贝克曼库尔特血细胞分析vcs技术课件.ppt

1、贝克曼库尔特血细胞分析贝克曼库尔特血细胞分析vcsvcs技术技术从三分类到五分类u三分类：三分类：u淋巴细胞淋巴细胞u单核细胞单核细胞u粒细胞粒细胞u 中性粒细胞中性粒细胞u 嗜酸细胞嗜酸细胞u 嗜碱细胞嗜碱细胞u五分类：五分类：u淋巴细胞淋巴细胞u单核细胞单核细胞u中性粒细胞中性粒细胞u嗜酸细胞嗜酸细胞u嗜碱细胞嗜碱细胞LymphocyteMonocyteGranulocyte淋巴细胞淋巴细胞单核细胞单核细胞粒细胞粒细胞淋巴淋巴嗜碱嗜碱单核单核嗜酸嗜酸中性粒细胞中性粒细胞五分类VCS技术u运用运用V V、C C、S S三种探针三种探针,在在流式通道的某一位点流式通道的某一位点,对通对通过的单

2、列白细胞，进行逐过的单列白细胞，进行逐个的、同时的、三重的检个的、同时的、三重的检测，以及三维分析测，以及三维分析,以确定以确定其亚群性质。其亚群性质。lV-V-低频波，分析细胞体积；低频波，分析细胞体积；lC-C-高频波，分析细胞核型；高频波，分析细胞核型；lS-S-激光，分析细胞的颗粒特激光，分析细胞的颗粒特性。性。接近原态的WBC分析uScatter Pak双试剂系统的作用双试剂系统的作用l去红细胞去红细胞:红细胞溶解剂通过渗透压差溶解红红细胞溶解剂通过渗透压差溶解红细胞细胞l保持白细胞原态保持白细胞原态:溶解终止液令白细胞恢复到溶解终止液令白细胞恢复到“接近原态接近原态”大小大小接近原

3、态的WBC分析接近原态的白细胞混合池和流式通道混合池和流式通道接近原态的WBC分析：前处理装置流体动力聚焦u流体动力聚焦的流式通道流体动力聚焦的流式通道l单细胞流在鞘液的包裹下呈最适排列通过流式单细胞流在鞘液的包裹下呈最适排列通过流式通道通道l将重叠限制到最低限度将重叠限制到最低限度正常压力差：标本压力小于鞘流压力正常压力差：标本压力小于鞘流压力异常压力差：标本与鞘流压力差过小异常压力差：标本与鞘流压力差过小VCS检测八千多个白细胞逐个、直接八千多个白细胞逐个、直接、同时地在流式通道内接受、同时地在流式通道内接受VCS三重检测，得到各自的三重检测，得到各自的三维座标值三维座标值VCS增强型流式

4、通道VCS增强型流式通道运用三种独立的能量探针来分析细胞,是目前最全面先进的分析工具更好的体积测量方法V 是以库尔特原理检测细胞的体积获得的是完全的细胞体积VCS-DC更好的细胞内部结构测量方法C 运用高频探针检测细胞的内部结构获得细胞核复杂程度的信息区分分叶核和非分叶核细胞VCS-RFVCS-LaserS 是运用一个宽角度的散射范围（10-70）来测量细胞的颗粒特性更好地根据颗粒特性区分淋巴细胞、中性粒细胞和嗜酸细胞更好的细胞颗粒特性测量方法逐个逐个、同时、直接的三维检测、同时、直接的三维检测细胞的三维定位三维分析技术u将检测过的将检测过的8,1928,192个细胞分个细胞分布到一个以布到一

5、个以V V、C C、S S为三维为三维坐标的空间内，显示出细坐标的空间内，显示出细胞群特征。胞群特征。u高智能的计算机软件分析高智能的计算机软件分析分析细胞群的位置、相对分析细胞群的位置、相对密度、轮廓、和大小。密度、轮廓、和大小。u三维坐标的数据分析位点三维坐标的数据分析位点多过多过 16 16 10 106 6个。个。三维细胞定位三维空间的多侧面表示-DF1 -体积(V),激光散射(S)嗜酸细胞中性粒细胞淋巴细胞单核细胞DF2 -体积(V),传导性(C)单核细胞淋巴细胞中性粒细胞嗜酸细胞嗜碱细胞十余种异常细胞的报警提示12345678910VCS三维分析的技术特点u接近原态的白细胞分析接近

6、原态的白细胞分析l一个分类试剂包一个分类试剂包u增强型流式通道，增强型流式通道，VCSVCS直接、同时、三重检测直接、同时、三重检测l分析细胞的视角与手工相似分析细胞的视角与手工相似l真正的三维检测真正的三维检测lVCSVCS，汇集最全面的物理检测工具汇集最全面的物理检测工具u三维分析的高分辨率三维分析的高分辨率 (256 (256 256 256 256)256)l白细胞五项分类白细胞五项分类l1010多种异常细胞的检测多种异常细胞的检测VCS三维分析的技术特点u流体动力聚焦流体动力聚焦 u统计统计80008000多个白细胞多个白细胞u分类结果与手工的相关性好分类结果与手工的相关性好u流式通

7、道还可检测网织红细胞流式通道还可检测网织红细胞u被世界上最多实验室采用的五分类原理被世界上最多实验室采用的五分类原理IntelliKineticsTM（智能调控)&AccuGateTM（精确定位）两种新技术令报警的假阳性两种新技术令报警的假阳性和假阴性减少到前所未有的和假阴性减少到前所未有的水平水平专利的IntelliKinetics 技术u对标本在测量前的预处理作最适化控制对标本在测量前的预处理作最适化控制u根据实验室环境温度，控制根据实验室环境温度，控制l仪器内细胞与试剂的反应温度仪器内细胞与试剂的反应温度l试剂加入量试剂加入量l试剂与细胞的反应时间试剂与细胞的反应时间l从流式通道获取数据

8、的时间从流式通道获取数据的时间专利的 AccuGate 定位技术AccuGate 定位技术u真正的三维分析真正的三维分析l全周边限定细胞亚群全周边限定细胞亚群u对细胞特征进行实时刻划对细胞特征进行实时刻划l每个细胞亚群都独立定义每个细胞亚群都独立定义u清晰的细胞亚群分界清晰的细胞亚群分界l超凡的怀疑性报警灵敏度和特异性超凡的怀疑性报警灵敏度和特异性u标本具标本具4848小时的分类稳定性。小时的分类稳定性。以崭新方式展示白细胞分类数据从一个分类点图上了解更多信息从一个分类点图上了解更多信息转动转动 从任意角度观察从任意角度观察根据需要隐藏根据需要隐藏/显示细胞亚群显示细胞亚群AccuGate 定

9、位技术u增加新的怀疑性报警提示增加新的怀疑性报警提示l怀疑有中性、淋巴、或单核系原母细胞怀疑有中性、淋巴、或单核系原母细胞n分辨不同细胞系的原母细胞 l衰老标本衰老标本l低细胞数量标本低细胞数量标本(绝对值绝对值)经典的库尔特专利技术。-蠕动摇床.u全自动u90度摇匀u吸样前自动设置初始化编号u唯一具备样本识别无错管理256 X 256 X 256淋巴单核嗜酸中性充满信心的最低人工复检率充满信心的最低人工复检率 u独有的非线性分类方式独有的非线性分类方式u柔变轮廓柔变轮廓l细胞亚群多维参数的精确演算细胞亚群多维参数的精确演算l原始细胞的特征描述原始细胞的特征描述l精确的报警精确的报警Coult

10、erCoulter HmX HmXTMTMu对异常标本最精确的检测及结果报告对异常标本最精确的检测及结果报告u对重叠及被掩盖的群落进行精确分类对重叠及被掩盖的群落进行精确分类u激发软件对分类结果异常的样本进行进一步分析激发软件对分类结果异常的样本进行进一步分析u超凡的怀疑性报警灵敏度和特异性超凡的怀疑性报警灵敏度和特异性u标本具有更好的分类稳定性标本具有更好的分类稳定性u增加新的怀疑性报警提示增加新的怀疑性报警提示u大大降低假阳性率和假阴性率大大降低假阳性率和假阴性率CoulterCoulter HmX HmXTMTMCoulterCoulter HmX HmXTMTML ysis Nucle

11、iBloodW BCSwellingW BCShrinkageRBCghost,fragment,disolveRBCSwellingNeutEoL ymphRBCErythroLyseStabiLyseCOUNTu在任何一种血细胞分析仪在任何一种血细胞分析仪的分析过程中，的分析过程中，细胞与试细胞与试剂之间的反应过程都对结剂之间的反应过程都对结果的准确度起到至关重要果的准确度起到至关重要的作用。的作用。l细胞和溶血剂的反应（细胞和溶血剂的反应（物理法）物理法）l细胞和染色剂的反应（细胞和染色剂的反应（化学法）化学法）根据实验室环境条件，调整：加入试剂的温度 加入试剂的量 试剂与细胞的反应时间

12、（从流式通道获取数据的时间）屏蔽分析环境的内、外源噪音Coulter LH 755TMu消除实验室环境对结果的影响l保证在不破坏白细胞的前提下,完全溶解红细胞l保证白细胞恢复原态u更精确的结果，降低复检率u整体提高实验室工作效率Coulter LH 755TM优秀，经济的幼稚细胞检测CoulterCoulter HmX HmXTMTM卓越的幼稚细胞报警功能卓越的幼稚细胞报警功能基于基于VCSVCS技术，结合库尔特非线性柔变轮廓分类技术，技术，结合库尔特非线性柔变轮廓分类技术，COULTER HmXCOULTER HmX的研究队伍根据国际行业标准，在结的研究队伍根据国际行业标准，在结果报告单中提

13、供无与伦比的包括十余种幼稚细胞的准果报告单中提供无与伦比的包括十余种幼稚细胞的准确报警，与同类仪器相比，确报警，与同类仪器相比，COULTER HmXCOULTER HmX的幼稚的幼稚细胞功能独有如下优点：细胞功能独有如下优点：基于多维参数基础上，结合多种创新科技的准确的、基于多维参数基础上，结合多种创新科技的准确的、分系的幼稚细胞报警分系的幼稚细胞报警无需额外的试剂，降低实验室成本无需额外的试剂，降低实验室成本根据国际行业复检标准，根据国际行业复检标准，只只提供准确的报警以供人工提供准确的报警以供人工复检参考复检参考NE BlastsImm NE 2Imm NE 1LY BlastsVari

14、ant LYMO Blasts NRBCs CoulterCoulter HmX HmXTMTM卓越的幼稚细胞报警功能卓越的幼稚细胞报警功能u有核红细胞有核红细胞 u单核系原始细胞单核系原始细胞u淋巴系原始细胞淋巴系原始细胞u粒系原始细胞粒系原始细胞u不成熟粒细胞不成熟粒细胞u中性杆状核细胞中性杆状核细胞u异型淋巴细胞异型淋巴细胞u过度溶解的淋巴细胞过度溶解的淋巴细胞u血小板凝集团和巨大血小板血小板凝集团和巨大血小板u细胞寄生虫细胞寄生虫(疟原虫等疟原虫等)CoulterCoulter HmX HmXTMTM卓越的幼稚细胞报警功能卓越的幼稚细胞报警功能有核红细胞在有核红细胞在HmXHmX上的体

15、现上的体现.uVCSVCS技术为基础技术为基础u在散点图上有单独的群落在散点图上有单独的群落u报告方式符合国际标准报告方式符合国际标准uWBCWBC分类不受影响，结果分类不受影响，结果准确准确u最准确的分类结果，最低最准确的分类结果，最低的假阳性率，假阴性率的假阳性率，假阴性率u最低的成本最低的成本u无限扩展性无限扩展性有核红细胞有核红细胞精敏调节系统精敏调节系统AccuFlexAccuFlexTMTM u专利的专利的AccuFlexAccuFlex 软件技术软件技术可以让您选择每一项报警的可以让您选择每一项报警的灵敏度水平，由此来建立相灵敏度水平，由此来建立相应的复检标准。对您的实验应的复检

16、标准。对您的实验室而言，库尔特室而言，库尔特VCSVCS 技术技术平台与平台与AccuFlexAccuFlex,AccuGateAccuGate,and,and IntellikeneticsIntellikenetics 等技术的组等技术的组合意味着将复检率降低到前合意味着将复检率降低到前所未有的水平，同时也意味所未有的水平，同时也意味着以更高的效率完成更大的着以更高的效率完成更大的工作工作 u网织红细胞计数是用作红细胞产生或红细胞生成的指标，是诊网织红细胞计数是用作红细胞产生或红细胞生成的指标，是诊断或监测贫血治疗最常用的临床指标断或监测贫血治疗最常用的临床指标 u传统的手工计数网织红细胞

17、的方法因其固有的不精确性，当用传统的手工计数网织红细胞的方法因其固有的不精确性，当用做监测实验时有一定的局限性，尤其是用在计数范围的低限或做监测实验时有一定的局限性，尤其是用在计数范围的低限或高限时。涂片厚薄，染色深浅，有限的细胞计数以及技师间的高限时。涂片厚薄，染色深浅，有限的细胞计数以及技师间的差异均会导致结果的变异系数为差异均会导致结果的变异系数为25%25%到到50%50%。u流式细胞术测量网织红细胞不但大大提高了网织红细胞计数的流式细胞术测量网织红细胞不但大大提高了网织红细胞计数的准确性和精确性，还能提供一些反映网织红细胞成熟度和大小准确性和精确性，还能提供一些反映网织红细胞成熟度和

18、大小的非传统参数。临床研究已经开始将这些非传统参数应用于许的非传统参数。临床研究已经开始将这些非传统参数应用于许多贫血性疾病的诊断和治疗多贫血性疾病的诊断和治疗 自动网织红细胞功能自动网织红细胞功能CoulterCoulter LH750 LH750创新科技令操作更简便创新科技令操作更简便试剂试剂u非荧光染料非荧光染料-新亚甲蓝来沉淀网织红细胞内的新亚甲蓝来沉淀网织红细胞内的RNARNA。网织网织红细胞染色是为了把网织红细胞与成熟红细胞区分开来。红细胞染色是为了把网织红细胞与成熟红细胞区分开来。u脱蛋白溶液脱蛋白溶液(酸性、低渗酸性、低渗)-)-在血液与新亚甲蓝混匀孵育一在血液与新亚甲蓝混匀孵

19、育一段时间后加入段时间后加入u将网织红细胞内的血红蛋白除去，而保留着色的将网织红细胞内的血红蛋白除去，而保留着色的RNARNA。1.1.红细胞肿胀成球形但不胀破红细胞肿胀成球形但不胀破 自动网织红细胞功能自动网织红细胞功能 CoulterCoulter LH750 LH750创新科技令操作更简便创新科技令操作更简便方法：方法：l漂清本底后，以VCS技术在增强型流式通道内对细胞进行分析，即同时采用体积、传导性和光散射三维分析来确定细胞并将其分类。nV:V:直流电测量的体积确定细胞的大小。网织红细胞的直流电测量的体积确定细胞的大小。网织红细胞的分析高度依赖细胞的大小信息，根据定义，分析高度依赖细胞

20、的大小信息，根据定义，未成熟的未成熟的红细胞大于成熟的红细胞红细胞大于成熟的红细胞。数据图的。数据图的y y轴为体积轴为体积nC:C:传导性或射频测量提供细胞的传导性或射频测量提供细胞的内部特性信息内部特性信息。数据。数据图的图的z z轴为传导性，它只能在旋转的三维图中才可看到轴为传导性，它只能在旋转的三维图中才可看到nS:S:细胞通过氦细胞通过氦-氖激光束测得的光散射提供细胞表面特氖激光束测得的光散射提供细胞表面特性和细胞颗粒特性的信息。网织红细胞分析高度依赖性和细胞颗粒特性的信息。网织红细胞分析高度依赖光散射信息因为光散射信息因为含有残余含有残余RNARNA的红细胞的光散射强于的红细胞的光

21、散射强于成熟红细胞的光散射成熟红细胞的光散射。数据图的。数据图的x x轴为光散射轴为光散射 自动网织红细胞功能自动网织红细胞功能 CoulterCoulter LH750 LH750创新科技令操作更简便创新科技令操作更简便网织红细胞的检测u网织红细胞是介于晚幼红网织红细胞是介于晚幼红细胞和成熟红细胞之间的细胞和成熟红细胞之间的不成熟红细胞不成熟红细胞,通常较成熟通常较成熟红细胞稍大红细胞稍大,其胞质中尚残其胞质中尚残存部分嗜碱性物质存部分嗜碱性物质(RNA,RNA,核核糖体糖体),),经碱性染料染色后经碱性染料染色后可见深染的网状结构可见深染的网状结构,故名故名。u右图中标记右图中标记A A、

22、B B、C C的细胞的细胞分别代表不同成熟度的网分别代表不同成熟度的网织红细胞的。织红细胞的。新亚甲蓝-VCS检测法u以经典的超活染料新亚甲蓝（以经典的超活染料新亚甲蓝（NMBNMB）着色网织红细着色网织红细胞内残存的胞内残存的RNARNA。u漂去除红细胞内血红蛋白漂去除红细胞内血红蛋白(酸性试剂酸性试剂)u在流式通道，运用在流式通道，运用VCSVCS三维技术，将网织红细胞与三维技术，将网织红细胞与成熟红细胞、白细胞、血小板、和有核红细胞区成熟红细胞、白细胞、血小板、和有核红细胞区分开来。分开来。网织红细胞的VCS三维分析u运用运用VCSVCS三维技术分析染色后的红细胞。三维技术分析染色后的红

23、细胞。l低频波检测细胞体积低频波检测细胞体积l高频波高频波(阻光性阻光性)检测细胞的内部成分，可剔除非红细胞检测细胞的内部成分，可剔除非红细胞颗粒颗粒l激光散射将网织红细胞与成熟红细胞区分开来激光散射将网织红细胞与成熟红细胞区分开来(网织红网织红细胞胞浆含较细胞胞浆含较 RNA RNA 物质，散射较多的激光，在散点图物质，散射较多的激光，在散点图上分布于红细胞的右侧上分布于红细胞的右侧)。l网织红细胞成熟度越差网织红细胞成熟度越差,在散点图上分布越靠右在散点图上分布越靠右u检测与白细胞分类共享一个流式通道。检测与白细胞分类共享一个流式通道。网织红细胞VCS三维散点图分析网织红细胞网织红细胞网织

24、红细胞网织红细胞高成熟度网织红高成熟度网织红成熟红细胞成熟红细胞白细胞白细胞非红细胞干扰非红细胞干扰 低成熟度网织红低成熟度网织红 网织红细胞参数意义网织红细胞参数意义 参数参数 英文英文 正常参考正常参考网织红细胞百分比 RET%0.5%-2%2%-6%网织红细胞绝对值 RET#(25 75)109/L网织红成熟度 IRF 0.2-0.4平均网织红体积 MRV 100-125fl平均球形红细胞体积 MSCV 84-100fl高散射网织红百分比 HLR%0.07%-0.7%高散射网织红绝对值 HLR#(3 50)106/L 网织红细胞参数的临床意义网织红细胞参数的临床意义IRF的临床应用的临床

25、应用u未成熟网织红细胞，也称移动或张力细胞，正常情况下不足网织未成熟网织红细胞，也称移动或张力细胞，正常情况下不足网织红细胞总数的红细胞总数的5%。未成熟网织红细胞在大量的促红细胞生成的。未成熟网织红细胞在大量的促红细胞生成的刺激下会释放到外周血中，如出血，某些贫血或对刺激骨髓造血刺激下会释放到外周血中，如出血，某些贫血或对刺激骨髓造血治疗的反映。治疗的反映。IRF类似于中性粒细胞的核左移，能够提供额外的类似于中性粒细胞的核左移，能够提供额外的红细胞信息，这些信息可以缩短疾病从诊断到治疗或单纯的治疗红细胞信息，这些信息可以缩短疾病从诊断到治疗或单纯的治疗时间。时间。uIRFIRF在其他方面的临

26、床应用包括：在其他方面的临床应用包括：l监测骨髓移植后干细胞再生情况监测骨髓移植后干细胞再生情况l监测强度化疗后骨髓再生情况监测强度化疗后骨髓再生情况l监测铁、维生素监测铁、维生素B12B12和叶酸治疗和叶酸治疗l监测毒性药物对骨髓的影响监测毒性药物对骨髓的影响l通过促红细胞生成监测肾脏移植通过促红细胞生成监测肾脏移植l对贫血进行分类和评价对贫血进行分类和评价l监测新生儿输血监测新生儿输血l检测再障危象检测再障危象l提高贫血的分类、诊断和治疗提高贫血的分类、诊断和治疗 不同临床疾病中不同临床疾病中IRFIRF与网织红细胞计数的相互关系与网织红细胞计数的相互关系 临床疾病IRF网织红细胞计数骨髓

27、移植升高降低溶血性贫血升高 升高缺铁性贫血升高 正常到降低B12或叶酸缺乏 升高正常到降低近期出血升高 正常到升高地中海贫血正常到升高升高髓障综合征正常到升高正常到降低增生低下性贫血正常到升高降低再障危象正常到降低降低IRF网织红细胞成熟指数网织红细胞成熟指数 uIRF在骨髓移植病人中的作用，在骨髓移植病人中的作用，IRF通常先于中性通常先于中性粒细胞计数对骨髓活性情况出现反应。粒细胞计数对骨髓活性情况出现反应。IRF的优的优点在于它不象中性粒细胞绝对计数那样受临床或点在于它不象中性粒细胞绝对计数那样受临床或亚临床感染影响。骨髓移植后亚临床感染影响。骨髓移植后IRF升高到升高到20%以以上时表

28、示红系移植成功上时表示红系移植成功 uIRF是骨髓移植成功最敏感的指标，因为是骨髓移植成功最敏感的指标，因为IRF升高升高是当前实验室方法可测得的最早的反应指标。是当前实验室方法可测得的最早的反应指标。u肾移植后肾移植后IRF是一个比网织红细胞绝对计数更敏是一个比网织红细胞绝对计数更敏感的早期指标感的早期指标 MSCV平均球形细胞体积平均球形细胞体积u网织红细胞网织红细胞MSCVMSCV与与CBC-MCVCBC-MCV的关系是遗传性球形红的关系是遗传性球形红细胞增多症的一个高度有效的指标。细胞增多症的一个高度有效的指标。lChironChiron等人评价了等人评价了286286份标本份标本CBCCBC中的平均红细胞体积（中的平均红细胞体积（MCVMCV）和和MSCVMSCV的相关性。由于红细胞的双凹圆饼结构，的相关性。由于红细胞的双凹圆饼结构，总的相关性显示出一个总的相关性显示出一个MSCVMSCV的正向偏差。然而的正向偏差。然而4848例例MSCVMSCV小于小于MCVMCV的标本有一群不明的细胞亚群。这一亚群包括的标本有一群不明的细胞亚群。这一亚群包括来自遗传性球形红细胞增多（来自遗传性球形红细胞增多（HSHS）的的3131份病人标本份病人标本