人教版教学课件定稿动物细胞培养和核移植技术.ppt

1、第一页，共40页。植物细胞工程常用的技术手段有哪些？那么动物细胞常用的技术手段那么动物细胞常用的技术手段 呢？呢？植物组织培养植物组织培养,植物体细胞杂交植物体细胞杂交问题讨论问题讨论2021/1/122第二页，共40页。皮肤烧伤，假如创面很小不大于硬币只要保持清洁，甚至深度烧伤，也可能自愈。假如下层真皮受损面积较大，常常需要植皮。植皮需要的安康皮片。植皮需要的安康皮片，可以取自烧伤病人自身未烧伤的部位自体植皮，也可取自其他活人或尸体异体植皮等。自体植皮是永久性的，取自其别人或动物的植皮是暂时性的，是在创面愈合过程中为保护创面而采取的措施，1014天后就要被身体排斥。假如一个大面积烧伤的病人来

2、说，自体皮肤有限，其他渠道的皮肤来源缺乏。如何才能获得大量的自体安康皮肤？2021/1/123第三页，共40页。人耳鼠“人耳鼠再出风头 2001年，一只特别的活老鼠在北京引起轰动这是有着一对红眼睛的、尾巴长长的、浑身没毛的小白鼠。值得一提的是，这只小白鼠的背上，竟长着一只几乎与身子一般大小的“人耳。这只老鼠背上的“人耳是由上海市第九人民医院副院长、整复外科主任曹谊林教授利用组织工程技术复制出来的。在京展出的数天，尽管门票高达20元，但还是有将近20万人，心甘情愿地掏钱一睹“人耳鼠的风采。人耳鼠的出现，透露了怎样的信息？2021/1/124第四页，共40页。动物细胞工程：动物细胞工程：动物细胞培

3、养、动物细胞核移植、动物细胞培养、动物细胞核移植、动物细胞交融、消费单克隆抗体等动物细胞交融、消费单克隆抗体等 动物细胞培养技术是其他动动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的根底物细胞工程技术的根底教学过程教学过程2021/1/125第五页，共40页。从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后，放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。原理：细胞增殖2021/1/126第六页，共40页。注意关键词:细胞贴壁 接触抑制 原代培养 传代培养阅读课文44-46面相关内容2021/1/127第七页，共40页。动物细胞生长特性：动物细胞生长特性：细胞贴壁：细胞贴壁：悬液中分散的细胞很快就贴附

4、在瓶壁上，悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。称为细胞贴壁。要求：要求：培养瓶或培养皿的内外表光滑、无毒、易于贴培养瓶或培养皿的内外表光滑、无毒、易于贴附。附。细胞的接触抑制：细胞的接触抑制：细胞进展有丝分裂，数量不断增多，当贴壁细胞分细胞进展有丝分裂，数量不断增多，当贴壁细胞分裂生长到外表互相接触时，细胞就会停顿分裂增殖，这裂生长到外表互相接触时，细胞就会停顿分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。种现象称为细胞的接触抑制。2021/1/128第八页，共40页。接触抑制定义：细胞从接种到长满底物外表后，由于细胞繁殖数量增多互相接触后，不再增加。2021/1/129第九页，共40页

5、。动物细胞培养的过程:2021/1/1210第十页，共40页。动物细胞培养过程：动物细胞培养过程：动物胚胎或幼龄动动物胚胎或幼龄动物的组织、器官物的组织、器官细胞悬浮液细胞悬浮液胰蛋白酶胰蛋白酶分解弹性纤维、胶原蛋白分解弹性纤维、胶原蛋白1010代细胞代细胞原代培养原代培养5050代细胞代细胞传代培养传代培养细胞株细胞株无限传代无限传代细胞系细胞系遗传物质遗传物质改变改变遗传物质未遗传物质未改变改变原理：细胞增殖有丝分裂原理：细胞增殖有丝分裂结果：细胞群，细胞产物结果：细胞群，细胞产物2021/1/1211第十一页，共40页。细胞株：原代细胞一般传至细胞株：原代细胞一般传至1010代左右细胞生

6、长代左右细胞生长停滞，大部分细胞衰老死亡，少数细胞存活到停滞，大部分细胞衰老死亡，少数细胞存活到40504050代，这种传代细胞为细胞株。代，这种传代细胞为细胞株。细胞系：细胞株传代至细胞系：细胞株传代至5050代后又出现细胞生代后又出现细胞生长停滞状态，只有部分细胞由于遗传物质的改变长停滞状态，只有部分细胞由于遗传物质的改变，使其在培养条件下可以无限制传代，这种传代，使其在培养条件下可以无限制传代，这种传代细胞为细胞系。细胞为细胞系。细胞株和细胞系的区别：细胞株和细胞系的区别：细胞系的遗传物细胞系的遗传物质改变，具有癌细胞的特点，失去接触抑制，容质改变，具有癌细胞的特点，失去接触抑制，容易传

7、代培养。易传代培养。2021/1/1212第十二页，共40页。原代培养：从机体取出后立即培养的细胞为原代培养：从机体取出后立即培养的细胞为原代细胞。培养的第原代细胞。培养的第1 1代细胞与传代细胞与传1010代以内代以内的细胞称为原代细胞培养。的细胞称为原代细胞培养。传代培养：将原代细胞从培养瓶中取出，配传代培养：将原代细胞从培养瓶中取出，配制成细胞悬浮液，分装到两个或两个以上的制成细胞悬浮液，分装到两个或两个以上的培养瓶中继续培养，称为传代培养。培养瓶中继续培养，称为传代培养。2021/1/1213第十三页，共40页。2021/1/1214第十四页，共40页。培养器皿2021/1/1215第

8、十五页，共40页。1、无菌、无毒的环境、无菌、无毒的环境 添加一定量的抗生素，定期更换培养液添加一定量的抗生素，定期更换培养液2、营养、营养葡萄糖、氨基酸、无机盐、微量元素、动物血葡萄糖、氨基酸、无机盐、微量元素、动物血清、血浆等。清、血浆等。3、温度和、温度和 度度；为。；为。4、气体环境：、气体环境：O2和和295%空气和空气和5%2作用作用 补充合成培养基中补充合成培养基中缺乏的物质缺乏的物质2021/1/1216第十六页，共40页。1 1消费蛋白质生物制品：病毒疫苗、干扰消费蛋白质生物制品：病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体等。素、单克隆抗体等。2 2获得大量自身的皮肤细胞，用于植皮。获得大

9、量自身的皮肤细胞，用于植皮。3 3用于检测有毒物质用于检测有毒物质4 4用于生理、病理、药理等方面的研究，用于生理、病理、药理等方面的研究，为治疗和预防疾病提供理论根据为治疗和预防疾病提供理论根据2021/1/1217第十七页，共40页。如：如：动物细胞培养动物细胞培养就是从动物有机体就是从动物有机体中取出相关的组织中取出相关的组织,将它分散成单个将它分散成单个细胞细胞,然后然后,放在适放在适宜的培养基中宜的培养基中,让让这些细胞生长和这些细胞生长和增殖增殖.2021/1/1218第十八页，共40页。2、为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官或组织做动物细胞培养材料？、为什么选用动物胚胎或幼龄个体

10、的器官或组织做动物细胞培养材料？1、动物细胞培养液的主要成分是什么？较植物组培培养基有何独特之处？、动物细胞培养液的主要成分是什么？较植物组培培养基有何独特之处？3、为什么培养前要将组织细胞分散成单个细胞？、为什么培养前要将组织细胞分散成单个细胞？4、动物细胞培养能否像绿色植物组织培养那样最终培养成新、动物细胞培养能否像绿色植物组织培养那样最终培养成新个体？个体？主要成分：葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清血浆等。主要成分：葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清血浆等。独特之处有：独特之处有：1、液体培养基、液体培养基 2、成分中有动物血清血浆等、成分中有动物血清血浆等因为这些组织或器

11、官上的细胞生命力旺盛，分裂才能强因为这些组织或器官上的细胞生命力旺盛，分裂才能强成块组织不利培养，分散了做成细胞悬浮液利于培养成块组织不利培养，分散了做成细胞悬浮液利于培养不能，动物细胞培养只能使细胞数目增多，不能发育成新的动物个体不能，动物细胞培养只能使细胞数目增多，不能发育成新的动物个体2021/1/1219第十九页，共40页。细胞的全能性细胞的全能性细胞株、细胞系细胞株、细胞系植物体或组织植物体或组织培养结果培养结果获得细胞获得细胞或细胞分泌蛋白或细胞分泌蛋白快速繁殖、培育无快速繁殖、培育无病毒植株等病毒植株等培养目的培养目的葡萄糖、动物血清葡萄糖、动物血清蔗糖、植物激素蔗糖、植物激素培

12、养基特有成分培养基特有成分液体培养基液体培养基固体培养基固体培养基培养基性质培养基性质细胞增殖细胞增殖原理原理动物细胞培养动物细胞培养植物组织培养植物组织培养比较工程比较工程2021/1/1220第二十页，共40页。动物细胞特点？动物细胞特点？分化潜能变窄：随着细胞分化程度的进步分化潜能变窄：随着细胞分化程度的进步而逐渐受到限制，分化潜能变窄，这是而逐渐受到限制，分化潜能变窄，这是指整体细胞而言。指整体细胞而言。细胞核仍具有全能性：细胞核，它含有细胞核仍具有全能性：细胞核，它含有保持物种遗传性所需的全套基因，而保持物种遗传性所需的全套基因，而且并没有因细胞分化而丧失基因，因且并没有因细胞分化而

13、丧失基因，因此高度分化细胞的细胞核仍具有全能此高度分化细胞的细胞核仍具有全能性性2021/1/1221第二十一页，共40页。根据动物细胞核仍具有全能性的特点根据动物细胞核仍具有全能性的特点,怎样将动物细胞的全能性表达怎样将动物细胞的全能性表达?利用动物体细胞核移植技术利用动物体细胞核移植技术2021/1/1222第二十二页，共40页。动物核移植：将动物的一个细胞的细胞核，移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育为动物个体。用核移植的方法得到的动物。克隆动物：2021/1/1223第二十三页，共40页。动物体细胞核移植技术动物体细胞核移植技术:将动物

14、的一个细胞的细胞核，移入一个已经去掉将动物的一个细胞的细胞核，移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育成动物个体。的胚胎，这个新的胚胎最终发育成动物个体。用核移植的方法得到的动物称为克隆动物用核移植的方法得到的动物称为克隆动物核移植核移植胚胎细胞核移植胚胎细胞核移植体细胞核移植体细胞核移植难度高为什么难度高为什么见课本见课本47面面受体细胞：受体细胞：M期的期的卵母细胞卵母细胞2021/1/1224第二十四页，共40页。2021/1/1225第二十五页，共40页。2021/1/1226第二十六页，共40页。

15、2021/1/1227第二十七页，共40页。以概念图的形式表示体细胞核移植过程？以概念图的形式表示体细胞核移植过程？取供体细胞取供体细胞取卵母细胞取卵母细胞 供体细胞培养供体细胞培养培养到培养到 M中期中期 卵母细胞去核卵母细胞去核 供体细胞注入去核的卵母细胞供体细胞注入去核的卵母细胞 供体核进入受体卵母细胞供体核进入受体卵母细胞 重组胚胎重组胚胎 代孕母牛代孕母牛 生出与供体遗传物质根本一样的个体生出与供体遗传物质根本一样的个体2021/1/1228第二十八页，共40页。卵细胞卵细胞C母绵羊子宫母绵羊子宫母绵羊母绵羊母绵羊母绵羊乳腺细胞乳腺细胞细胞质细胞质细胞核细胞核细胞核移植细胞核移植胚胎

16、移植胚胎移植早期胚胎早期胚胎多莉羊多莉羊分娩分娩卵裂卵裂融合后的卵细胞融合后的卵细胞细胞拆合技术细胞拆合技术妊娠妊娠多莉羊的培育过程多莉羊的培育过程2021/1/1229第二十九页，共40页。考虑题考虑题1 1、在进展体细胞核移植之前，为何要去掉、在进展体细胞核移植之前，为何要去掉受体卵母细胞的核？受体卵母细胞的核？卵母细胞的细胞质可使体细胞核的全能性得卵母细胞的细胞质可使体细胞核的全能性得以表达；卵母细胞体积比较大，容易操作；以表达；卵母细胞体积比较大，容易操作；卵母细胞的细胞质多，营养丰富，能为早期卵母细胞的细胞质多，营养丰富，能为早期胚胎的形成提供营养。胚胎的形成提供营养。2 2、为什么

17、选卵母细胞作核移植的受体细胞？、为什么选卵母细胞作核移植的受体细胞？为使核移植动物的遗传物质全部来自有利用为使核移植动物的遗传物质全部来自有利用价值的动物提供的体细胞。价值的动物提供的体细胞。2021/1/1230第三十页，共40页。3.3.用于核移植的供体细胞一般都选用传代用于核移植的供体细胞一般都选用传代1010代代以内的细胞，为什么？以内的细胞，为什么？10代以内的细胞保持一般保持正常二倍体的代以内的细胞保持一般保持正常二倍体的核型，未突变核型，未突变.考虑题考虑题二倍体的核型：是指染色体组在有丝分裂中二倍体的核型：是指染色体组在有丝分裂中期的表型，是染色体数目、大小、形态特征期的表型，

18、是染色体数目、大小、形态特征的总和的总和2021/1/1231第三十一页，共40页。考虑题考虑题4.4.细胞核移植消费的克隆动物是对体细胞供细胞核移植消费的克隆动物是对体细胞供体动物进展了体动物进展了100%100%的复制吗？为什么？的复制吗？为什么？不是，克隆动物绝大部分来自供体细胞核，但不是，克隆动物绝大部分来自供体细胞核，但核外还有少部分如线粒体来自受体卵母细核外还有少部分如线粒体来自受体卵母细胞胞.2021/1/1232第三十二页，共40页。2.体细胞核移植技术的应用前景体细胞核移植技术的应用前景2021/1/1233第三十三页，共40页。克隆动物的研究意义克隆动物的研究意义1.克隆动

19、物作为生物反响器，消费医用蛋白2.改进动物品种 3.治疗人类疾病，作为供体4.保护濒危动物体细胞核移植技术存在的问题体细胞核移植技术存在的问题1.许多克隆动物表现出遗传和生理缺陷，如体型过大，异常肥胖，发育困难，免疫失调等。2.成功率非常低及克隆动物食品的平安性问题。2021/1/1234第三十四页，共40页。知识构造知识构造动物细胞培养和核移植技术动物细胞培养动物细胞培养细胞培养的应用和概念细胞培养的应用和概念细胞培养的过程细胞培养的过程细胞培养的条件细胞培养的条件细胞培养技术的应用细胞培养技术的应用动物体细胞核移植动物体细胞核移植技术和克隆动物技术和克隆动物核移植技术和克隆动物的概念核移植

20、技术和克隆动物的概念体细胞核移植技术的过程体细胞核移植技术的过程体细胞核移植技术的应用前景体细胞核移植技术的应用前景体细胞核移植技术存在的问题体细胞核移植技术存在的问题2021/1/1235第三十五页，共40页。1 1、在动物细胞培养过程中遗传物质发生改变的细胞、在动物细胞培养过程中遗传物质发生改变的细胞 A A细胞系细胞系 B B细胞株细胞株 C C原代细胞原代细胞 D D传代传代细胞细胞 2 2、动物细胞工程技术的根底是、动物细胞工程技术的根底是 A.A.动物细胞交融动物细胞交融 B.B.单克隆抗体单克隆抗体 C.C.胚胎移植胚胎移植 D.D.动物细胞培养动物细胞培养AD 3.动物细胞培养

21、与植物细胞培养的重要区别在于动物细胞培养与植物细胞培养的重要区别在于 A.培养基不同；培养基不同；B.动物细胞培养不需要在无菌条件下进展；动物细胞培养不需要在无菌条件下进展；C.动物细胞可以传代培养，而植物细胞不能；动物细胞可以传代培养，而植物细胞不能；D.动物细胞可以大量培养，而植物细胞只能培动物细胞可以大量培养，而植物细胞只能培 养成植株。养成植株。141A教学反响教学反响2021/1/1236第三十六页，共40页。教学参考 1.进展动物细胞传代培养时用胰蛋白酶分散细胞，说明细胞间的物质主要是什么成分？用胃蛋白酶行吗？细胞间的成分主要是蛋白质。胃蛋白酶适宜的约为2，当6时，胃蛋白酶就会失去

22、活性，而胰蛋白酶作用的适宜环境为，多数动物细胞培养的适宜为，胃蛋白酶在此环境中没有活性。胰蛋白酶在此环境中活性较高，因此胰蛋白酶适宜用于细胞培养时的消化。2.胰蛋白酶真的不会把细胞消化掉吗？为什么？胰蛋白酶除了可以消化细胞间的蛋白质外，长时间的作用也会消化细胞膜蛋白，对细胞有损伤作用，因此必须控制好胰蛋白酶的消化时间。3.单层细胞培养：1957年，科学家采用胰蛋白酶消化处理和应用液体培养基的方法，获得了单层细胞培养。单层培养法的出现，对细胞培养的开展起了很大的推动作用。2021/1/1237第三十七页，共40页。4.为什么对动物细胞进展培养时通常要添加血清？血清中含有蛋白质、氨基酸、葡萄糖、激

23、素等，其中蛋白质为白蛋白和球蛋白；氨基酸有多种，是细胞合成蛋白质的根本成分，有些动物细胞不能合成，必须由培养液提供；激素有胰岛素、生长激素等促进细胞的生长、增殖、贴附。因此，细胞培养要保证细胞能顺利生长和繁殖，一般要添加1020%的血清。5.无血清培养：在科学研究中，有时需要明确界定培养液的成分，而血清中由于含有许多未知成分，会对研究结果有影响，因此，在进展细胞培养时，也可采用无血清培养。无血清培养基是在根本培养基中，添加一些的促进细胞生长和增殖的物质。6.去核方法：目前核移植技术中普遍使用的去核方法是显微操作去核法。还有人采用其他方法，如梯度离心、紫外光短时间照射、化学物质处理等。这些方法是在没有刺破透明带或卵母细胞质膜的情况下，去除细胞核或使卵细胞核变性，从而到达去核目的。2021/1/1238第三十八页，共40页。2021/1/1239第三十九页，共40页。第四十页，共40页。