骨髓检查组化免疫分型遗传学培训课件.pptx

1、l 骨髓标本采集要求 标本采集的注意事项标本采集的注意事项：形态检查抽吸量不超过0.2ml；同时进行多项检查应优先抽吸形态检查标本；涂片厚薄适宜，不少于4张，并同时制作配套的血片；作好标记；如干抽，此时应考虑作骨髓活检；多部位或对有压痛点或根据X线检查提示进行穿刺，以提高阳性率。抽吸骨髓液时，病人有特殊酸痛感；有骨髓小粒和脂肪滴；显微镜下可见到骨髓特有细胞，如巨核细胞、成骨细胞、破骨细胞、浆细胞、组织嗜碱细胞、纤维细胞和大量红系、粒系幼稚细胞等。返回返回、低倍镜检查、低倍镜检查1 1、确定骨髓标本的取材和涂片制作是否满意、确定骨髓标本的取材和涂片制作是否满意 骨髓穿刺液制成涂片后，肉眼观察，在

2、涂尾部见到散骨髓穿刺液制成涂片后，肉眼观察，在涂尾部见到散在的约粟粒大小呈浅肉色半透明的在的约粟粒大小呈浅肉色半透明的骨髓小粒骨髓小粒及少量及少量脂脂肪小滴肪小滴；在显微镜下见到较多；在显微镜下见到较多骨髓特有的细胞骨髓特有的细胞如各系如各系幼稚细胞及巨核细胞等，是穿刺成功的标志。幼稚细胞及巨核细胞等，是穿刺成功的标志。如如骨髓小粒骨髓小粒较少或缺如，较少或缺如，骨髓特有成份骨髓特有成份减少，提减少，提示骨髓可能有不同的外周血液稀释，为取材不良示骨髓可能有不同的外周血液稀释，为取材不良 如如脂肪滴脂肪滴增多，则表示红髓成份减少，反映骨髓增多，则表示红髓成份减少，反映骨髓增生减低增生减低插图插图

3、正常幼红细胞（主要是晚幼红细胞）的细胞核周围可见到15个呈蓝色细小的铁颗粒。1、帮助诊断多毛细胞白血病核型是指中期分裂相的全部染色体按Danvers体制排列而成。红细胞系统：约占有核细胞的20%c.含有铁颗粒的幼红细胞称为铁粒幼细胞。急性淋巴细胞白血病则呈阴性反应。4、再障时NAP活性增高；醛基与Schiff 液中的无色品红结合，形成紫红色化合物，定位于细胞质内。4、单核、组织、网状、巨核细胞ACP染色均呈阴性反应。5、其他血液病时NAP活性中度增高，恶组NAP活性降低。因此，POX染色对急性粒细胞白血病与急性淋巴细胞白血病的鉴别最有价值。4、用于识别不同分化阶段的细胞t(6;9)(p21-2

4、2;q34)2、种类骨髓增殖性疾病，如CML、真红、ET、IMF等；根据不同抗体组合可T、B淋巴细胞区分为不同分化阶段。CD34,33,13+结果：胞质中有红色颗粒、团块、均匀红色为阳性。有骨髓小粒和脂肪滴；2 2、判断骨髓增生程度（表、判断骨髓增生程度（表4-2-74-2-7）骨髓增生程度通常以骨髓中有核细胞的量来反映。骨髓增生程度通常以骨髓中有核细胞的量来反映。采用五级法采用五级法 有核细胞：成熟红细胞有核细胞占全部细胞百分率有核细胞/1000个成熟红细胞常见原因范围平均范围平均极度活跃1:0.52.01:150238.96521.07351.96白血病明显活跃1:5121:101043.

5、78230.77114.51增生贫血增生活跃1.16321:20111021.5363.6735.34正常骨髓增生减低1:35701:500.517.4119.6110.53慢性再障明显减低1:3001:200100/HP返回返回选择有核细胞分布均匀、结构清晰、着色良好的涂膜体选择有核细胞分布均匀、结构清晰、着色良好的涂膜体尾交界处部位作油浸镜检查。尾交界处部位作油浸镜检查。插图735735个为正常值个为正常值(1.5(1.5*3cm3cm涂片）。涂片）。如疟原虫）如疟原虫）返回4、单核、组织、网状、巨核细胞ACP染色均呈阴性反应。t(11;14)(p13;q11)有CD19、CD20、CD2

6、2等。2)、粒细胞减少：见于AA、粒细胞缺乏症或粒细胞减少症。t/del(11)(q23)t(8;14)(q24;q11)抽吸骨髓液时，病人有特殊酸痛感；5、其他血液病时NAP活性中度增高，恶组NAP活性降低。3、急性粒细胞白血病时，NAP积分值减低；正常幼红细胞（主要是晚幼红细胞）的细胞核周围可见到15个呈蓝色细小的铁颗粒。3、以及对某些血液病的诊断和鉴别诊断，疗效观察、发病机制探讨等均有一定价值。1、应注意WBC分类计数及形态观察；醛基与Schiff 液中的无色品红结合，形成紫红色化合物，定位于细胞质内。2、注意成熟RBC的形态有无异常。AML-M2（CD33阳性，呈棕黄色沉淀）1、帮助诊

7、断多毛细胞白血病二、骨髓细胞学检查的内容、方法和临床意义见第十章分子生物学检查中第三节染色体检查。低倍镜观察（取材 涂片 有核细胞增生 巨核细胞 病理细胞）M5b伴吞噬细胞增多2)、粒红比例增高：指粒/红比例大于5:1。【原理原理】血细胞中的过氧化物酶（peroxidase，POX）能分解试剂中的底物H2O2，释出新生态氧，使无色联苯胺氧化为蓝色联苯胺，后者与亚硝基铁氰化钠结合形成蓝黑色的颗粒，沉着于细胞质中。【结果结果】胞质中无蓝黑色颗粒者为阴性反应，出现细小颗粒、分布稀疏者为弱阳性反应，颗粒粗大而密集者为强阳性反应。【临床意义临床意义】过氧化物酶染色主要用于急性白血病类型的急性白血病类型的

8、鉴别鉴别。急性粒细胞白血病急性粒细胞白血病时，白血病细胞多呈强阳性反应；急性单核细胞白血病急性单核细胞白血病时呈弱阳性或阴性反应；急性淋巴急性淋巴细胞白血病细胞白血病则呈阴性反应。因此，POX染色对急性粒细胞白血病急性粒细胞白血病与急性淋巴细急性淋巴细胞白血病胞白血病的鉴别最有价值。APL：呈强阳性反应AML-M4：部分呈阳性反应，部分成弱阳性反应AML-M5：呈弱阳性ALL：呈阴性，3+4+。3、铁粒幼细胞性贫血铁粒幼细胞性贫血时，铁粒幼细胞增多，并可见到环状铁粒幼细胞。l阳性为蓝绿色沉淀阳性为蓝绿色沉淀+血色病+AA、铁粒幼贫血+感染+AA、铁粒幼贫血+NBM正常骨髓IDAMDS-RAS铁

9、染色，图中所指为环形铁粒幼红细胞铁染色，图中所指为环形铁粒幼红细胞 急淋急粒急单红白血病人体正常细胞有46条染色体，根据人类细胞遗传学命名的国际体制（ISCN），按其长短和着丝粒的位置编为AG 7组，包括122号常染色体及X和Y性染色体；【原理】血细胞中的过氧化物酶（peroxidase，POX）能分解试剂中的底物H2O2，释出新生态氧，使无色联苯胺氧化为蓝色联苯胺，后者与亚硝基铁氰化钠结合形成蓝黑色的颗粒，沉着于细胞质中。t/del(11)(q23)醛基与Schiff 液中的无色品红结合，形成紫红色化合物，定位于细胞质内。M5a/t(11q)2、溶血检查。红细胞系增多，如各种增生性贫血、真红

10、或继发性红细胞增多症等。CD34+、CD90+、Lin-被认为是造血干细胞的主要标志；某些感染性疾病结核病、布鲁菌病、原虫感染、反应性浆细胞增多如慢性炎症及感染性疾病、风湿性疾病、恶性肿瘤、过敏性疾病等；二、骨髓细胞学检查的内容、方法和临床意义2、细胞内铁 20%90%，平均值为65%。2)、粒红比例增高：指粒/红比例大于5:1。重视组化染色和其他实验检查表示47条染色体，增加了一条8号染色体，第9号与第22号染色体之间易位，断裂点分别在第9号染色体长臂3区4带和第22号染色体长臂1区1带。敏感性可高达10-4水平。3、以及对某些血液病的诊断和鉴别诊断，疗效观察、发病机制探讨等均有一定价值。因

11、此，POX染色对急性粒细胞白血病与急性淋巴细胞白血病的鉴别最有价值。二、骨髓细胞学检查的内容、方法和临床意义1、教师1、数量10%T-ALL病例HLA-DR可阳性表达【原理】人体内的总铁有一定量以铁蛋白和含铁血黄素的形式贮存在骨髓中的单核-吞噬细胞系统细胞的胞质内，幼红细胞胞质的线粒体中也含有含铁血黄素。因此血细胞染色体的检查与分析对遗传性血液病和恶性血液病的诊断、分型及病因和发病机制的研究有重要价值，也为遗传咨询、优生优育提供依据。醛基与Schiff 液中的无色品红结合，形成紫红色化合物，定位于细胞质内。t(8;21)(q22;q22)因此，铁染色是目前诊断缺铁性贫血及指导铁剂治疗的一项可靠

12、和切合临床实用的检验方法。AML-M2（CD33阳性，呈棕黄色沉淀）（CD13、34、38、33、MPO、HLA-DR阳性）（二）细胞免疫分型的临床应用急性淋巴细胞白血病的NAP积分值多增高；1、应注意WBC分类计数及形态观察；阳性反应为在骨髓小粒上见到呈浅蓝绿色均匀的无形物质，或呈蓝色或深蓝色的小珠状、粗颗粒状或蓝黑色的小块状物质。4、单核、组织、网状、巨核细胞ACP染色均呈阴性反应。48,XY,+4,t(9;22),+Ph3、各系列细胞比例改变的临床意义急性单核细胞白血病时一般正常或减低。（另有钙-钴法 略）【参考值】成人NAP阳性率10%40%；红细胞系增多，如各种增生性贫血、真红或继发

13、性红细胞增多症等。ALL：呈阴性，3%是CML的特征性异常染色体，检出率为90-95%，其中绝大多数为t(9;22)(q34;q11),称为典型易位。多看 1、数量 2、种类 如何学好血液细胞形态学如何学好血液细胞形态学多讨论 1、同事 2、老师多读书（细胞形态、发病情况）1、常见病 2、罕见病多请教 1、教师 2、图谱多会诊 1、同级医院 2、上级医院多沟通 1、临床 2、病人多观察 1、细胞少时（TB、R-S细胞）2、细胞多时（特殊类型：如红细胞样瘤细胞）重视组化染色和其他实验检查 1、常规（POX或SBB、NAP、PAS、Fe)；少见(NSE中性、酸性、碱性，ACP）；2、溶血检查。如疟

14、原虫）如疟原虫）（三）中性粒细胞碱性磷酸酶染色（三）中性粒细胞碱性磷酸酶染色（NAPNAP）（Neutrophilalkaline Phosphatase，NAP）【原理原理】偶氮偶联法。是血细胞内的碱性磷酸酶将基质液中的-磷酸萘酚钠水解，产生-萘酚与重氮盐偶联形成灰黑色沉淀，定位于细胞质内酶活性所在之处。（另有钙-钴法 略）【结果结果】碱性磷酸酶主要存在于成熟阶段的中性粒细胞（分叶核及杆状核），其他血细胞均呈阴性反应。【参考值参考值】成人NAP阳性率10%40%；积分值4080（分）。临床意义1、感染性疾病：细菌感染细菌感染与病毒感染病毒感染的鉴别2 2、慢性粒细胞白血病、慢性粒细胞白血病的

15、NAP活性明显减低，积分值常为0，类白血病反应类白血病反应的NAP活性极度增高。3 3、急性粒细胞白血病、急性粒细胞白血病时，NAP积分值减低；急性急性淋巴细胞白血病淋巴细胞白血病的NAP积分值多增高；急性单核急性单核细胞白血病细胞白血病时一般正常或减低。原理原理：过碘酸能将血细胞内的糖元氧化，生成醛基。醛基与Schiff 液中的无色品红结合，形成紫红色化合物，定位于细胞质内。结果结果：胞质中有红色颗粒、团块、均匀红色为阳性阳性。意义意义：红血病、红白血病红血病、红白血病阳性阳性，其他红细胞贫血红细胞贫血阴性阴性，巨核细胞巨核细胞阳性阳性。MDS-RAS铁染色，图中所指为环形铁粒幼红细胞铁染色，图中所指为环形铁粒幼红细胞 多观察 1、细胞少时（TB、R-S细胞）2、细胞多时（特殊类型：如红细胞样瘤细胞）