临床生物化学方法的选择建立和评价课件.ppt

1、n教学目的教学目的 通过学习实验室主要危害，掌握临床实验室的生物安全及防护。n教学要求教学要求掌握掌握 临床实验室的生物安全及防护熟悉熟悉 实验室主要危害的来源了解了解 临床实验室的其他安全nSARS事件事件是指严重急性呼吸系统综合症严重急性呼吸系统综合症，于2002年在中国中国广东广东顺德首发，并扩散至东南亚乃至全球，直至2003年中期疫情才被逐渐消灭的一次全球性传染病疫潮。SARSSARS实验室人员感染实验室人员感染SARSSARS情况情况Dr.Carlo UrbaniDr.Carlo UrbaniWHOWHO的传染病专家，首次向世界报的传染病专家，首次向世界报告了告了SARSSARS病例

2、病例20032003年年3 3月月2929日在泰国曼谷因日在泰国曼谷因SARSSARS不治病逝，终年不治病逝，终年4646岁，是死于岁，是死于SARSSARS的首名的首名WHOWHO官员官员教训：l1967年德国马尔堡病毒实验室感染事件l2001年10月美国发生炭疽恐怖事件，造成人员伤亡和世界范围的社会恐慌l2003年9月新加坡国立大学研究生院实验室中感染SARS病毒l2003年12月一名台湾的SARS研究人员在实验室感染SARS病毒l2004年4月安徽、北京先后发现新的SARS病例，经证实分别来自于在中国疾病预防控制所实验室受到SARS感染的两名工作人员。加强实验室生物安全建设，防止无意或故

3、意造成加强实验室生物安全建设，防止无意或故意造成公共卫生危害事件。公共卫生危害事件。临床实验室安全重要性临床实验室安全重要性了解实验室生物感染方面的知识了解实验室生物感染方面的知识防止实验人员的感染防止实验人员的感染防止感染因子的外泄防止感染因子的外泄采取适当的生物安全防护措施采取适当的生物安全防护措施掌握正确的实验室操作方法掌握正确的实验室操作方法临床实验室安全的内容临床实验室安全的内容生物安全生物安全化学安全化学安全放射安全放射安全防火安全防火安全辐射安全辐射安全用电安全用电安全生物危害源生物危害源细菌（细菌（bacteriabacteria）：布鲁菌属、铜绿假单胞菌）：布鲁菌属、铜绿假单

4、胞菌属、衣原体属、肠道致病菌、结核分枝杆菌属、衣原体属、肠道致病菌、结核分枝杆菌病毒（病毒（virusvirus）：肝炎、）：肝炎、HIVHIV等等真菌（真菌（fungusfungus）：荚膜组织胞浆菌、真菌孢子）：荚膜组织胞浆菌、真菌孢子寄生虫（寄生虫（parasiteparasite）：疟原虫、利什曼原虫）：疟原虫、利什曼原虫 化学危害源化学危害源 易燃性化学药品 易爆性化学药品 腐蚀性化学药品 有毒性化学药品 二甲胺、0-联甲苯胺 叠氮化物 硫酸 乙醛 苯、苯胺、比啶2-乙醚 盐酸 银 丙酮、草酸 高氯酸 乙酸 甲酸、铬酸 甲醇、乙醚 苦味酸盐 三氯乙钠 三氯乙烯（致癌）羟基丙烷醇 硝基

5、苯 磷酸 三氯甲烷（致癌）二噁烷、四氢呋喃 二甲苯（致癌）常见的危险性化学药品常见的危险性化学药品 物理危害源物理危害源 L火的危害火的危害L电的危害：设备老化、无断路器和漏电保护电的危害：设备老化、无断路器和漏电保护器，未定期检查和测试电气设备等器，未定期检查和测试电气设备等L电离辐射电离辐射L噪声噪声 临床实验室生物污染的种类临床实验室生物污染的种类 根据生物污染的对象分为根据生物污染的对象分为n对空气的污染对空气的污染 气溶胶气溶胶n对水的污染对水的污染 污水的排出污水的排出n对人体的感染对人体的感染-吸入及接触污染物吸入及接触污染物 n对物体表面的污染对物体表面的污染-倾倒、不正确的擦

6、洗等倾倒、不正确的擦洗等 实验室获得性感染途径实验室获得性感染途径u经空气传播经空气传播 吸入含病原体的气溶胶、接种环操作、离心、振荡、打开培养皿等吸入含病原体的气溶胶、接种环操作、离心、振荡、打开培养皿等u经口传播经口传播 摄入病原体、工作区进餐、吸烟导致摄入病原体、工作区进餐、吸烟导致“手手-口污染口污染”u直接接种直接接种 针刺、划伤等针刺、划伤等u由皮下或黏膜接触由皮下或黏膜接触 戴隐形眼镜、彻底清洁手部戴隐形眼镜、彻底清洁手部u节肢动物媒介节肢动物媒介 喂养动物喂养动物临床实验室的生物安全防护临床实验室的生物安全防护 实验室生物安全防护实验室生物安全防护：在实验室环境下处理和保存感染

7、性物质的过程中在实验室环境下处理和保存感染性物质的过程中采用一系列的防护措施。包括采用一系列的防护措施。包括一级防护一级防护二级防护二级防护临床实验室的生物安全防护临床实验室的生物安全防护一级防护一级防护 采用规范的微生物技术和适当的安全设备，以保护实验室采用规范的微生物技术和适当的安全设备，以保护实验室工作人员和室内环境安全免受感染性物质污染。工作人员和室内环境安全免受感染性物质污染。二级防护二级防护 包括合理的实验室设施设计和严格规范的操作流程，保护包括合理的实验室设施设计和严格规范的操作流程，保护实验室外环境不受感染性物质污染。实验室外环境不受感染性物质污染。n三要素：实验室操作和技术、

8、安全设备、实验室设三要素：实验室操作和技术、安全设备、实验室设施设计施设计临床实验室的生物安全防护临床实验室的生物安全防护 根据处理微生物及毒素的危害程度分为根据处理微生物及毒素的危害程度分为 临床实验室生物安全水平（临床实验室生物安全水平（BSLBSL）分级分级生物安全生物安全1 1级（级（BSL-1BSL-1）生物安全生物安全2 2级（级（BSL-2BSL-2）生物安全生物安全3 3级（级（BSL-3BSL-3）生物安全生物安全4 4级（级（BSL-4BSL-4）基础实验室防护实验室等级最高典型的一级生物安全水平实验室（典型的一级生物安全水平实验室（BSL-1）通常对健康成人不致病、对实验

9、室人员及环境潜在危害性小的病原体在生物安全柜中进行可能发生气溶胶的操作程序。在生物安全柜中进行可能发生气溶胶的操作程序。门保持关闭并贴上适当的危险标志。门保持关闭并贴上适当的危险标志。潜在被污染的废弃物同普通废弃物隔开。潜在被污染的废弃物同普通废弃物隔开。典型的二级生物安全水平实验室典型的二级生物安全水平实验室（BSL-2）适用于对实验人员和环境中具有中等潜在危险的病原体。临床实验室的生物安全防护临床实验室的生物安全防护生物安全生物安全3 3级（级（BSL-3BSL-3）适用于可通过气溶胶传播的，可引起严重或致死性疾病适用于可通过气溶胶传播的，可引起严重或致死性疾病的病原体的操作。的病原体的操

10、作。生物安全生物安全4 4级（级（BSL-4BSL-4）适用于对人体具有高度的危险性，通过气溶胶途径传适用于对人体具有高度的危险性，通过气溶胶途径传 播或传播途径不明，目前尚无有效地疫苗或治疗方法的播或传播途径不明，目前尚无有效地疫苗或治疗方法的致病微生物及其毒素的实验操作。致病微生物及其毒素的实验操作。不同生物安全水平对实验室设施的要求不同生物安全水平对实验室设施的要求a a 在环境与功能上与普通流动环境隔离在环境与功能上与普通流动环境隔离 b b 取决于排风位置取决于排风位置 c c 取决于实验室中所使用的微生物因子取决于实验室中所使用的微生物因子 d d 例如：观察窗、闭路电视、双向通讯

11、设备例如：观察窗、闭路电视、双向通讯设备生物安全设备分类生物安全设备分类 生物安全柜生物安全柜（biosafety cabinet；biological safety cabinet）(一一)、生物安全柜的基本工作原理、生物安全柜的基本工作原理 生物安全柜生物安全柜 是防止操作处理过程中某是防止操作处理过程中某些含有危险性或未知性生物微粒发生气些含有危险性或未知性生物微粒发生气溶胶散逸的箱形溶胶散逸的箱形空气净化负压空气净化负压安全装置安全装置生物安全柜的基本设计的两个重要改进：生物安全柜的基本设计的两个重要改进：1、HEPA过滤器 2、HEPA过滤器+层流技术n生物安全柜的生物安全柜的工作原

12、理工作原理主要是将柜内空气向外主要是将柜内空气向外抽吸，使柜内保持负压状态，通过垂直气流来抽吸，使柜内保持负压状态，通过垂直气流来保护工作人员保护工作人员；外界空气经高效空气过滤器；外界空气经高效空气过滤器（high-efficiency particulate air filter,HEPA filter）过滤后进入安全柜内，以）过滤后进入安全柜内，以避免避免处理样品被污染处理样品被污染；柜内的空气也需经过；柜内的空气也需经过HEPA过滤器过滤后再排放到大气中，以过滤器过滤后再排放到大气中，以保护环境。保护环境。(二二)、生物安全柜的分类、生物安全柜的分类v根据防护程度的不同，通常将根据防护

13、程度的不同，通常将生物生物安全柜分为安全柜分为、级级，可适用，可适用于不同生物安全等级的媒质的操作于不同生物安全等级的媒质的操作CLASS ICLASS I一级生物安全柜一级生物安全柜级生物安全柜级生物安全柜v因不考虑处理样品是否会被进入柜内的空气污染，故因不考虑处理样品是否会被进入柜内的空气污染，故对进入柜内对进入柜内的空气洁净度要求不高的空气洁净度要求不高v空气的流动为空气的流动为单向、非循环式单向、非循环式，空气流经，空气流经HEPA过滤器后进入柜过滤器后进入柜内，通过工作台面后又被过滤、经排气口排出内，通过工作台面后又被过滤、经排气口排出v为为保护操作人员安全保护操作人员安全，其向内的

14、非循环吸入气流必须远离操作者，其向内的非循环吸入气流必须远离操作者，故要求在使用前方有操作窗口、无手套的故要求在使用前方有操作窗口、无手套的级生物安全柜时，避级生物安全柜时，避免人员在安全柜前快速走动或操作人员完成操作后将手臂快速从免人员在安全柜前快速走动或操作人员完成操作后将手臂快速从柜内抽出柜内抽出v为为保护环境，保护环境，安全柜中的气体在外排到大气以前必须先经过安全柜中的气体在外排到大气以前必须先经过HEPA过滤器过滤过滤器过滤 级生物安全柜级生物安全柜v级生物安全柜是指用于保护操作人员、处理级生物安全柜是指用于保护操作人员、处理样品安全与环境安全的通风安全柜样品安全与环境安全的通风安全

15、柜v通常适用于生物危险度等级为通常适用于生物危险度等级为1、2、3的媒质的媒质的操作。当有毒化学物质或放射性核物质被用的操作。当有毒化学物质或放射性核物质被用于微生物研究或制药的添加物时，应使用专为于微生物研究或制药的添加物时，应使用专为此目的设计制造的此目的设计制造的II级生物安全柜级生物安全柜 级生物安全柜为级生物安全柜为临床生物防护中应用最普遍临床生物防护中应用最普遍的一类生物的一类生物安全柜安全柜临临床中床中处理高浓度或大容量感染性材料处理高浓度或大容量感染性材料时，以时，以级生物安级生物安全柜应用最多全柜应用最多 CLASS II ACLASS II A生物安全柜生物安全柜B1型生物

16、安全柜型生物安全柜v维持穿过工作台开口面的最小平均吸入口风速维持穿过工作台开口面的最小平均吸入口风速（计算或测量值）为（计算或测量值）为0.5m/s（100ft/min）v经经HEPA过滤器过滤后的垂直气流中的绝大部过滤器过滤后的垂直气流中的绝大部分是由未污染的循环吸入气流组成（即分是由未污染的循环吸入气流组成（即柜内柜内70%气体通过排气口气体通过排气口HEPA过滤器排除，过滤器排除，30%的气体通过供气口的气体通过供气口HEPA过滤器再循环至过滤器再循环至工作区工作区）v经经HEPA过滤器过滤后的大部分污染的垂直气过滤器过滤后的大部分污染的垂直气流，通过专用风道过滤后排入大气流，通过专用风

17、道过滤后排入大气v所有被生物污染的风道和静压箱应保持负压，所有被生物污染的风道和静压箱应保持负压，或被负压的风道和静压箱包围或被负压的风道和静压箱包围 CLASS II B1CLASS II B1生物安全柜生物安全柜级级B2型生物安全柜型生物安全柜v维持穿过工作台开口面的最小平均吸入口风速（计算维持穿过工作台开口面的最小平均吸入口风速（计算或测量值）为或测量值）为0.5m/s（100ft/min）v经经HEPA过滤器过滤后的垂直气流是由实验室或室外过滤器过滤后的垂直气流是由实验室或室外空气送入的（即：空气送入的（即：安全柜中排出的气体不进入垂直气安全柜中排出的气体不进入垂直气流的循环过程流的循

18、环过程）v所有的吸入气流和垂直气流经所有的吸入气流和垂直气流经HEPA过滤器过滤后排过滤器过滤后排入大气，入大气，不再进入安全柜循环或返回实验室不再进入安全柜循环或返回实验室v所有污染的风道和静压箱应保持负压，或是被直接排所有污染的风道和静压箱应保持负压，或是被直接排风的风道和静压箱包围风的风道和静压箱包围 CLASS II B2CLASS II B2生物安全柜生物安全柜级生物安全柜级生物安全柜v级生物安全柜是级生物安全柜是完全密闭、不漏气结构完全密闭、不漏气结构的通的通风安全柜风安全柜v工作空间内为经工作空间内为经HEPA过滤器净化的无涡流的过滤器净化的无涡流的单向流空气单向流空气v安全柜正

19、面上部为观察窗，下部为手套箱式操安全柜正面上部为观察窗，下部为手套箱式操作口。在安全柜内的操作是通过与安全柜相连作口。在安全柜内的操作是通过与安全柜相连接的橡皮手套进行的接的橡皮手套进行的CLASS II B3CLASS II B3生物安全柜生物安全柜CLASS IIICLASS III生物安全柜（手套柜）生物安全柜（手套柜）临床实验室的安全设备临床实验室的安全设备 生物安全柜生物安全柜高压灭菌器高压灭菌器临床实验室的安全设备临床实验室的安全设备各种冲淋洗眼器各种冲淋洗眼器 安全防护用具（个体防护）安全防护用具是避免操作人员暴露于气溶胶、喷溅物以及意外接种等危险的一个屏障。可根据工作的性质来选

20、择。（一）实验服（一）实验服 实验服包括一般操作服即工作服、隔离衣、连体衣的防护效果较一般操作服好，因此更适用于在微生物学实验室以及生物安全柜中的操作。需进一步防护时应在实验服或隔离衣外面穿上围裙。注意这些防护服、裙不能穿离实验室区域。（二）护目镜和面罩（二）护目镜和面罩（三）手套（三）手套1、一次性手术用手套（用于实验室一般操作和处理感染性物质、血液、体液时）。2、替代加粉乳胶手套（用于可发生皮炎及速发型超敏反应等变态反应者）。3、不锈钢网孔手套（在进行尸体解剖等可能接触尖锐器械情况时）。安全防护用具（个体防护）安全防护用具（个体防护）安全防护用具（个体防护）（四）鞋（四）鞋 应防滑，从事可

21、能出现液体材料漏出的工作应穿防水鞋。进入特殊区域（需防静电）或SBL3和SBL4实验室要求使用专用鞋。（一次性或橡胶鞋）感染性微生物危险度等级分类感染性微生物危险度等级分类n（国家规定和法律法规）（国家规定和法律法规）n2004年11月5日，国务院69次常务会议通过中华人民共和国国务院424号令，病原微生物实验室生物安全管理条例n总理 温家宝 2004年11月12日感染性微生物危险度等级分类感染性微生物危险度等级分类n人间传染的病原微生物名录 （中华人民共和国卫生部制定）2006年1月11日n-是临床实验室进行生物危害评估和设是临床实验室进行生物危害评估和设立生物安全等级的重要指南立生物安全等

22、级的重要指南感染性微生物危险度等级分类感染性微生物危险度等级分类 危险度危险度1 1级级 不太可能引起人或动物致病的微生物。不太可能引起人或动物致病的微生物。危险度危险度2 2级级 病原体能够对人或动物致病，但对实验室工作人病原体能够对人或动物致病，但对实验室工作人员不易导致严重危害。对感染有有效的预防和治疗员不易导致严重危害。对感染有有效的预防和治疗措施。措施。（个体危险中等，群体危险低）（个体危险中等，群体危险低）危险度危险度3 3级级n病原体通常能引起人或动物的严重疾病，但一般不会病原体通常能引起人或动物的严重疾病，但一般不会发生感染个体向其他个体的传播，并且对感染有有效发生感染个体向其

23、他个体的传播，并且对感染有有效的预防和治疗措施。的预防和治疗措施。（个体危险高，群体危险低）（个体危险高，群体危险低）危险度危险度4 4级级n病原体通常能引起人或动物的严重疾病，并且很容易病原体通常能引起人或动物的严重疾病，并且很容易发生个体之间的直接或间接传播，对感染一般没有有发生个体之间的直接或间接传播，对感染一般没有有效的预防和治疗措施。效的预防和治疗措施。（个体和群体危险均高）（个体和群体危险均高）（三）实验室生物安全防护水平（三）实验室生物安全防护水平危险危险度度安全安全水平水平实验室类型实验室类型实验操作实验操作安全设施安全设施4级级BSL4最高防护（最高防护（P4）实验室危险病实

24、验室危险病原体研究原体研究BSL3+气锁气锁入口、出口淋入口、出口淋浴浴+污染品特污染品特殊处理殊处理III级或级或II级生物安全柜级生物安全柜+正正压服，双开门高压灭菌锅压服，双开门高压灭菌锅（穿过墙壁、墙体）、经过（穿过墙壁、墙体）、经过滤空气，人员安全监控滤空气，人员安全监控3级级BSL3防护（防护（P3）实）实验室专门特殊验室专门特殊的诊断研究的诊断研究BSL2+特殊防特殊防护服护服+准入制准入制度度+定向气流定向气流生物安全柜：密闭消毒；通生物安全柜：密闭消毒；通风系统；密闭消毒；通风系风系统；密闭消毒；通风系统；双门入口；人员安全监统；双门入口；人员安全监控。控。2级级BSL2基础

25、（基础（P2）实）实验室初级卫生验室初级卫生服务，诊断研服务，诊断研究究微生物操作规微生物操作规范（范（GMT）、）、防护服、生物防护服、生物危险标志危险标志开放实验台；生物安全柜；开放实验台；生物安全柜；（BSC）防护可能产生的气防护可能产生的气溶胶溶胶；现场高压灭菌锅；建；现场高压灭菌锅；建议向内气流通风系统议向内气流通风系统（HEPA过滤排风）。过滤排风）。1级级BSL1基础（基础（P1）实）实验室基础教学、验室基础教学、研究研究标准微生物学标准微生物学操作规程操作规程开放实验台；不需要安全设开放实验台；不需要安全设施。施。临床实验室的消毒与灭菌临床实验室的消毒与灭菌抑制和杀死病原微生物

26、抑制和杀死病原微生物物理消毒灭菌方法物理消毒灭菌方法 化学消毒灭菌法化学消毒灭菌法临床实验室的消毒与灭菌临床实验室的消毒与灭菌 物理消毒灭菌方法物理消毒灭菌方法 热力灭菌法热力灭菌法 干热：高温使菌体蛋白分子变性及细胞质浓缩使新陈代谢干热：高温使菌体蛋白分子变性及细胞质浓缩使新陈代谢受到障碍而死亡。（焚烧、干烤、红外线）受到障碍而死亡。（焚烧、干烤、红外线）湿热：最常用，使菌体蛋白变性、凝固；细菌核酸降解；湿热：最常用，使菌体蛋白变性、凝固；细菌核酸降解；损伤细胞膜。损伤细胞膜。辐射杀菌法辐射杀菌法通过紫外线照射和射线，使菌体蛋白光解、变性、核酸酶通过紫外线照射和射线，使菌体蛋白光解、变性、核

27、酸酶被破坏。被破坏。临床实验室的消毒与灭菌临床实验室的消毒与灭菌n超声波杀菌法超声波杀菌法 利用超声波通过水时产生的腔化作用，造成细菌利用超声波通过水时产生的腔化作用，造成细菌的崩破与裂解。的崩破与裂解。n 滤过除菌法滤过除菌法 过滤除去细菌的方法。过滤除去细菌的方法。临床实验室的消毒与灭菌临床实验室的消毒与灭菌 化学消毒灭菌法化学消毒灭菌法n浸泡法、擦拭法、薰蒸法、喷雾法、浸泡法、擦拭法、薰蒸法、喷雾法、环氧乙烷气体密闭消毒法环氧乙烷气体密闭消毒法临床实验室的消毒与灭菌临床实验室的消毒与灭菌n消毒剂的种类消毒剂的种类n高效高效：甲醛、戊二醛、过氧乙酸、环氧乙烷、有机汞化合物，可杀灭细菌、病毒

28、、真菌、芽孢在内的一切微生物。n中效中效：乙醇、酚类碘、含氯消毒剂等，可杀灭芽孢以外的其他各种微生物。n低效低效：苯扎溴铵（新洁尔灭）、氯己定（洗必泰）等，杀灭结核分枝杆菌以外的病原体。临床实验室临床实验室感染性废物感染性废物的处理的处理 废物的隔离废物的隔离 废物的包装废物的包装 废物的存放废物的存放 废物的转运废物的转运 废物的处理方法废物的处理方法 焚烧焚烧 压力蒸汽灭菌压力蒸汽灭菌 干热处理干热处理 气体灭菌气体灭菌 化学消毒化学消毒 最常用临床实验室应急事故处理临床实验室应急事故处理容器破碎及感染性物质溢出时的处理容器破碎及感染性物质溢出时的处理 纸巾覆盖纸巾覆盖-消毒剂消毒剂-清理

29、清理-消毒剂擦拭污染区域消毒剂擦拭污染区域潜在危害性气溶胶释放时的处理潜在危害性气溶胶释放时的处理撤离、张贴撤离、张贴“禁止进入禁止进入”标志，清除污染后，方可进入标志，清除污染后，方可进入刺伤、切割伤或擦伤时的处理刺伤、切割伤或擦伤时的处理 潜在感染性物质的食入潜在感染性物质的食入 离心管破裂时的处理离心管破裂时的处理化学药品中毒时的应急处理化学药品中毒时的应急处理吞食时的应急处理吞食时的应急处理沾着皮肤时的应急处理沾着皮肤时的应急处理进入眼睛时的应急处理进入眼睛时的应急处理化学品溅溢紧急救助：n除去被溅溢的衣服n立刻冲洗被溅溢的皮肤n如果溅溢严重或进入眼睛，立刻用紧急冲淋装置、冲眼装置冲洗。n寻医救治 激光危险激光危险 小心辐射小心辐射 临床实验室危害的警示标识临床实验室危害的警示标识临床实验室危害的警示标识临床实验室危害的警示标识 临床实验室危害的警示标识临床实验室危害的警示标识 临床实验室危害的警示标识临床实验室危害的警示标识 出口照明指示出口照明指示 CO2CO2灭火器灭火器临床实验室危害的警示标识临床实验室危害的警示标识 禁止阻塞 禁止锁闭 禁止用水灭火 禁止吸烟NO OBSTERUCTING NO LOCKING NO WATERING TO NO SMOKING PUT OUT THE FIRE临床实验室危害的警示标识临床实验室危害的警示标识