过敏原特异性IgE检测临床意义课件.ppt

1、过敏原特异性过敏原特异性IgE检测的临床意义检测的临床意义 过敏(变态反应)：由免疫机制介导的高敏反应，是免疫系统对通常情况下无害的物质发生的免疫应答。Johansson et al.JACI,2004 基本概念?发病率成倍增长，约25-35%，尤其儿童?严重患者迅速增多?预防和治疗困难 流行现状 IgG介导 形成免疫复合物导致很多慢性疾病 IgE 介导 以组胺的释放为基础 迅速发病(1h)大量过敏疾病 T细胞介导 IgG或IgM介导 直接针对靶细胞的免疫反应 型 过敏 Allergy 型 型 型 发病机制 耐 受 Treg IgG/IgA 变态反应 Th2 IgE 发病机制 耐 受 Treg

2、 IgG/IgA 变态反应 Th2 IgE 发病机制 肺 皮肤 系统 呼吸器官 常见靶器官?荨麻疹?接触性皮炎?特应性皮炎?药疹 常见疾病?过敏性鼻炎?过敏性哮喘?过敏性休克?过敏原特异性IgE检测的临床意义 4ALLERGYThe allergy marchRespiratoryproblemsPersistentatopicdermatitisAsthmaGastrointestinaldisordersAtopicdermatitisNasal polypsOtitismediaIgEIgEIgEIgEIgEWheezeEczema变态反应进程?透皮免疫是致敏的重要途径 花生过敏的相关因

3、素：Lack G,et al.N Engl J Med.2003;348:977-85.?半岁前的湿疹?含花生油的护肤品?过敏家族史?食用豆奶及相关食品 明确过敏原的重要意义 明确诊断 合理解释 有效回避 特异性免疫治疗 吸入过敏原 食物过敏原 接触过敏原 空气中的吸入过敏原(例如.植物花粉,动物毛发,室内灰尘或虫螨等)过敏原过敏原 通过胃肠道吸收(例如.鱼、肉、蛋、坚果和蔬菜等)吸入过敏原 食物过敏原 接触过敏原 过敏原过敏原 皮肤接触（例如：金属饰品、化妆品和生活日用品等）吸入过敏原 食物过敏原 接触过敏原 过敏原过敏原 I I型变态反应的发病机制型变态反应的发病机制IgE IgE Bur

4、ks AW.Lancet 2008;371,9623:1538-1546 肥大细胞及其释放的介质肥大细胞及其释放的介质 Burks A.N Engl J Med 2008;358:79-81?特异性特异性IgE IgE 皮内注射试验或点刺试验 体外特异性IgE 变态反应科的过敏原检测 点刺试验的优点及局限性?快捷方便?结果直观?新鲜食物 优点?应用抗组胺药物限制?激发严重过敏风险?皮肤划痕征?严重皮炎 局限 点刺液的标准化问题 Bet v 1 含量(A-F六个厂家)Der p 1和Der p 2 含量(A-G七个厂家)Van Ree R.JACI 2007;119:270-277(birch&

5、mite)Focke M et al.Clin Exp Allergy 2008;38:1400-8(grass)Brunetto et al.Allergy 2010;65:184-90(mite)无标准化SPT检测试剂；不同厂家，甚至同一厂家不同批次间变异均较大；点刺试验的诊断价值?对于不同的变应原，其诊断价值也有不同：吸入性变应原：主要的和高效的诊断方法；食物：可靠性较低,大量不相关的敏感性；药物：预测价值很低 体外过敏原sIgE检测方法?放免吸附试验(RAST)?酶联免疫试验(EAST)?荧光酶免分析 (FEIA)?免疫捕获分析(REAST)IgG IgA IgM IgD IgE 分子

6、量 道尔顿 150,000 160,000 900,000 185,000 200,000 血清浓度 8-16 mg/ml 1.4-4 mg/ml 0.5-2 mg/ml 0-0.4 mg/ml 17-450 ng/ml%Ig 80 13 6 0.1 0.002 CHO细胞 表达百分比 3 8 12 13 12 免疫球蛋白免疫球蛋白 CAP，就是一个很小的类似“帽状”的新型固相载体，其内置有多孔性、弹性和亲水性的纤维素粒。由于此粒多孔，增加了与过敏原接触的表面积，可吸附更多的过敏原。根据固相载体亦可将RAST FEIA分为三类，即试管法、纸片法和CAP法。变应原结合的量：CAP法是纸片法的3倍

7、，试管法的150倍。变应原结合的量越高，检测灵敏度越高。ImmunoCAPImmunoCAP法法 免疫捕获法免疫捕获法 免疫捕获法原理免疫捕获法原理 免疫捕获 e.g.ALLERG-O-LIQ Anti-IgE HRP Streptavidin Allergen Biotin Non-specific IgE sIgE sIgG Anti-IgE enzyme 酶免吸附(荧光酶免)e.g.ImmunoCAP?Allergen Substrate Substrate Non-specific IgE sIgG sIgE sIgE 福克全自动过敏原定量分析系统 ALLERG-O-LIQ-SYSTE

8、M?ALLERG-O-LIQ免疫捕获法是一种由免疫捕获法(REAST)发展而来的检测系统。其原理是将抗人IgE抗体包被在微孔板上捕获样品中的IgE，再用过敏原-生物素试剂与特异性IgE结合，最后通过与显色底物反应将特异性IgE检测出来。检测报告解读 只查不问只查不问 方法不对方法不对 不会判读不会判读 该查不查该查不查 什么都查什么都查 目前过敏原检测存在的问题 Magic Lite Allergen Menu Sales Frequencies(sIgE Allergen products without mixes)0%10%20%30%40%50%60%70%80%90%100%0501

9、00150200250300350No.of Allergens(Menu)Cumulated Total TestsStatistics:14 allergens comprises 50%of total tests sold53 allergens comprises 80%of total tests sold127 allergens comprises 95%of total tests sold207 allergens comprises 99%of total tests sold92 allergens comprises 1%of total tests soldi.e.

10、299 allergens comprises 100%of total tests soldSource:Magic Lite Sales sep 1999 through aug 20022.0 Mill test sold要测试多少过敏原才够?99%的过敏症疾病只是由207种过敏原所组成 有关Cutoff值的问题?敏感性=真阳性/（真阳性+假阴性）?特异性=真阴性/（假阳性+真阴性）?PPV（阳性预期值）=真阳性/（真阳性+假阳性）诊断?NPV（阴性预期值）=真阴性/（假阴性+真阴性）随访?Cutoff值应根据过敏原种类、研究人群和研究目的（诊断，随访）进行调整。判定结果流程判定结果流程

11、 特应性皮炎的特征 T细胞及其释放的细胞因子是AD发病的核心环节 什么叫特应性斑贴？?Atopy patch test(APT)is defined as a patch test procedure to assess delayed type hypersensitivity reactions against those protein allergens known to elicit IgE-mediated type I reactions in atopic patients?是指用于分析蛋白过敏原引起的迟发型超敏反应的一种斑贴试验，这些蛋白过敏原在特应性体质患者通常引起 IgE

12、介导的I型变态反应 Curr Allergy Asthma Rep(2013)13:539544 特应性皮炎的发病机制 特应性皮炎患者黏膜和皮肤内LCs表面IgE受体水平显著高于正常人 Gould HJ,et al.Nat Rev Immunol.2008 特应性皮炎的发病机制 N Eng J Med(2008)358:148394 特异性IgE的作用 特应性斑贴与普通斑贴和点刺 试验种类 特应性斑贴 普通斑贴 点 刺 反应类型 IV型 IV型 I型 适应症 特应性皮炎，过敏性鼻炎，哮喘，嗜酸性肠病 接触性皮炎，湿疹 特应性皮炎，过敏性鼻炎，哮喘，嗜酸性肠病 试 剂 蛋白(吸入和食入抗原)半抗

13、原(接触性)蛋白(吸入和食入抗原)基 质 凡士林 凡士林或水凝胶 溶液 器 材 12mm直径斑试器 6mm直径斑试器 点刺针 部 位 上背部 上背部 前臂 时 间 48小时和72小时 48小时和72小时 15分钟 判 读 红斑、丘疹、水疱 红斑、丘疹、水疱 红斑、风团 禁 忌 激素及免疫移植剂 激素及免疫移植剂 激素及免疫移植剂 特应性斑贴的病理生理?组织活检显示：APT后24小时皮损表现为Th2细胞因子模式，48小时表现为Th1模式，与AD的生理病理特征一致?外周血T细胞发生抗原特异性活化的患者的APT的阳性率高?APT应用后引起皮肤内炎症性树突状表皮细胞的迅速增多?APT应用后导致局部透皮

14、水份尚失显著增多?免疫组化显示对螨抗原APT阳性患者的表皮LCs结合IgE增多 J Allergy Clin Immunol.1992;90:184193 Clin Exp Allergy.1999;29:513521 J Allergy Clin Immunol.2003;111:869874.Br J Dermatol.1996;135:560 565 J Allergy Clin Immunol.2000;105:1008 1016 特应性斑贴的应用?特异性IgE阴性的内源性(intrinsic)AD患者具有一定的APT阳性率：7%-66.6%?APT在特异性IgE阳性的过敏性鼻炎和哮喘

15、患者的阳性率较高，提示呼吸道I型反应也合并IV型反应，APT也可以作为呼吸道过敏原的激发试验。J Allergy Clin Immunol.2003;111:195197 Allergy.2003;58:426429 Allergy.2004;59:1318 1323 Allergy.2003;58:828 Pediatr Allergy Immunol.2005;17:346 350 特应性斑贴的应用?APT与临床的相关性优于SPT?IgE水平高，则APT阳性率高?特应性体质患者APT阳性率高于非特应性体质?皮损在暴露部位的患者的APT阳性率高与非暴露部位皮损患者(69%vs 39%)与临床特征的相关性 Curr Allergy Asthma Rep(2013)13:539544?点刺试验点刺试验?体外特异性体外特异性IgE I型变态反应型变态反应 特异性IgE 小结 根据临床特征合理选择检测方法根据临床特征合理选择检测方法 检测结果进行正确的判读检测结果进行正确的判读 谢谢！