培养二、继代培养 三、壮苗和生根培养三、壮苗和生根培养三、壮苗和生根培养三、壮苗和生根培养 生根培养基：生根培养基：1 12 2或或1 14MS4MS基本培养基本培养基；不加或少加基；不加或少加CTKCTK，适量添加，适量添加NAANAA；糖；糖浓度浓度1-1.5%1-1.5%。培养条件：培养条件：增加光强，达增加光强，达3000-3000-10000lx10000lx。壮苗

31、壮苗 三、壮苗和生根培养三、壮苗和生根培养 生根方法与途径生根方法与途径 新梢基部浸入新梢基部浸入5050或或100ppmIBA100ppmIBA液液4 48h8h；在含在含IAAIAA类培养基中培养类培养基中培养4 46d6d；移入含移入含IAAIAA类的生根培养基培养。类的生根培养基培养。其它方法其它方法 生根困难的则在培养基中搭滤纸桥或按生根困难的则在培养基中搭滤纸桥或按生根其它方法生根其它方法延长在增殖培养时间延长在增殖培养时间降低增殖倍率，减少降低增殖倍率，减少CTKCTK用量用量对易生根植物，切割粗壮嫩枝在营养钵中对易生根植物，切割粗壮嫩枝在营养钵中直接生根直接生根胚状体发育成小苗

32、不经生根阶段，但需胚状体发育成小苗不经生根阶段，但需壮苗生根壮苗生根 根、芽根、芽胚状体胚状体根、芽根、芽愈伤组织愈伤组织芽芽根根 芽芽外植体外植体试管苗试管苗 原球茎原球茎根、芽根、芽四、外植体成苗途径四、外植体成苗途径 根根复习思考题：复习思考题：1.1.继代培养有何意义？其目的和实质继代培养有何意义？其目的和实质是什么是什么?2.2.组培苗生根方法有哪些？组培苗生根方法有哪些？3.3.外植体成苗途径有几条？外植体成苗途径有几条？总结：总结：第六节移栽驯化第六节移栽驯化 第六节移栽驯化第六节移栽驯化 n试管苗生态环境与自然环境的差异试管苗生态环境与自然环境的差异 n试管苗的特点试管苗的特点

33、 n试管苗的驯化试管苗的驯化 n试管苗的移栽试管苗的移栽 试管苗生态环境与自然环境的差异试管苗生态环境与自然环境的差异n高温且恒温高温且恒温 n高湿高湿 n弱光弱光 n无菌无菌试管苗生态环境与自然环境的差异试管苗生态环境与自然环境的差异 试管苗有何特点？试管苗有何特点？试管苗的特点试管苗的特点 n生长细弱，角质层不生长细弱，角质层不发达发达 n光合作用差光合作用差 n叶片气孔数少，活性叶片气孔数少，活性差差 n根吸收功能弱根吸收功能弱试管苗的驯化试管苗的驯化 n目的：目的：提高试管苗的适应性，促其健壮，提高试管苗的适应性，促其健壮，最终提高移栽成活率最终提高移栽成活率 n原则：原则：从温、光、

34、湿度及有无杂菌等环境因素考虑。从温、光、湿度及有无杂菌等环境因素考虑。驯化开始数天内，与培养环境条件相似；后驯化开始数天内，与培养环境条件相似；后期与预计栽培条件相似，逐步适应。期与预计栽培条件相似，逐步适应。n方法：方法：即炼苗。不开口自然光下即炼苗。不开口自然光下2-32-3天，然天，然后开口后开口1-21-2天。天。n思考：思考：还有没有其它炼苗方法？还有没有其它炼苗方法？试管苗的移栽方法试管苗的移栽方法 组培驯化移栽常用基质组培驯化移栽常用基质 组培驯化移栽用穴盘组培驯化移栽用穴盘 炉渣预处理、做畦与装填基质炉渣预处理、做畦与装填基质 基质装填后状态基质装填后状态与浇水与浇水试管苗的移

35、栽方法试管苗的移栽方法移栽驯化场所移栽驯化场所 试管苗的移栽试管苗的移栽 n移栽方法：移栽方法：取出试管苗，全部轻洗去培养基取出试管苗，全部轻洗去培养基栽入基质栽入基质(事先浇透水事先浇透水)后，栽后轻浇薄水，后，栽后轻浇薄水，移入高湿环境移入高湿环境(90%(90%以上以上)。n移栽场所：移栽场所：日光温室塑料大棚驯化室日光温室塑料大棚驯化室 注意：注意：1.1.保持小苗水分供需平衡保持小苗水分供需平衡 2.2.防止菌类滋生防止菌类滋生 3.3.给予一定温光条件给予一定温光条件 4.4.注意基质配比并保持适当的通气性注意基质配比并保持适当的通气性 1.1.保持小苗水分供需平衡保持小苗水分供需

36、平衡 1 1周内：周内：环境高湿，遮光。环境高湿，遮光。1 1周后：周后：小苗生长后逐渐降湿，拱棚两端通风。小苗生长后逐渐降湿，拱棚两端通风。半个月后：半个月后：揭膜，控水，增加光强。揭膜，控水，增加光强。2.2.防止菌类滋生防止菌类滋生 基质高压灭菌或基质高压灭菌或3h3h烘烘烤灭菌或太阳能灭菌。烤灭菌或太阳能灭菌。适当使用杀菌剂、消适当使用杀菌剂、消毒剂。毒剂。移栽时少伤苗。移栽时少伤苗。喷水加喷水加0.1%0.1%尿素或尿素或1/2MS1/2MS大量元素液追大量元素液追肥，加快苗生长。肥，加快苗生长。3.3.给予一定温光条件给予一定温光条件 n适宜生根温度：适宜生根温度：18182020

37、，温，温度低可加度低可加地热线地热线。n移栽初期弱光，后逐渐加强光移栽初期弱光，后逐渐加强光照，过渡到自然光照。照，过渡到自然光照。基质配比：基质配比：珍：蛭：草(腐殖土)=1：1：0.5 珍：草(腐殖土)=1：1 4.4.注意基质配比并保持适当的通气性注意基质配比并保持适当的通气性保持基质通气性：保持基质通气性：选颗粒状基质，浇水勿多。4.4.注意基质配比并保持适当的通气性注意基质配比并保持适当的通气性 思考并讨论：思考并讨论：秧苗素质对试管苗驯化移栽成秧苗素质对试管苗驯化移栽成活率的影响？活率的影响？复习思考题：复习思考题：1.1.组培培养各阶段有何特点和要求？组培培养各阶段有何特点和要求？2.2.理解组培驯化阶段的必要性、具体理解组培驯化阶段的必要性、具体要求与方法。要求与方法。3.3.组培驯化与常规炼苗有何不同？组培驯化与常规炼苗有何不同？