第五章-溶血性贫血检验—临床检验专业知识课件.ppt
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- 第五 溶血 性贫血 检验 临床 专业知识 课件
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1、学习目标背诵溶血性贫血的概念和分类记住溶血性贫血检验的基本方法叙述红细胞渗透脆性试验、蔗糖溶血试验、酸溶血试验的原理、试剂、操作、注意事项和临床意义本章目录第一节 概述第二节 红细胞膜缺陷的检验第三节 红细胞酶缺陷的检验第四节 珠蛋白合成异常的检验第五节 免疫性溶血性贫血的检验 一、溶血性贫血定义和分类 二、溶血性贫血检验的基本方法第一节 概述一、溶血性贫血定义和分类(一)溶血性贫血的定义 溶血性贫血是由于各种原因导致的红细胞寿命缩短,破坏过多或加速,超过了骨髓造血代偿能力所发生的一组疾病。一、溶血性贫血定义和分类(二)溶血性贫血的分类 1.根据红细胞破坏场所,分为血管内和血管外溶血;2.根据
2、溶血发生的急缓,分为急性和慢性;一、溶血性贫血定义和分类(二)溶血性贫血的分类 3.根据病因可分为红细胞内在缺陷和红细胞外在因素所致。红细胞内在缺陷:膜缺陷 酶缺陷 血红蛋白异常一、溶血性贫血定义和分类(二)溶血性贫血的分类 3.根据病因可分为红细胞内在缺陷和红细胞外在因素所致。红细胞内在缺陷 红细胞外在因素 血液中含有破坏红细胞的抗体,或感染、物理、化学因素等。二、溶血性贫血检验的基本方二、溶血性贫血检验的基本方法法二、溶血性贫血检验的基本方法(一)确定是否有溶血的实验 1.网织红细胞计数 2.血清胆红素测定 3.尿和粪中尿胆原测定 4.骨髓细胞检验 最直接的确证试验是红细胞寿命测定。二、溶
3、血性贫血检验的基本方法(二)确定红细胞破坏场所的实验 说明红细胞在血管内破坏的实验及结果:1.血浆游离血红蛋白增加 2.结合珠蛋白降低 3.高铁血红蛋白增多 4.尿隐血试验阳性 5.尿含铁血黄素阳性等二、溶血性贫血检验的基本方法(二)确定红细胞破坏场所的实验 说明红细胞在血管外破坏的实验 血清胆红素测定二、溶血性贫血检验的基本方法(三)确定溶血性贫血原因的实验 红细胞膜缺陷的有关试验 (1)诊断遗传性球形红细胞增多症的实验:红细胞渗透脆性试验 自身溶血试验及纠正试验 酸化甘油溶血试验等二、溶血性贫血检验的基本方法(三)确定溶血性贫血原因的实验 红细胞膜缺陷的有关试验 (1)诊断遗传性球形红细胞
4、增多症的实验 (2)诊断PNH的实验:酸化血清溶血试验 蔗糖溶血试验 蛇毒溶血试验 冷抗体溶血试验二、溶血性贫血检验的基本方法(三)确定溶血性贫血原因的实验 红细胞膜缺陷的有关试验 2红细胞酶缺陷的实验 (1)丙酮酸激酶荧光斑点试验和活性测定 (2)高铁血红蛋白还原试验 (3)变性珠蛋白小体试验 (4)G6PD荧光斑点试验和活性测定 (5)硝基四氮唑蓝试验等 其中G6PD活性测定是G6PD缺乏的确证试验。二、溶血性贫血检验的基本方法(三)确定溶血性贫血原因的实验 红细胞膜缺陷的有关试验 2红细胞酶缺陷的实验 3血红蛋白异常的实验 (1)血红蛋白电泳检测二、溶血性贫血检验的基本方法 (2)抗碱血
5、红蛋白检测 (3)胎儿血红蛋白(HbF)酸洗脱试验 (4)红细胞镰变试验 (5)变性珠蛋白小体测定 (6)异丙醇沉淀试验 (7)热变性试验等。二、溶血性贫血检验的基本方法(三)确定溶血性贫血原因的实验 红细胞膜缺陷的有关试验 2红细胞酶缺陷的实验 3血红蛋白异常的实验 4免疫性溶血原因的有关检查 (1)抗人球蛋白试验 (2)冷热溶血试验 (3)冷凝集素试验第二节 红细胞膜缺陷的检验一、红细胞渗透脆性的试验二、自身溶血试验及纠正三、蔗糖溶血试验四、酸化血清溶血试验遗传性溶血性疾病重要筛选试验 红细胞膜缺陷:渗透脆性增加 血红蛋白异常:渗透脆性降低 红细胞酶缺陷:渗透脆性正常一、红细胞渗透脆性试验
6、一、红细胞渗透脆性试验(一)简易半定量法(Sanford法)【原 理】红细胞在低渗盐水中,水分通过细胞膜进入细胞内,使之膨胀破坏而溶血。本试验是测定红细胞对不同浓度低渗盐水的抵抗力,红细胞对低渗盐水的抵抗力与其表面积和体积的比值有关,比值越大,则抵抗力越大,脆性越小;反之比值越小,则抵抗力越小,脆性越大。一、红细胞渗透脆性试验(二)孵育脆性试验 【原理】遗传性球形红细胞增多症及某些遗传性非球形红细胞溶血性贫血患者的红细胞,经37孵育24h后,由于葡萄糖消耗,ATP的储备减少,导致需要能量的红细胞膜对钠离子的主动运转受阻,使钠离子在红细胞内积聚,细胞膨胀,而致渗透脆性明显增加。一、红细胞渗透脆性
7、试验【试剂】5g/L NaCl溶液一、红细胞渗透脆性试验(一)半定量法 【操作】1.取12支清洁干燥的试管置试管架上,用蒸馏水稀释NaCl溶液。2.静脉采血1ml,立即依次向每管加入1滴血(贫血患者可加2滴),轻轻颠倒混匀.3.于室温中静止2h,观察溶血情况。一、红细胞渗透脆性试验【结果判断】上层溶液开始出现透明红色者为开始溶血管;溶液呈透明红色且管底红细胞完全消失的最高浓度管为完全溶血管。一、红细胞渗透脆性试验【注意事项】1.氯化钠必须干燥后准确称量,用前新鲜配制。2.所用器具要清洁干燥,混匀时不能用力过大。3.本试验忌用抗凝血,如遇特殊情况时可用肝素抗凝。4.加血时持针角度应一致。5.在白
8、色背景下观察结果,结果不易判断时可离心后观察。一、红细胞渗透脆性试验半定量法半定量法一、红细胞渗透脆性试验(二)孵育脆性试验 【操作】1.取肝素抗凝血1份37孵育24h。2.稀释氯化钠磷酸盐缓冲液成不同浓度。3.于每管内加肝素抗凝血0.05ml,轻轻颠倒混匀。置室温(20左右)30min。一、红细胞渗透脆性试验(二)孵育脆性试验 【操作】4.将各管再混匀,离心取上清液,测定各管的吸光度,并以第一管上清液为100%溶血,计算出每一管的溶血百分率。5.绘制溶血曲线。从曲线上找出50%溶血度的氯化钠浓度,即为红细胞中间脆性。一、红细胞渗透脆性试验【参考值】(一)半定量法 开始溶血:4.24.6g/L
9、 NaCl 溶液 完全溶血:2.83.2g/L NaCl 溶液 (二)孵育脆性试验 未孵育:50%溶血为4.004.45g NaCl/L 37孵育24h:50%溶血为4.655.90g NaCl/L 一、红细胞渗透脆性试验【临床意义】患者比正常对照高0.4g/L即有诊断价值。脆性增加:常见于遗传性球形红细胞增多症、遗传性椭圆形红细胞增多症和部分遗传性口形红细胞增多症。轻型遗传性球形红细胞增多症患者孵育后脆性明显增加。脆性减低:见于缺铁性贫血、地中海贫血等。二、自身溶血试验及纠正试验 检测患者血液在孵育后,自发产生溶血的程度并观察加GLU和/或ATP后,溶血是否纠正,对遗传性球形红细胞增多症有较
10、大诊断价值,对PK缺乏症、自身免疫性溶血性贫血、G6PD缺乏症、不稳定血红蛋白病有一定筛选意义。二、自身溶血试验及纠正试验【原理】正常人血液经孵育后,可产生轻微溶血,但遗传性球形红细胞增多症和遗传性非球形红细胞溶血性贫血等,自身溶血明显增强。当加入葡萄糖或ATP后,可获得不同程度的纠正。因此,本试验有助于某些溶血性贫血的鉴别。二、自身溶血试验及纠正试验【操作】二、自身溶血试验及纠正试验【注意事项】1严格无菌操作过程。2若溶血明显,A值过大,可增加稀释倍数。二、自身溶血试验及纠正试验【参考值】溶血率4.0%,加葡萄糖管溶血率0.6%,加ATP管溶血率0.8%。二、自身溶血试验及纠正试验【临床意义
11、】1.遗传性球形红细胞增多症溶血率增加,加葡萄糖或ATP后可明显纠正。2.葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏时溶血率增加,能被葡萄糖和ATP纠正。二、自身溶血试验及纠正试验【临床意义】3.丙酮酸激酶缺乏症时溶血率明显增加,不能被葡萄糖纠正,但能被ATP纠正。4.阵发性睡眠性血红蛋白尿症、自身免疫性溶血性贫血和药物性溶血等均不能被葡萄糖纠正。三、蔗糖溶血试验 为PNH的筛选试验 敏感性高,阴性可排除PNH三、蔗糖溶血试验【原理】等渗低离子强度的蔗糖溶液,经温浴后可加强补体成分与红细胞膜的结合,使对补体敏感的红细胞膜形成缺损,导致蔗糖溶液进入红细胞内,引起细胞膜破裂,发生溶血。三、蔗糖溶血试验【操作】三、
12、蔗糖溶血试验【参考值】正常人为阴性(无溶血)。第一管溶血率5%。三、蔗糖溶血试验 【临床意义】1.阵发性睡眠性血红蛋白尿(PNH)患者本试验为阳性。本试验是PNH的简易过筛试验,如为阴性,一般可排除PNH。2.再生障碍性贫血、巨幼细胞性贫血和自身免疫性溶血性贫血患者也偶见阳性,故必要时需作酸化血清溶血试验加以鉴别。四、酸化血清溶血试验 为PNH的确定试验 特异性强,阳性可确诊四、酸化血清溶血试验【原理】在pH6.46.6的酸化血清中,补体易被激活,PNH患者体内的补体敏感红细胞,在此条件下易被破坏而发生溶血,而正常人红细胞不被破坏。将血清加热56 30min 灭活补体后,因补体被破坏而失去溶血
13、作用。四、酸化血清溶血试验【操作】四、酸化血清溶血试验【参考值】正常人为阴性四、酸化血清溶血试验【临床意义】阳性主要见于PNH。可作为PNH的诊断依据。某些自身免疫性溶血性贫血患者溶血发作严重时,也偶呈阳性。小结 溶血性贫血是由于各种原因导致的红细胞寿命缩短,破坏过多或加速,超过了骨髓造血代偿能力所发生的一组疾病。其根据病因和发病机制可分为红细胞内在缺陷和红细胞外在缺陷两大类,红细胞内在异常又可分为膜缺陷、酶缺陷和血红蛋白病三种。有关试验主要包括诊断遗传性球形红细胞增多症的红细胞渗透脆性试验;诊断PNH的酸化血清溶血试验、蔗糖溶血试验等,酸化血清溶血试验是PNH的确证试验。目标形成性测试请您练
14、习 什么叫溶血性贫血?答案:溶血性贫血是由于各种原因导致的红细胞寿命缩短,破坏过多或加速,超过了骨髓造血代偿能力所发生的一组疾病。请您练习 根据病因可将溶血性贫血分为哪几种?答案:可分为红细胞内在缺陷和红细胞外在缺陷两大类,红细胞内在异常又可分为膜缺陷、酶缺陷和血红蛋白病三种。请您练习 请将试验和对应的疾病连线 红细胞渗透脆性试验 PNH的确证试验 蔗糖溶血试验 遗传性球形红细胞增多症 酸化血清溶血试验 PNH的筛选试验请您练习 红细胞对低渗盐水的抵抗力与什么有关?答案:红细胞对低渗盐水的抵抗力与其表面积和体积的比值有关,比值越大,则抵抗力越大,脆性越小;反之比值越小,则抵抗力越小,脆性越大。
15、请您练习红细胞渗透脆性试验增加有何临床意义?答案:脆性增加:常见于遗传性球形红细胞增多症、遗传性椭圆形红细胞增多症和部分遗传性口形红细胞增多症。轻型遗传性球形红细胞增多症患者孵育后脆性明显增加。蔗糖溶血试验的原理是什么?答案:等渗低离子强度的蔗糖溶液,经温浴后可加强补体成分与红细胞膜的结合,使对补体敏感的红细胞膜形成缺损,导致蔗糖溶液进入红细胞内,引起细胞膜破裂,发生溶血。请您练习胡建新胡建新第三节 红细胞酶缺陷的检验第四节 珠蛋白合成异常的检验第五节 免疫性溶血性贫血的检验 学习目标说出珠蛋白合成异常检验常用试验的原理、操作及主要临床意义概述免疫性溶血性贫血有关试验的原理、操作和临床意义。第
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