血液分析仪及其临床应用课件整理.ppt
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1、血液分析仪及其临床应用ppt课件血液分析仪(血液分析仪(hematology analyzer,HA):临床血液一般检查最常用仪器。):临床血液一般检查最常用仪器。50年代,美国库尔特(年代,美国库尔特(W.H.Coulter)发)发明电子血细胞计数仪并申请专利。明电子血细胞计数仪并申请专利。血液分析仪优势:血液分析仪优势:检测项目多检测项目多速度快速度快精度高精度高易操作易操作一、检测原理一、检测原理检测功能:检测功能:细胞计数功能细胞计数功能细胞分类功能细胞分类功能 检测原理分为检测原理分为2类:类:(一)电阻抗法(一)电阻抗法1.电阻抗原理电阻抗原理(principle of elect
2、rical i m p e d a n c e),又 称 库 尔 特 原 理,又 称 库 尔 特 原 理(Coulter principle)Couler计数原理计数原理 孔电流 真空 内电极 外电极 -+血细胞 悬液 标本杯2.计数部件结构组成计数部件结构组成等渗电解质溶液等渗电解质溶液细胞悬液细胞悬液小孔管(传感器小孔管(传感器transducer)宝石孔)宝石孔(直径(直径 100m,厚度约,厚度约75m)脉冲数量和大小反映细胞:脉冲数量和大小反映细胞:数量数量体积大小体积大小3.白细胞计数和分类计数原理白细胞计数和分类计数原理仪器将体积为仪器将体积为35450fL的血细胞,分为的血细胞
3、,分为256个通道(个通道(channel)。)。每个通道:每个通道:1.64fl根据细胞大小,分别置于不同的通道中,根据细胞大小,分别置于不同的通道中,显 示 血 细 胞 体 积 分 布 直 方 图显 示 血 细 胞 体 积 分 布 直 方 图(Histogram)。)。经溶血素处理脱水后,血细胞体积大小发经溶血素处理脱水后,血细胞体积大小发生了变化!生了变化!第一群(第一群(3590fl)小细胞区:淋巴细胞)小细胞区:淋巴细胞(体积最小):一般在(体积最小):一般在3590fl。第二群(第二群(90160fl)是单个核细胞区,)是单个核细胞区,(中间细胞):(中间细胞):单核细胞、嗜酸性粒
4、细胞、嗜碱性粒细胞、单核细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、原始、幼稚细胞、异常细胞等原始、幼稚细胞、异常细胞等第三群(第三群(160fl以上)大细胞区:嗜中性粒以上)大细胞区:嗜中性粒细胞(体积最大):一般在细胞(体积最大):一般在135-350fl三分群血液分析仪正常白细胞分类模式图(直方三分群血液分析仪正常白细胞分类模式图(直方图)图)35 90 160 300 400 450(fl)%仪器组成:仪器组成:信号发生器信号发生器 放大器放大器阈值调节阈值调节甄别器甄别器整形器整形器 计数系统计数系统 2.电阻抗法红细胞检测原理电阻抗法红细胞检测原理 (1)红细胞计数和血细胞比容测定)红细胞计
5、数和血细胞比容测定与白细胞计数相似。与白细胞计数相似。(%)100 200 300 400(fl)(2)(2)血红蛋白测定:血红蛋白与溶血剂中的血红蛋白测定:血红蛋白与溶血剂中的特定试剂结合形成一种血红蛋白衍生物,特定试剂结合形成一种血红蛋白衍生物,在在530530550nm550nm下进行比色。下进行比色。ICSHICSH推荐用氰化高铁法(推荐用氰化高铁法(540nm540nm比色)。比色)。非氰化溶血剂,如非氰化溶血剂,如SDS-HbSDS-Hb。(3)(3)红细胞其他参数检测红细胞其他参数检测 3.3.电阻抗法血小板检测原理电阻抗法血小板检测原理 血小板计数(血小板计数(platelet
6、,PLTplatelet,PLT):):随红细胞在一个系统中进行检测。随红细胞在一个系统中进行检测。直方图在直方图在2 228fl28fl(不同仪器不一)。(不同仪器不一)。血小板平均体积(血小板平均体积(mean platelet volume,mean platelet volume,MPVMPV)。)。10 20 30(fl)10 20 30(fl)%(二)光散射法血液分析仪检测原理(二)光散射法血液分析仪检测原理 组合应用组合应用电学电学光学光学细胞化学等细胞化学等细胞流电学和光学检测图(细胞流电学和光学检测图(AcT 5diffAcT 5diff)光散射法白细胞检测原理类别光散射法白
7、细胞检测原理类别(1 1)激光与细胞化学法)激光与细胞化学法 1 1)过氧化物酶检测通道:)过氧化物酶检测通道:嗜酸性粒细胞、嗜中性粒细胞过氧化物酶活性比嗜酸性粒细胞、嗜中性粒细胞过氧化物酶活性比单核细胞强单核细胞强淋巴细胞、嗜碱粒细胞无过氧化物酶活性。淋巴细胞、嗜碱粒细胞无过氧化物酶活性。散射图定位:散射图定位:X X轴为吸光率(酶反应强度)、轴为吸光率(酶反应强度)、Y Y轴轴为光散射(细胞大小)显示检测结果。为光散射(细胞大小)显示检测结果。2 2)嗜碱性粒细胞)嗜碱性粒细胞/分叶核检测通道分叶核检测通道。(2 2)容 量、电 导、光 散 射()容 量、电 导、光 散 射(v o l u
8、 m ev o l u m e,conductivityconductivity,scatter,VCSscatter,VCS)法:)法:血细胞未经任何处理,保持与体内完全相同状态血细胞未经任何处理,保持与体内完全相同状态下进行。下进行。VCSVCS法检测原理法检测原理细胞体积技术(测量细胞大小)细胞体积技术(测量细胞大小)电导性技术(测量细胞内部结构)电导性技术(测量细胞内部结构)光散射(光散射(scatter,Sscatter,S)技术(测量细胞形态、细)技术(测量细胞形态、细胞核和细胞颗粒)。胞核和细胞颗粒)。体积体积 电导电导 光散射光散射VCSVCS可显示可显示3 3种细胞散点图种细
9、胞散点图DF1DF1(体积值和散射光值)(体积值和散射光值)DF2DF2(体积值和电导值)(体积值和电导值)DF3DF3(体积值和电导值):只显示(体积值和电导值):只显示basophil basophil 细胞流电学和光学散点图(细胞流电学和光学散点图(AcT 5diffAcT 5diff)VCSVCS血液分析仪正常白细胞散点图实例血液分析仪正常白细胞散点图实例(3 3)电阻抗与射频法(能透入细胞内,测量核)电阻抗与射频法(能透入细胞内,测量核的大小及颗粒的多少):的大小及颗粒的多少):嗜酸性粒细胞检测系统嗜酸性粒细胞检测系统嗜碱性粒细胞检测系统嗜碱性粒细胞检测系统 5 5种白细胞分类检测系
10、统:直流电(种白细胞分类检测系统:直流电(direct direct currentcurrent,DCDC)为横坐标,以射频()为横坐标,以射频(radio radio frequency frequency,RFRF)为纵坐标。)为纵坐标。幼稚细胞检测系统:幼稚细胞检测系统:幼稚细胞膜脂质较成熟细胞少。幼稚细胞膜脂质较成熟细胞少。加入硫化氨基酸,与幼稚细胞的结合量多于较成加入硫化氨基酸,与幼稚细胞的结合量多于较成熟的细胞熟的细胞幼稚细胞对溶血剂有抵抗作用,从而提供幼稚髓幼稚细胞对溶血剂有抵抗作用,从而提供幼稚髓细胞信息(细胞信息(immature myeloid informationim
11、mature myeloid information,IMIIMI)。)。(4 4)多角度偏振光散射()多角度偏振光散射(multi-angle multi-angle polarized scatter separation of white polarized scatter separation of white cell,MAPSScell,MAPSS)法)法0 0:前角光散射(:前角光散射(1 13 3),可粗略测定),可粗略测定细胞大小。细胞大小。1010:狭角光散射(:狭角光散射(7 71111),可测定细),可测定细胞内部结构相对特征。胞内部结构相对特征。9090:垂直光散射(
12、:垂直光散射(7070110110),测定细),测定细胞核分叶情况。胞核分叶情况。9090:消偏振光散射(:消偏振光散射(7070110110),区分),区分嗜酸性粒细胞与其他细胞。嗜酸性粒细胞与其他细胞。2.2.光散射法红细胞检测原理光散射法红细胞检测原理 低角度低角度(2(23 3):测量红细胞体积:测量红细胞体积高角度高角度(5(51515):测定红细胞血红蛋白:测定红细胞血红蛋白浓度浓度得到得到MCVMCV、MCHMCH、MCHCMCHC测定值,计算出测定值,计算出RDWRDW、红细胞血红蛋白分布宽度(红细胞血红蛋白分布宽度(red blood red blood cell hemog
13、lobin distribution widthcell hemoglobin distribution width,HDWHDW)3.3.光散射法血小板检测原理光散射法血小板检测原理 MieMie理论(理论(Mie theory of light scatter Mie theory of light scatter for homogeneous spheresfor homogeneous spheres):当球形化):当球形化的血小板一个一个通过激光照射区时:的血小板一个一个通过激光照射区时:高角度(高角度(5 51515):检测细胞折射指):检测细胞折射指数(数(reactive i
14、ndexreactive index,RIRI););低角度(低角度(2 23 3):测量细胞大小。):测量细胞大小。大血小板与各种碎片如果体积相似,但由大血小板与各种碎片如果体积相似,但由于内容物不同,于内容物不同,RIRI相差较大,故能鉴别。相差较大,故能鉴别。5.5.网织红细胞计数(网织红细胞计数(reticulocytereticulocyte,RETRET)原理原理 2020世纪世纪9090年代起,有多种检测原理相似网年代起,有多种检测原理相似网织红细胞分析仪。织红细胞分析仪。(1 1)血液分析仪检测原理:)血液分析仪检测原理:用新亚甲蓝染色使红细胞用新亚甲蓝染色使红细胞RNARNA
15、着色或用荧光着色或用荧光染料对染料对RNARNA进行染色。进行染色。检测参数:检测参数:网织红细胞绝对值(网织红细胞绝对值(RET#RET#)网织红细胞百分数(网织红细胞百分数(RET%RET%)网织红细胞平均体积(网织红细胞平均体积(MCVrMCVr)网织红细胞成熟指数(网织红细胞成熟指数(RMIRMI)网织红细胞分布宽度(网织红细胞分布宽度(reticulocyte reticulocyte distribution width,RDWrdistribution width,RDWr)新亚甲蓝网织红细胞染色新亚甲蓝网织红细胞染色光散射法网织红细胞检测散点图光散射法网织红细胞检测散点图 二、
16、检测参数二、检测参数(一)检测参数(一)检测参数 中高档仪器检测参数:中高档仪器检测参数:2020项左右或超过项左右或超过4040多项多项(二)检测结果及表达形式(二)检测结果及表达形式表表 常见血液分析报告用语及英文缩写词常见血液分析报告用语及英文缩写词三、细胞直方图三、细胞直方图横坐标为血细胞体积大小横坐标为血细胞体积大小纵坐标为不同体积细胞的相对频率。纵坐标为不同体积细胞的相对频率。(一)白细胞直方图(一)白细胞直方图正常白细胞直方图正常白细胞直方图出现异常直方图时,常伴警报信号,如出现异常直方图时,常伴警报信号,如“H H(highhigh,高),高)”或或“L L(lowlow,低)
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