医学精资料20111917-分子生物学复习题-2010研究生.doc

1、一、名词解释：1. 系统生物学以整体性研究为特征的一种大科学，是在细胞、组织、器官和生物体整体水平研究结构和功能各异的各种分子及其相互作用，并通过计算生物学来定量描述和预测生物功能、表型和行为。2. 表基因组学是研究在基因组序列不改变的情况下其表达谱改变的机制的分支领域，重点在基因组表达调控。3. Omics组学研究，包括病理基因组学、生殖基因组学、环境基因组学毒物基因组学、营养基因组学、比较基因组学表基因组学、干细胞基因组学、RNA组学、蛋白质组学转录组学、代谢物组学、临床基因组学、化学基因组学调节基因组学、计算机功能基因组学基因组动力学、功能基因组学4. 基因治疗 是指将外源正常基因导入靶

2、细胞，以纠正或补偿因基因缺陷和异常引起的疾病，以达到治疗目的。基因治疗的基本策略：取决于肿瘤的类型，概括起来有下列五种：基因置换：用正常的外源基因置换产生疾病的基因，使致病基因得到永久的更正。此为最理想的基因疗法。基因修正：单基因遗传病在多数情况下是由于基因内部单个碱基发生突变所致，而其他核苷酸序列均正常，因此只要将突变的单个碱基予以更正就能达到基因治疗的目的，而不必将整个基因进行置换。基因修饰：将目的基因导入病变细胞或其他细胞，目的基因的表达产物可以补偿病变基因的功能，而病变基因本身并未改变。由于已经发展了许多有效的方法可以将目的基因导入真核细胞，并获得表达，因而是目前较为成熟的方法。基因抑

3、制：导入外源基因去干扰、抑制有害基因的表达。基因封闭：以mRNA 为靶分子，用特定的可与靶分子互补的DNA或RNA分子与mRNA形成双链，从而改变RNA的剪接方式 ，阻断翻译甚至摧毁异常RNA，在剪接或翻译水平上调节基因的表达。5. 常染色体突变发生在常染色体上的基因突变。包括错义突变 ，无义突变，同义突变，移码突变6. M-CdkCdk指的是cyclin-dependent kinases，周期蛋白依赖性蛋白激酶，是一组丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，和周期蛋白cyclin协同作用，是细胞周期调控中的重要因子。CDK可以和cyclin结合形成异二聚体，其中CDK为催化亚基，cyclin为调节亚基，不

4、同的cyclinCDK复合物，通过CDK活性，到底不同底物磷酸化，而实现对细胞周期不同时相的推进和转化作用。M-Cdk作用于细胞分裂期。7. effector caspase caspase全称为天冬氨酸特异性的半胱氨酸蛋白水解酶。 caspase是一组存在于细胞质中具有类似结构的蛋白酶。它们的活性位点均包含半胱氨酸残基，能够特异性的切割靶蛋白蛋白天冬氨酸残基后的肽键。caspase负责选择性的切割某些蛋白质，从而造成细胞凋亡。8. 26S proteasome蛋白酶体是在细胞质基质中降解被泛素标记蛋白质的大分子蛋白复合体。9. 抑癌基因抗癌基因（antioncogene）是最初的叫法，大约可

5、以追溯到1985 年左右，现多称为抑癌基因（tumor suppressor gene），这是一类可抑制细胞生长并有潜在抑癌作用的基因，当它失活后，可能使癌基因充分发挥作用而导致癌的发生发展。 如果要确定某一特定组织或细胞恶性肿瘤的抑癌基因，需满足以下三个 条件： 在癌的相应正常组织中必须有正常的表达； 在恶性肿瘤中。相应基因应有所改变，包括点突变，片断缺失或 表达缺陷； 导入该基因缺陷的恶性肿瘤细胞中将部分或全部抑制恶性表型。10. 原癌基因c-onc也称为原癌基因（proto-oncgene）有两层含义： 1.原癌基因是不发挥致癌作用的c-onc，正常情况是与细胞增殖有关的基因。 2. v

6、-onc来源于原癌基因，目前所知v-onc，在哺乳动物都可以找到与之相对应的c-onc，具有相似的核苷酸序列，编码结构和功能相似的产物，反之则不然，目前发现几种c-onc没有相应的 v-onc。另一方面，细胞具有c-onc，但没有与之相关的癌基因成分。现在一般认为v-onc源于c-onc，是病毒基因组与细胞基因组发生重组而形成的。 未激活的细胞癌基因 在人体正常细胞中存在，基因序列高度保守 是一种正常基因,被激活后，形成癌性的细胞转化基因 作用通过产物蛋白来体现：调控细胞生长和分化 广泛存在于生物界中，从酵母到人的细胞中都存在11. 基因突变基因突变是指基因组中核酸分子碱基排列顺序的变异及其所

7、引起的生物表型变化。12. 表型表型（Phenotype），也叫表现型，是指生物体个别或少数性状以至全部性状的表现。对于一个生物而言，表示它某一特定的物理外观或成分。如植物的高度、人的血型、蛾的颜色，都是表型的例子。 13. 错义突变错义突变（missense mutation) 在基因的编码序列中，由于碱基的替换，使编码某一氨基酸的密码子变为编码另一氨基酸的密码子，这种突变称为错义突变。14. 无义突变无义突变（nonsense mutation) 在基因的编码序列中，由于碱基的替换，使某个氨基酸密码转变为终止密码，致使肽链合成提前终止，肽链缩短，这种突变称为无义突变。15. 移码突变移码突

8、变（frame-shifting mutation): 在基因的编码序列中,插入或缺失一个或数个(非3的整倍数)碱基,均可造成突变位点后的遗传密码阅读框架发生改变,不能编码出原来多肽链的氨基酸排列顺序。这种突变称为移码突变。16. 肿瘤基因诊断检测致病基因或疾病相关基因的改变，或患者体内病原体所特有的核苷酸序列，以此作为肿瘤诊断的指标。17. 蛋白质组一种细胞、组织或生物体完整基因组所对应的全套蛋白质18. Real time PCR(实时定量PCR)实时定量PCR技术，是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，使每一个循环变得“可见”，最后通过Ct值和标准曲

9、线对样品中的DNA (or cDNA) 的起始浓度进行定量的方法。 19. Threshold Cycle (Ct)PCR扩增过程中，扩增产物荧光信号超过基线值（进入指数增长期）时的循环数 20. 同尾酶即能切割产生相同末端的限制性内切酶，一般是指能产生相同粘性末端的限制酶。所有钝末端酶产生的末端均是相同的，但一般不把它作为同尾酶来研究。故名思义，同尾酶是不同的酶，它们只是切割DNA产生的末端相同，同尾酶之间的识别序列可以相同也可以不同，但基因工程中识别序列不同的同尾酶的应用性最大。21. DDRPRNA聚合酶(RNA pol)也称转录酶（transcriptase) ，全称依赖DNA的RNA

10、聚合酶(DDRP)。原核生物（E . Coli）RNA pol 由 2 共5 个亚基组成（465KD)。22. 原核生物转录终止子原核生物的转录终止：终止信号存在于RNA聚合酶已转录过的序列中。这种提供终止信号的序列称为终止子（terminator)。1.不依赖因子的转录终止2.依赖因子的转录终止两类终止子有共同的序列特征：转录终止点之前有一段回文序列，回文序列的两个重复部分由几个碱基对的不重复节段隔开。回文结构的对称轴一般距离转录终止点16-24bp)23. 调节基因调节基因是参与其他基因表达调控的RNA或蛋白质的编码基因。调节基因编码的调节物质通过与DNA上的特定位点结合控制转录是调控的关

11、键。 调节物与DNA特定位点的相互作用能以正调控的方式调节靶基因，也能以负调控的方式调节靶基因。24. 结构基因结构基因是编码蛋白质或RNA的任何基因。25. 组成型表达速率不受环境变化或代谢状态影响的基因表达方式称组成型表达；26. 互补现在使用的许多载体都带有一个大肠秆菌DNA的短区段，其中含有了半乳糖苷酶基因（lac Z)的调控序列和头146个氨基酸的编码信息（-肽区段）。这个编码区中插入了一个多克隆位点，不破坏读框，但可使少数几个氨基酸插入到半乳糖苷酶的氨基端，而不影响功能。这种载体适用于缺失掉半乳糖苷酶-肽区段的宿主细胞。虽然宿主和质粒编码的片段各自都没有酶活性，但可以融为一体，形成

12、具有酶活性的蛋白质。这样，lacZ基因上缺失近操作基因区段的突变体与带有完整的近操作基因区段的半乳糖苷酶阴性的突变体之间实现互补，这种互补现象叫互补。27. 遗传密码摆动性tRNA上的反密码子与mRNA上的密码子配对时，密码子的第一位、第二位碱基配对是严格的，第三位碱基可以有一定变动，并不严格遵循配对原则，这种现象称为密码的摆动性。28. chromatin remodeling染色体重建：指发生在基因活化转录时核小体能量-依赖型的排列或重排。29. transcriptional co-activators and co-repressors转录共激活子（Co-activator）:不与DN

13、A调控序列结合 但与转录激活因子结合并激活基因转录的因子。转录共抑制子（Co-repressor）:不与DNA调控序列结合 但与转录因子结合并抑制基因转录的因子。30. Kozak sequence存在于真核生物mRNA的一段序列，其在翻译的起始中有重要作用。 核糖体能够识别mRNA上的这段序列，并把它作为翻译起始位点。真核生物基因中起始密码子上下游的最佳序列为，-3位为嘌呤碱基；+4位为G，起始密码子AUG中的A处于+1位。A/GCCAUGG被称为kozak序列或扫描序列。二、问答题：1. 简述人类个体基因组分析的意义。人类个体基因组测序对实现个体化的诊断、预防、治疗具有重要意义。目前正在研

14、究下一代DNA测序技术，以期2013年实现1000美元测定人体基因组序列的目标。那时将能对每个患者的基因组DNA测序作为日常诊疗的一部分，使针对每个患者的个体化医疗中的预防、诊断、治疗成为可能。 100000 USD基因组 大幅提升 Sanger法和PCR的性能 提高使用毛细管系统效率的方法（Network Biosystems Co. USA)；珠粒基聚合酶簇(Colony)测序技术（美国Agercourt Personal Genomics Co. USA)。 1000 USD基因组 该项目将在微珠上克隆的 DNA放入液滴中，反复进行DNA链伸展和清洗的方法（Duke University

15、,USA)；利用“零模式导波管（ZMW)”技术，实时检测在聚合酶作用下每个连接到延伸的DNA分子中的核苷酸（Nanofluidics Co. USA) 作为读取DNA碱基的分子传感器，开发利用聚合酶和核苷酸的系统（VisiGen Biotechnologies Co. USA)等。2. 简述第二代测序技术的原理和应用。第2 代测序技术工作流程3. 2010年诺贝尔生理或医学奖授予了哪项成果？你对此有何评价？2010年，英国生理学家罗伯特爱德华兹因为在试管婴儿方面的研究获得2010年诺贝尔生理学或医学奖。体外受精技术俗称“试管婴儿”技术，是指采用人工方法让卵子和精子在体外受精，进行早期胚胎发育后

16、，移植到母体子宫内妊娠的技术。1968年，爱德华兹与发明腹腔镜技术的帕特里克斯特普托医生正式合作，开始了人的体外受精研究。尽管张民觉完成的哺乳动物体外受精技术已经非常成熟，但应用于人体还有诸多困难。1969年，爱德华兹和斯特普托经过努力，成功地从不育妇女卵巢中获得有活性的卵子，并首次实现了体外受精。经过不断的失败，1977年11月10日，斯特普托成功获得一枚布朗太太的卵子并人工授精成功，两天后将其植入布朗太太的体内，布朗太太顺利怀孕，并且胎儿发育正常。1978年7月25日，世界上第一个“试管婴儿”路易丝乔伊布朗出生。“试管婴儿”技术宣告成功。4. 请用文字加示意图阐述SCF类泛素连接酶复合体的

17、组织模式及作用机制。Ubiquitination of CDK inhibitor SIC1 by SCFCDC4-ROC ligase具体过程原理请参见张令强老师课件【2010-12-20 张令强研究生课 泛素化介导的蛋白质降解 含Smurf1 NCB文章】p435. 请简述线粒体在细胞凋亡发生中的地位及信号机制。细胞凋亡的一个重要途径通过线粒体完成，称为线粒体途径a) The mitochondrial pathway is activated by most cellular stresses. A resulting signal or intracellular change cau

18、ses the release of cytochrome c into the cytosol. Cytochrome c binds to Apaf-1 and procaspase-9 to form the apoptosome and catalyzes the activation of caspase-9. (线粒体途径)Role of mitochondriab) important in necrosisc) important role in activating apoptosisd) some downstream events ATP dependente) cert

19、ain caspases and Bcl-2 family members present in mitochondriaf) permeability transition releases cytochrome cg) cytochrome c binds to apaf-1 and caspase-9 (apoptosome)具体机制可参见张令强老师课件【2010-12-16 张令强研究生课 细胞凋亡的主要信号转导途径】p32或细胞生物学课本相关章节。6. 请简述抑癌蛋白p53的结构组成、作用机制及调控层次。答案见张令强老师课件【2010-12-16 张令强研究生课 细胞周期调控与癌症】

20、P55-p66，相关机理过程可从中总结。7. 简述病毒使细胞恶性转化的途径有哪些。病毒使正常细胞转化为恶性主要通过病毒癌基因编码产物癌蛋白对细胞各部分发生作用。 1） 作用细胞膜 有的病毒癌基因产物为生长因子或其受体类似物，可不断刺激细胞进行增殖。 2 ）跨膜信号传导 有的病毒癌基因产物具有类似G蛋白的作用，但不能有效地调节信号输入，而处于持续信号传入状态。 3） 作用细胞质 有的病毒癌基因产物本身为蛋白激酶，通过胞质蛋白激酶的磷酸化而影响细胞第二信使的产生。 4 ）作用细胞核 正常细胞核内存在核蛋白和核受体，一些病毒癌基因本身为核蛋白，核受体或转录因子，参与转录及DNA合成的改变。 8. 简

21、述基质金属蛋白酶在肿瘤侵润和转移过程中的作用。基质金属蛋白酶的功能与调节1） 降解细胞外基质，促进肿瘤细胞进入脉管系统。2） 促进原发瘤和 继发瘤的生长，创造肿瘤生长和扩散的微环境。3.）促进血管生长的作用，MMP2在毛细血管末梢形成及内皮细胞基底膜形成中发挥重要作用。4）MMPs在细胞外以非活性的酶原存在，需要活化后才能发挥生物学功能。5）IL4 、10、生长因子（EGF、bFGF等）、细胞与细胞、基质之间的反应因子。6） 抑制调节包括特异性组织抑制剂如TIMP14和大量非特异性蛋白酶抑制剂，是目前发展最快的抗癌药物。9. 举例说明常用抗肿瘤药物的作用机制。（一）干扰核酸生物合成的药物 这类

22、药物的化学结构与核酸代谢的必需物质叶酸、嘌呤、嘧啶等相似，又称抗代谢药，属作用于S期的周期特异性药。 1.二氢叶酸还原酶抑制药 甲氨蝶呤（methotrexate，MTX）化学结构类似叶酸，与叶酸竞争性抑制二氢叶酸还原酶，使FH2 FH4 DNA合成受阻；也能干扰嘌呤核苷酸的合成蛋白质合成障碍。 2. 胸苷酸合成酶抑制剂 氟脲嘧啶（fluorouracil，5-FU）在细胞内转变成5F-dUMP，从而抑制脱氧胸苷酸合成酶影响DNA合成。 3. 嘌呤核苷酸互变抑制药 巯嘌呤（mercaptopurine，6-MP）阻止肌苷酸转变为腺核苷酸和鸟核苷酸，干扰嘌呤代谢，核酸合成受阻，对S期最显著。4.

23、核苷酸还原酶抑制剂 羟基脲（hydroxycarbamide，HU）阻止胞苷酸脱氧胞苷酸抑制DNA合成。对S期有选择性的杀伤作用，可使瘤细胞集中在G1期，故可用做同步化治疗。对慢性粒细胞性白血病疗效显著。 5. DNA多聚酶抑制药 阿糖胞苷（cytarabine，Ara-C）影响DNA合成，也渗入到DNA中干扰其复制细胞死亡。（二）直接影响DNA结构与功能的药物1.烷化剂（alkylating agents）所含烷基与细胞的DNA、RNA或蛋白质中的亲核基团起烷化作用，形成交叉联结或脱嘌呤DNA链断裂，下次复制时又可使碱基配对错码，造成DNA结构和功能损害。 属周期非特异性药。氮芥 双功能基团

24、烷化剂环磷酰胺（cyclophosphamide，CTX） 经肝药酶活化生成中间产物醛磷酰胺，进入肿瘤细胞分解出磷酰胺氮芥发挥作用。 噻替哌（thiotepa，TSPA） 白消胺（busulfan） 卡莫司汀（carmustine）透过血脑屏障 2. 破坏DNA的铂类配合物 顺铂（cisplatin） 属周期非特异性药 卡铂（carboplatin）3.破坏DNA的抗生素类 丝裂霉素（mitomycin C）具有烷化作用，抑制DNA复制，也使部分DNA链断裂，属周期非特异性药。 博莱霉素（bleomycin，BLM）与铜或铁离子络合氧分子转成氧自由基DNA链断裂阻止DNA复制，干扰细胞分裂繁殖

25、。属细胞周期非特异性药，但对G2期作用强。4.拓扑异构酶抑制剂 周期非特异性药 喜树碱类（camptothecine，CPT）作用靶点是DNA拓扑异构酶（TOPO-），干扰DNA的结构和功能。 羟喜树碱、拓扑特肯、依林特肯 鬼臼毒素衍生物 抑制DNA拓扑异构酶， 依托泊苷、替尼泊苷（三）干扰转录过程和阻止DNA合成药物放线菌素（dactinomycin 更生霉素 DACT）嵌入到DNA双螺旋中相邻的鸟嘌呤和胞嘧啶碱基之间，与DNA结合成复合体阻碍RNA多聚酶的功能，阻止RNA尤其mRNA的合成。属周期非特异性药。多柔比星（doxorubicin，adriamycin）柔红霉素（daunorub

26、icin，rubidomycin）（四）抑制蛋白质合成与功能的药物1.微管蛋白活性抑制药 长春碱类 与微管蛋白相结合，抑制微管聚集，破坏纺锤丝的形成。属周期特异性药物，作用于M期，也能干扰蛋白质合成和RNA多聚酶，对G1期也有作用。 长春碱（vinblastine） 长春新碱（vincristin） 长春地辛（vindesine）长春瑞宾紫杉醇类 促进微管聚合，同时抑制微管解聚防锤体失去正常功能 细胞有丝分裂停止于M期 紫杉醇（paclitaxel） 紫杉特尔（taxotere） 2.干扰核蛋白体功能药物 三尖杉生物碱类 抑制蛋白合成的起始阶段，并使核蛋白体分解。周期非特异性药。 三尖杉紫碱（

27、harringtonine） 高三尖杉紫碱（homoharringtonine）3.影响氨基酸供应的药物 L-天门冬酰胺酶 可水解血清门冬酰胺，使肿瘤细胞得不到供应，生长受抑制。（五）调节体内激素平衡的药物雌激素类 治疗前列腺癌和绝经期乳腺癌雄激素类 晚期乳腺癌甲羟孕酮酯 他莫昔芬 雌激素受体的部分激动剂，抗 雌激素药糖皮质激素类 氨鲁米特（aminoglutethimide，AG） 特异性抑制雄激素转化为雌激素的芳香化酶，阻止雄激素转变为雌激素。用于绝经后晚期乳腺癌。（六） 其他三氧化二砷（arsenic trioxide，AsT） 促进细胞分化，诱导肿瘤细胞凋亡。剧毒药10. 简述肿瘤的基

28、因诊断和意义。 免疫分子基因治疗 与癌基因有关的基因治疗 1）抑癌基因的导入或修饰 2）反义核苷酸封闭或阻断癌基因 与抗肿瘤化疗药物相关的基因治疗 1）肿瘤药物增敏基因治疗 2）肿瘤耐药基因治疗 3）自杀基因治疗 其他抗瘤基因治疗11. 简述小RNA的种类及其作用机制。tRNA,rRNA ：蛋白质的生物合成snRNA： mRNA剪接 参与mRNA前体的剪接和可变剪接。异常mRNA可变剪接会导致人类疾病。U1、U2、U4、U5、U6snRNA在mRNA 剪接中发挥主要作用。snoRNA： rRNA加工和修饰 在RNA转录中改变核苷酸的化学结构，参与RNA加工的因子，指导RNA转录后加工；指导RN

29、A修饰，介导rRNA甲基化和假尿嘧啶；作为分子伴侣参与rRNA前体的折叠。 miRNA：细胞增殖、分化 控制线虫的发育过程；可以控制植物表型特征；调控造血干细胞的分化；参与肿瘤发生的过程。miRNA基因的缺失与B-细胞慢性淋巴球白血病相关。 siRNA：基因沉默 介导生物的表观遗传。特异性降解mRNA（RNAi）。 gRNA：RNA编辑 参与RNA编辑，在RNA转录中改变核苷酸的序列，如基因的插入、删除和替代。 Xist：染色体失活端粒酶RNA ：DNA 复制shRNA： DNA修饰pRNA： 运动分子SRP-RNA：信号分子Ribozyme：生物催化分子12. 简述TAP-MS技术原理及应用

30、。13. 请简述免疫共沉淀技术的原理及应用。 用抗体将相应特定分子沉淀的同时，与该分子特异性结合的其他分子也会被带着一起沉淀出来的技术。这种技术常用于验证蛋白质之间相互特异性结合。其原理是：当细胞在非变性条件下被裂解时，完整细胞内存在的许多蛋白质蛋白质间的相互作用被保留了下来。如果用蛋白质X的抗体免疫沉淀X，那么与X在体内结合的蛋白质Y也能沉淀下来。这种方法常用于测定两种目标蛋白质是否在体内结合；也可用于确定一种特定蛋白质的新的作用搭档。 14. 简述基因表达调控的生物学意义。(一) 适应环境、维持生长和增殖 生物体赖以生存的外环境是在不断变化的，为了生存，所有活细胞都必须对外环境变化作出适当

31、反应，调节代谢，以适应环境变化。生物体适应环境、调节代谢的能力与蛋白质分子的生物学功能有关。而蛋白质的水平又受基因表达的调控。(二) 维持个体发育与分化 多细胞生物调节基因的表达除为适应环境外，还有维持组织器官分化、个体发育的功能。 当某种基因缺陷或表达异常时，则会出现相应组织或器官的发育异常。15. 简述乳糖操纵元的基本调控方式。操纵元模型的提出 大肠杆菌可以利用葡萄糖、乳糖、麦芽糖、阿拉伯糖等作为碳源而生长繁殖。当培养基中含有葡萄糖和乳糖时，细菌优先使用葡萄糖，当葡萄糖耗尽，细菌停止生长，经过短时间适应，就能利用乳糖，细菌继续呈指数式繁殖增长。大肠杆菌利用乳糖至少需要两个酶：促使乳糖进入细

32、菌的乳糖透过酶(lactose permease)和催化乳糖分解第一步的半乳糖苷酶( -galactosidase)。在环境中没有乳糖或其他 -半乳糖苷时，大肠杆菌合成 -半乳糖苷酶量极少，加入乳糖2-3分钟后，细菌大量合成 -半乳糖苷酶，其量可提高千倍以上，在以乳糖作为唯一碳源时，菌体内的 -半乳糖苷酶量可占到细菌总蛋白量的3%。这种典型的诱导现象，是研究基因表达调控极好的模型。16. 简述原核生物基因转录过程并举例说明抗生素的原理。RNA合成主要包括四个步骤： RNA聚合酶结合于DNA上的特定位点； 起始； 链的延长； 链的终止和释放。 【复制起始】 1. 拓扑异构酶解开超螺旋。 2. D

33、naA蛋白识别并在ATP存在下结合于四个9bp的重复序列。 3. 在类组蛋白、ATP参与下,Dan A蛋白变性13个bp的重复序列,形成开链复合物。 4. DnaB借助于水解ATP产生的能量在DnaC的帮助下沿53方向移动，解开DNA双链，形成前引发复合物。 5. 单链结合蛋白结合于单链。 6. 引物合成酶（DnaG蛋白）开始合成RNA引物。 【复制延伸】复制的延伸阶段同时进行前导链和后随链的合成。 1、亲代DNA由DNA解螺旋酶解开双链，产生的拓扑扩张力由拓扑异构酶释放，分开的单链被单链结合蛋白结合。 2、DNA合成必需为53，在蛋白复制体参与下DNA进行半不连续复制： 前导链为连续复制：由

34、引物合成酶（Dna G蛋白）在起点处合成一段RNA引物，DNA 聚合酶 在引物3OH开始延伸，连续合成DNA子链。 后随链为非连续复制：引物合成酶合成引物（与解链方向相反）、DNA聚合酶在引物3OH延伸，形成冈崎片断，DNA 聚合酶切除引物，填补缺口，连接酶封闭缺口 【复制终止】 1、Tus蛋白与终止子位点ter结合，当任意一个复制叉碰到一个功能性ter-Tur复合物时，就停止。而另一个复制叉碰到第一个被阻止的复制叉时也停止前进。 2、位于终止区内尚未复制的序列（50-100 bp）以修复合成的方式被填补。 3、复制完成的2个子代DNA分子以连环体的形式锁在一起，在拓扑异构酶作用下分开连锁环。

35、抗生素作用原理：（1）抑制细胞壁的形成，如青霉素，主要是抑制细胞壁中肽聚糖的合成。多氧霉素（一种效果很好的杀真菌剂）主要作用是抑制真攻细胞壁中几丁质的合成。 （2）影响细胞膜的功能，如多粘菌至少与细胞结合，作用于脂多糖、脂蛋白，因此对革兰氏阴性菌有较强的杀菌作用，制霉菌素与真菌细胞膜中的类固醇结合，破坏细胞膜的结构。 （3）干扰蛋白质的合成，通过抑制蛋白质生物合成抑制微生物生长的抗生素较多，如卡那霉素、链霉素等。 （4）阻碍核酸的合成，主要通过抑制DNA或RNA的合成，抑制微生物的生长，例如利福霉素、博莱霉素等。17. 简述蛋白质合成的自体调控。组蛋白密码，特定的组蛋白修饰能使与之相接触的DN

36、A结构改变，进而使染色质的结构改变，影响与染色质结合的蛋白因子（包括转录因子）的亲和性，从而与特定的基因激活或抑制状态相联系。组蛋白的这种修饰类似于遗传信息传递中的密码。修饰形式：组蛋白的酰基化(acetylation)、甲基化 (methylation)、磷酸化(phosphorylation)、泛素化(ubiquitination)、ADP-核糖基化(ADP-ribosylation)、类泛素化(sumoylation)。酰基化：一般激活基因转录甲基化：激活或抑制基因转录磷酸化：一般激活基因转录泛素化：一般激活基因转录修饰位置：常在核小体表面的核心组蛋白的N端尾部碱性氨基酸（赖氨酸K和精氨

37、酸R），少数在C端和核小体内部。18. 阐述从DNA序列开始进行真核基因功能研究的基本思路。 基因在转录水平的调控(可以通过genome walking PCR或通过已有的资源库寻找该基因的启动子等转录调控区域, 通过单杂交或ChIP等技术, 寻找该基因的转录调控蛋白) 基因的亚细胞定位和时空(发育期或梯度药物处理浓度, 不同组织/器官)表达谱 细胞生化水平的功能研究(也就是蛋白蛋白作用复合体的寻找验证,具体方法有酵母双杂交, GST pulldown, co-IP, BRET, FRET, BiFc等等,对该基因的表达产物做一个细胞信号转导通路的定位) gain-of-function &

38、loss-of-function: 也就是分别在细胞和个体水平,做该基因的过表达和knockdown(或knockout), 从表型分析该基因的功能19. 如何通过染色质的基本结构单位调节基因表达？染色质的基本结构单位是核小体。核小体水平调节的2个重要机制一、核心组蛋白的翻译后修饰（Post- translational modifications of core histones ; ATP-independent）Histone code: 由Strahl和Allis提出（Nature 2000, 403:41）。大意是：特定的组蛋白修饰能使与之相接触的DNA结构改变，进而使染色质的结构改

39、变，影响与染色质结合的蛋白因子（包括转录因子）的亲和性，从而与特定的基因激活或抑制状态相联系。组蛋白的这种修饰类似于遗传信息传递中的密码。修饰形式：组蛋白的酰基化(acetylation)、甲基化 (methylation)、磷酸化(phosphorylation)、泛素化(ubiquitination)、ADP-核糖基化(ADP-ribosylation)、类泛素化(sumoylation)。酰基化：一般激活基因转录甲基化：激活或抑制基因转录磷酸化：一般激活基因转录泛素化：一般激活基因转录修饰位置：常在核小体表面的核心组蛋白的N端尾部碱性氨基酸（赖氨酸K和精氨酸R），少数在C端和核小体内部。

40、二、ATP水解依赖的染色质重组装复合物的作用 (ATP hydrolysis-dependent chromatin remodeling activities) 20. 阐述真核基因表达调控的主要方式。真核生物的基因表达受到多级调控系统的调控：1、转录前水平的调节：主要指染色体DNA的断裂、删除、扩增、重排、修饰和异染色质化等改变基因结构和活性的过程；2、转录水平的调节：主要指染色质和基因的活化，包括：通过染色质改建、组蛋白乙酰化使染色质变得疏松，易与酶和调节蛋白作用；基因顺式作用元件和反式作用因子联合调节基因的转录等等；3、转录后水平的调节：主要包括转录产物的加工和转运的调节，如通过不同的剪接方式可产生不同的mRNA；4、翻译水平的调节：是指控制mRNA的稳定性和有选择的进行翻译的调控方式5、翻译后水平的调节：主要指控制多肽链的加工和折叠从而产生不同活性的多肽的调节方式。