PCR污染的产生及防治课件.ppt
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- 关 键 词:
- PCR 污染 产生 防治 课件
- 资源描述:
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1、PCR污染的产生及防治污染的产生及防治分子生物学技术平台讨论会PCR系列之一2008-2-28PCR污染的监测污染的监测 PCR强大扩增能力强大扩增能力+检测的敏感性检测的敏感性经经30个周期后,特定个周期后,特定DNA片段的数量在理论上可增加片段的数量在理论上可增加109倍倍极微量的污染便可导致假阳性,尤其对定量造成很大的问题极微量的污染便可导致假阳性,尤其对定量造成很大的问题NTCNTC(No Template Control):(No Template Control):必须必须设置一个不含模板设置一个不含模板DNA但含有但含有PCR系统中所有其他成分的对系统中所有其他成分的对照反应,这
2、一对照管须在准备好所有其他照反应,这一对照管须在准备好所有其他PCR以后才进行吸加。以后才进行吸加。常见的常见的PCR contamination 常规常规PCR 荧光定量荧光定量PCRNTC432176598NTC引起引起PCR污染的原因污染的原因 模板间交叉污染模板间交叉污染容器被污染模板放置时,由于密封不严溢于容器外容器外粘有模板而造成相互间交叉污染模板吸取过程中,因气溶胶(aerosol)或其他原因引起移液器污染,从而导致交叉污染引起引起PCR污染的原因污染的原因 PCR试剂污染试剂污染PCR 试剂配制过程中,移液器、容器、水等原因造成试剂被PCR 核酸模板污染。引起引起PCR污染的原
3、因污染的原因 PCR产物污染产物污染-最主要最常见最主要最常见PCR 产物拷贝量大,极微量的PCR产物污染,就可形成假阳性。移液器吸取PCR产物进行电泳检测,同一支移液器去准备PCR mixPCR产物的气溶胶污染:一个气溶胶颗粒可能含几万个拷贝气溶胶(aerosol):悬浮于气体介质中粒径一般为 0.001m1000m的固体、液体微小粒子形成的胶溶状态散体系。空气与液体面摩擦时就可形成气溶胶,在操作时比较剧烈地摇动反应管,开盖时、吸样时及移液器的反复吸样都可形成气溶胶引起引起PCR污染的原因污染的原因 实验室中克隆质粒的污染实验室中克隆质粒的污染克隆质粒浓度高,另外在纯化过程中需用较多的用具及
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