新药临床前药物代谢动力学研究课件.ppt

1、新药临床前药物代谢动力学研究新药临床前药物代谢动力学研究 目的目的:阐明新药在体内吸收、分布、代谢和阐明新药在体内吸收、分布、代谢和排泄的过程和特点。排泄的过程和特点。ADME 新药研发的重要环节新药研发的重要环节，要求研究，要求研究内容与药物的分类有关。内容与药物的分类有关。药品注册管理办法药品注册管理办法（局令第（局令第28号）号）中药、天然药物注册中药、天然药物注册28.动物药代动力学试验资料及文献资料动物药代动力学试验资料及文献资料化学药品注册化学药品注册22.复方制剂中多种成份药效、毒性、复方制剂中多种成份药效、毒性、药代动力学相互影响的试验资料及文药代动力学相互影响的试验资料及文献

2、资料献资料27.非临床药代动力学试验资料及文献非临床药代动力学试验资料及文献资料资料21.动物药代动力学试验资料及文献资料动物药代动力学试验资料及文献资料 27.复方制剂中多种组份药效、毒性、药代复方制剂中多种组份药效、毒性、药代动力学相互影响的试验资料及文献资料动力学相互影响的试验资料及文献资料 生物制品注册生物制品注册申报资料要求申报资料要求一、生物样品分析技术的特点与要求一、生物样品分析技术的特点与要求 生物样品生物样品：全血、血浆、血清、粪便、全血、血浆、血清、粪便、尿液、胆汁或其他尿液、胆汁或其他 特点特点：药物浓度低药物浓度低 g/ml,ng/ml,fg/ml 干扰物质多干扰物质多

3、 取样量少取样量少 个体的差异大个体的差异大 灵敏、专一、精确、可靠的生物样品定量分析方法灵敏、专一、精确、可靠的生物样品定量分析方法?生物样品分析方法的建立和确证生物样品分析方法的建立和确证 1.生物样品分析方法的选择和建立生物样品分析方法的选择和建立（3）放射性核素标记法：标记核素有）放射性核素标记法：标记核素有3H、14C、125I。药物分布和排泄研究，物料平衡研究。药物分布和排泄研究，物料平衡研究。125I。蛋白质。蛋白质类分析类分析1)色谱法：色谱法：HPLC、GC、LC-MS、LC-MS/MS，GC-MS等，大多数药物的分析等，大多数药物的分析2）免疫学方法：放射免疫、酶联免疫、荧

4、光免疫）免疫学方法：放射免疫、酶联免疫、荧光免疫等，主要用于蛋白质等，主要用于蛋白质/多肽类物质检测；多肽类物质检测；（4）微生物学方法，主要用于抗生素类药物的）微生物学方法，主要用于抗生素类药物的测定测定2生物样品分析方法的确证（生物样品分析方法的确证（Method Validation）及技术要求）及技术要求（1）特异性）特异性(Specificity)测定的物质是受试药品的原形药物或特定活性代测定的物质是受试药品的原形药物或特定活性代谢物，生物样品所含内源性和外源性物质及其相谢物，生物样品所含内源性和外源性物质及其相应代谢物不得干扰对样品的测定应代谢物不得干扰对样品的测定 如何证明？如何

5、证明？考察考察6个不同来源空白生物样品色谱图、空白生物个不同来源空白生物样品色谱图、空白生物样品外加对照物质色谱图（注明浓度）及用药后的样品外加对照物质色谱图（注明浓度）及用药后的生物样品色谱图反映分析方法的特异性生物样品色谱图反映分析方法的特异性 如何保证？措施如何保证？措施生生物物样样品品处处理理直接沉淀处理蛋白等直接沉淀处理蛋白等液液-液提取液提取 液固提取液固提取除杂质除杂质样品富集样品富集分分离离条条件件优优化化 色谱柱的选择色谱柱的选择流动相的选流动相的选择择检检测测条条件件优优化化紫外检测器紫外检测器荧光检测器荧光检测器质谱检测器：质谱检测器：MS，MS/MS其他其他（2）标准曲

6、线和定量范围（）标准曲线和定量范围（Calibration Curve）原理：待测物质的浓度与响应的相关性，用回归分析原理：待测物质的浓度与响应的相关性，用回归分析方法获得标准曲线，提供标准曲线的线性方程和相关方法获得标准曲线，提供标准曲线的线性方程和相关系数，说明其线性相关程度系数，说明其线性相关程度 标准曲线高低浓度范围为定量范围，在定量范围内浓度标准曲线高低浓度范围为定量范围，在定量范围内浓度测定结果应达到试验要求的精密度和准确度测定结果应达到试验要求的精密度和准确度 如何做？如何做？少少6个浓度建立标准曲线，应使用与待测样品个浓度建立标准曲线，应使用与待测样品相同的生物介质制备标准曲线

7、，定量范围要能相同的生物介质制备标准曲线，定量范围要能覆盖全部待测样品浓度，不允许将定量范围外覆盖全部待测样品浓度，不允许将定量范围外推求算未知样品的浓度。建立标准曲线时应随推求算未知样品的浓度。建立标准曲线时应随行空白生物样品，但计算时不包括该点。行空白生物样品，但计算时不包括该点。至少至少5条条 实例实例1左旋泮托拉唑血浆中标准曲线左旋泮托拉唑血浆中标准曲线取空白大鼠血浆取空白大鼠血浆90 l，加，加10 l不同浓度的标准品不同浓度的标准品,使血浆使血浆中左旋泮托拉唑浓度分别为中左旋泮托拉唑浓度分别为0、0.156、0.312、0.625、1.25、2.50、5.00、10.00、20.0

8、0和和40.00 g/ml，按，按“血血浆样品的处理过程浆样品的处理过程”项下操作，记录样品和内标峰面积。项下操作，记录样品和内标峰面积。利用样品浓度利用样品浓度C对样品与内标峰面积比对样品与内标峰面积比R作直线回归，得作直线回归，得左旋泮托拉唑回归方程左旋泮托拉唑回归方程R=0.777C+0.023，线性范围，线性范围0.15640.00 g/ml，最低检测浓度，最低检测浓度0.156 g/ml。左旋泮托拉唑血样方法学标准曲线左旋泮托拉唑血样方法学标准曲线（3）定量下限（定量下限（Lower Limit of quantitation，LLOQ）定量下限是标准曲线上的最低浓度点定量下限是标准

9、曲线上的最低浓度点 要求至少能满足测定要求至少能满足测定35个半衰期时样品中的药物个半衰期时样品中的药物浓度，或浓度，或Cmax的的1/101/20时的药物浓度，其准确时的药物浓度，其准确度应在真实浓度的度应在真实浓度的80%120%范围内，范围内，RSD应小于应小于20%。应由至少。应由至少5个标准样品测试结果证明个标准样品测试结果证明（4 4）精密度与准确度精密度与准确度(Precision and Accuracy)(Precision and Accuracy)要求选择高中低要求选择高中低3个浓度的质控样品同时进行方法的精个浓度的质控样品同时进行方法的精密度和准确度考察。密度和准确度考

10、察。低浓度选择在定量下限（低浓度选择在定量下限（LLOQ）附近，其浓度在）附近，其浓度在LLOQ的的3倍以内；倍以内；高浓度接近于标准曲线的上限，通常大于工作曲线最高浓度接近于标准曲线的上限，通常大于工作曲线最高浓度高浓度80%中间选一个浓度中间选一个浓度 每一浓度每批至少测定每一浓度每批至少测定5个样品，批内变异个样品，批内变异连续测定连续测定3个分析批个分析批 批间变异批间变异变异：变异：RSD一般应小于一般应小于15%，在，在LLOQ附近附近RSD应小于应小于20%。要求：要求：准确度：一般应在准确度：一般应在85%115%范围内，在范围内，在LLOQ附附近应在近应在80%120%范围内

11、范围内 左旋泮托拉唑批内和批间变异左旋泮托拉唑批内和批间变异取空白血浆取空白血浆100 l，加入标准品，使单一对映体浓，加入标准品，使单一对映体浓度分别为度分别为0.312，2.50和和20.00 g/ml，按，按“血浆样血浆样品的处理品的处理”项下操作，记录样品与内标峰面积比项下操作，记录样品与内标峰面积比值值R，代入当日工作曲线中算得浓度，以此作为精，代入当日工作曲线中算得浓度，以此作为精密度指标。测得批内变异和连续密度指标。测得批内变异和连续3天内的批间变异天内的批间变异(n=5)，结果见下表。，结果见下表。（5）样品稳定性样品稳定性(Stability)根据具根据具体情况，对含药生物样

12、品在室温、冷体情况，对含药生物样品在室温、冷冻和冻融条件下以及不同存放时间进冻和冻融条件下以及不同存放时间进行稳定性考察，以确定生物样品的存行稳定性考察，以确定生物样品的存放条件和时间。还应注意储备液的稳放条件和时间。还应注意储备液的稳定性以及样品处理后的溶液中分析物定性以及样品处理后的溶液中分析物的稳定性。的稳定性。WHY长期冻融稳定性试验长期冻融稳定性试验反复冻融稳定性试验反复冻融稳定性试验 室温放置室温放置 6 h 稳定性试验稳定性试验进样瓶放置进样瓶放置 24 h 稳定性试验稳定性试验 样品稳定性试验样品稳定性试验 其他其他（6）回收率回收率(Recovery)高、中、低高、中、低3个

13、浓度的提取回收率，高、中、个浓度的提取回收率，高、中、低低3个浓度的提取回收率应大于个浓度的提取回收率应大于70%浓度设定要求同变异分析浓度设定要求同变异分析左旋泮托拉唑方法回收率左旋泮托拉唑方法回收率 EP管加入管加入90 L空白血浆，加入空白血浆，加入10L标准品，使单一对映标准品，使单一对映体浓度分别为体浓度分别为0.312，2.50和和20.00 g/ml，按，按“血浆样品血浆样品的处理的处理”项下的方法操作，记录样品峰面积和内标峰面积项下的方法操作，记录样品峰面积和内标峰面积(A1)；另取；另取EP管加入管加入10L 6.25,50和和400 g/ml消旋泮托拉消旋泮托拉唑标准品，再

14、加入内标唑标准品，再加入内标10 L，挥干后，挥干后100 L甲醇复溶，甲醇复溶，离心，取上清进样，记录样品峰面积和内标峰面积离心，取上清进样，记录样品峰面积和内标峰面积(A2)。以峰面积的比值以峰面积的比值(A1/A2*100%)求得血浆中左旋和右旋泮托求得血浆中左旋和右旋泮托拉唑和内标的回收率。每个浓度处理拉唑和内标的回收率。每个浓度处理5份样品，结果见表份样品，结果见表（7 7）介质效应介质效应(Medium Effect)(Medium Effect)：由于样品中存在干扰物：由于样品中存在干扰物质，对响应造成的直接或间接的影响质，对响应造成的直接或间接的影响。LC-MS LC-MS/M

15、S 大鼠的空白血浆，按大鼠的空白血浆，按“血浆样品的处理血浆样品的处理”项下的方法操作，项下的方法操作，挥干后加入挥干后加入10 L不同浓度的标准工作液和内标液，挥干，不同浓度的标准工作液和内标液，挥干，加入加入100 L复溶液，使最终浓度相当于复溶液，使最终浓度相当于QC样品浓度，每个样品浓度，每个浓度进样浓度进样5次，记峰面积为次，记峰面积为A1；另取；另取10 L不同浓度的标准不同浓度的标准工作液和内标液，挥干，加入工作液和内标液，挥干，加入100 L复溶液，使终浓度相复溶液，使终浓度相当于当于QC样品浓度，即排除空白血浆基质的干扰，每个浓度样品浓度，即排除空白血浆基质的干扰，每个浓度进

16、样进样5次，记峰面积为次，记峰面积为A2。如果如果A1/A2 115%，表明有基质效应存在，表明有基质效应存在 不符合要求不符合要求（8)方法学质控方法学质控(Quality control,QC)由独立的人员配制不同浓度的质控样品对分析方法由独立的人员配制不同浓度的质控样品对分析方法进行考核。对操作者单盲进行考核。对操作者单盲高、中、低三个浓度的质控样品高、中、低三个浓度的质控样品 利用随行工作曲利用随行工作曲线求得测定结果线求得测定结果 每份样品重复每份样品重复6 6次次质控样品测定结果的偏差一般应小于质控样品测定结果的偏差一般应小于15%，低浓，低浓度一般应小于度一般应小于20。2/3样

17、品应符合要求样品应符合要求生物样品测定生物样品测定1 1）随行工作曲线）随行工作曲线2 2）伴随质控样本）伴随质控样本 高中低高中低3 3种浓度种浓度 质控样品数大于未知样品总数的质控样品数大于未知样品总数的5%5%。质控样本合理布。质控样本合理布控控3 3）未知浓度样本的信号代入方程，计算相应样品的浓未知浓度样本的信号代入方程，计算相应样品的浓度，如超过高限度，如超过高限应采用相应的空白介质稀释后重新测定。应采用相应的空白介质稀释后重新测定。对于浓度低于定量下限的样品，应以零值计算对于浓度低于定量下限的样品，应以零值计算 对于稀释对于稀释应考虑稀释效应应考虑稀释效应新药临床前药物代谢动力学研

18、究的内容和方法新药临床前药物代谢动力学研究的内容和方法 1.实验药品实验药品2.实验动物实验动物 尽可能与药效学和毒理学研究所用的动物一致尽可能与药效学和毒理学研究所用的动物一致 清醒状态下实验，最好从同一动物多次采样清醒状态下实验，最好从同一动物多次采样 实验所用的药品应与药效学和毒理学研究使用的药品相实验所用的药品应与药效学和毒理学研究使用的药品相一致一致 创新药应选用两种或两种以上的动物，其中一种创新药应选用两种或两种以上的动物，其中一种为啮齿类动物；另一种为非啮齿类动物，为啮齿类动物；另一种为非啮齿类动物，特殊要求特殊要求雌雄动物兼用雌雄动物兼用 3.剂量选择剂量选择三个剂量三个剂量

19、药效学和毒理学研究中所用的剂量，其高药效学和毒理学研究中所用的剂量，其高剂量最好接近最小中毒剂量，中剂量相当剂量最好接近最小中毒剂量，中剂量相当于有效剂量，于有效剂量，体内的动力学过程是否属于线体内的动力学过程是否属于线性性？4.给药方式和途径给药方式和途径 应尽可能与拟定的临床用药一致应尽可能与拟定的临床用药一致参考药效参考药效/毒理？毒理？AUC比：比：1：3.9：11；剂量比：剂量比：1：7：50 ln-ln 图图 斜率偏离斜率偏离1！AUC比：比：1：3.9：11；剂量比：剂量比：1：7：50 ln-ln 图图 斜率偏离斜率偏离1！二、临床前药动学研究方法和内容二、临床前药动学研究方法

20、和内容 1血药浓度血药浓度-时间曲线时间曲线 动物数的确定动物数的确定 不少于不少于5个，通常个，通常6只雄雌各半只雄雌各半如有性别差异，增加动物数如有性别差异，增加动物数如用于单性动物，可采用临床拟用如用于单性动物，可采用临床拟用的性别的动物的性别的动物 采样点的确采样点的确定定 整个采样时间至少应持续到整个采样时间至少应持续到35个半衰期，个半衰期，或持续到血药峰浓度或持续到血药峰浓度Cmax的的1/101/20。在预实验的基础上合理布点在预实验的基础上合理布点 给药剂量和途径给药剂量和途径 三个剂量组三个剂量组 口服给药，一般应在给药前应禁食口服给药，一般应在给药前应禁食12小时以上，以

21、排除食物对药物吸收的小时以上，以排除食物对药物吸收的影响影响 药动学参数的估算药动学参数的估算 模型法模型法 矩量法矩量法选择一合适剂量选择一合适剂量 中剂量中剂量 多次给药多次给药 达达稳态稳态 蓄积情况蓄积情况药动学参数的估算药动学参数的估算 模型法模型法矩量法矩量法模型选择，参数估算模型选择，参数估算AUC，Tmax，Cmax，T1/2，MRT估算药动学参数时需要考虑的问题估算药动学参数时需要考虑的问题1）模型选择模型选择 系列系列 Ti,Ci 2)(ReiiCCAIC=nln(Re)+2m模型选择的相对性模型选择的相对性Re的量纲问题itieAC n=10,one m=2 n=10,t

22、wo m=4 Re=0.1(ug/ml)2 =10000(ng/ml)2 oneonetwotwoReReAICAICAICAIC0.1(ug/ml)20.1(ug/ml)2-19.03-19.03-15.03-15.03 1000010000（ng/ml)2ng/ml)2119.13 119.13 123.13 123.13 2)(ReiiCC25.0)5.45(1)910(100)90100(222浓度高占的比重大浓度高占的比重大22/1,/1,1)(ReiiiiiiCCwwCC2）权重问题）权重问题 结合临床应用实际结合临床应用实际,合理地选择权重系数合理地选择权重系数权重权重:窃富济贫

23、窃富济贫考虑考虑:安全性安全性 峰浓度峰浓度有效性有效性:最低有效浓度最低有效浓度参数的实际意义和临床价值参数的实际意义和临床价值 临床临床给药间隔给药间隔血药浓度的测定准确性血药浓度的测定准确性误差要求在规定范围内误差要求在规定范围内高浓度高浓度 15%中浓度中浓度 15%低浓度低浓度 20%实例实例 最后点浓度正误差最后点浓度正误差20%,结果结果3）末端项半衰期的求算问题末端项半衰期的求算问题lnC t线性回归线性回归 时间点选择时间点选择 取点不同结果不同取点不同结果不同,上上述结果述结果(似乎均满足线性似乎均满足线性非参数法非参数法4）初值的选择）初值的选择程序存在初值依赖性程序存在

24、初值依赖性拟合参数的实际意义拟合参数的实际意义速率常数和系数应为速率常数和系数应为0参数应有合理的解释参数应有合理的解释!半衰期值不会大于取样时间长度半衰期值不会大于取样时间长度包括线性动力学，非线性动力学判定？有包括线性动力学，非线性动力学判定？有无性别差异？无性别差异？多剂量：稳态情况，蓄积情况等？多剂量：稳态情况，蓄积情况等？自身自身诱导？诱导？结果分析与结论结果分析与结论2药物的吸收药物的吸收吸收速度吸收速度 Cmax和和Tmax 吸收的程度吸收的程度 AUC 生物利用度生物利用度吸收机理吸收机理 创新药物创新药物 in vivo in vivo In vitro Caco-2 In

25、vitro Caco-2 模型模型Transwell小室示意图一般认为Papp10-6cm/s的药物吸收较好，Papp10-7cm/s的药物吸收很差)/()/(0ACtQPapp3药物的分布药物的分布一个剂量一个剂量选选3个时间点考虑个时间点考虑 吸收分布，消除吸收分布，消除动物数同血药浓度动物数同血药浓度组织：生命器官，药物分布，组织：生命器官，药物分布，毒性毒性/药效靶器官药效靶器官血浆蛋白结合试验血浆蛋白结合试验 血浆蛋白：人血浆蛋白：人/动物动物 种属差异性种属差异性药物浓度：结合血浆中药物浓度药物浓度：结合血浆中药物浓度 3-4个浓个浓度。线性结合？度。线性结合？合适方法：平衡透析法

26、，超滤法等合适方法：平衡透析法，超滤法等需要注意：非特异性结合实验需要注意：非特异性结合实验 稳定性稳定性高蛋白结合率药物：药物相互作用？高蛋白结合率药物：药物相互作用？5药物的排泄药物的排泄动物：大鼠或小鼠动物：大鼠或小鼠粪，尿，胆汁粪，尿，胆汁给药后，动物放入代谢笼中，不同时间段收给药后，动物放入代谢笼中，不同时间段收集尿与粪至排泄完全，集尿与粪至排泄完全，测定尿和粪中总药物测定尿和粪中总药物排泄量，计算排泄分数（尿或粪中累积排泄排泄量，计算排泄分数（尿或粪中累积排泄量量/给药计量）给药计量）药物的尿和粪排泄药物的尿和粪排泄胆汁排泄胆汁排泄一般用大鼠在乙醚麻醉下作胆管插管引流，待动物一般用

27、大鼠在乙醚麻醉下作胆管插管引流，待动物清醒后，以预先确定的途径给药，并以合适的时间清醒后，以预先确定的途径给药，并以合适的时间间隔分段收集胆汁，记录胆汁体积，取一部分样品间隔分段收集胆汁，记录胆汁体积，取一部分样品进行药物测定，计算药物经胆汁排泄的速率及总排进行药物测定，计算药物经胆汁排泄的速率及总排泄量泄量 结合尿、粪和胆汁中的排泄量，计算药物原型排泄结合尿、粪和胆汁中的排泄量，计算药物原型排泄分数分数药物代谢研究药物代谢研究在体研究：动物给药或采用合适的方法分在体研究：动物给药或采用合适的方法分析尿，胆汁或血浆中代谢产物生成情况析尿，胆汁或血浆中代谢产物生成情况通常采用通常采用LC-MS/

28、MS或或LC-TOF/MS对可对可能的代谢产物进行初版鉴定，推断可能的能的代谢产物进行初版鉴定，推断可能的代谢途径和半定量分析。代谢途径和半定量分析。可能的话，化学合成或收集尿，分析代可能的话，化学合成或收集尿，分析代谢物，进一步进行结构确定。谢物，进一步进行结构确定。离体实验离体实验 肝微粒体：肝微粒体：I相代谢和葡萄糖醛酸结合相代谢和葡萄糖醛酸结合肝微粒体与待测药物在辅因子存在情况下，共温孵肝微粒体与待测药物在辅因子存在情况下，共温孵后，后，测定反应体系中代谢物的生成情况，测定反应体系中代谢物的生成情况，结合在体结合在体结果进一步分析其可能的代谢物和代谢途径结果进一步分析其可能的代谢物和代

29、谢途径创新药物：几种种属动物肝微粒体代谢酶的比较创新药物：几种种属动物肝微粒体代谢酶的比较药物代谢及代谢途径药物代谢及代谢途径胞浆，微粒体，胞浆，微粒体，S9，肝细胞（原代或冷冻）肝细胞（原代或冷冻）肝微粒体肝微粒体代谢稳定性代谢稳定性代谢产物寻找代谢产物寻找介导代谢酶亚型鉴定介导代谢酶亚型鉴定药物相互作用药物相互作用其他？其他？动物种属间比较动物种属间比较 定量定量/定性定性参与药物代谢酶研究参与药物代谢酶研究肝微粒体与待测药物在辅因子存在和酶特异性肝微粒体与待测药物在辅因子存在和酶特异性抑制剂情况下，共温孵后，抑制剂情况下，共温孵后，测定反应体系中测定反应体系中代谢物的生成情况，代谢物的生

30、成情况，与无抑制剂结果比较。与无抑制剂结果比较。肝微粒体肝微粒体结合进一步用克隆酶结合进一步用克隆酶/重组酶确认重组酶确认实例去氧鬼臼毒素代谢初步试验（人肝和大鼠肝微粒体去氧鬼臼毒素代谢初步试验（人肝和大鼠肝微粒体）去氧鬼臼毒素去氧鬼臼毒素 在人肝微粒体代谢在人肝微粒体代谢肝微粒体三种代谢物形成肝微粒体三种代谢物形成大鼠肝微粒体中温孵大鼠肝微粒体中温孵几种酶抑制剂对代谢物几种酶抑制剂对代谢物M1，M2和和M7形成的影响形成的影响大鼠肝微粒体参与去氧鬼臼毒素代谢酶分析大鼠肝微粒体参与去氧鬼臼毒素代谢酶分析 大鼠肝微粒体大鼠肝微粒体0.5mg/ml,终止温孵时间为终止温孵时间为2min,DPT底物

31、浓底物浓度为度为50 M药物相互作用药物相互作用在体：鸡尾酒法在体：鸡尾酒法探针混合物与待测定药物合用单用或多次用药探针混合物与待测定药物合用单用或多次用药后，测定探针药物的代谢动力学行为变化后，测定探针药物的代谢动力学行为变化离体实验离体实验 代谢抑制：可逆性抑制，机制性抑制代谢抑制：可逆性抑制，机制性抑制酶活性探针酶活性探针 可逆性抑制（竞争性抑制）实验：肝微粒体、抑制可逆性抑制（竞争性抑制）实验：肝微粒体、抑制剂、探针以及辅因子（剂、探针以及辅因子（NADPHNADPH）共温孵，）共温孵，测定产物测定产物的生成的生成 机制性抑制：肝微粒体、抑制剂以及辅因子机制性抑制：肝微粒体、抑制剂以及

32、辅因子（NADPH）共温孵一段时间后，在测定酶活性（与）共温孵一段时间后，在测定酶活性（与探针温孵），探针温孵），测定产物的生成测定产物的生成 测定产物的生成测定产物的生成 特点特点酶活性抑制强弱与抑制剂浓度，预温孵时间有关酶活性抑制强弱与抑制剂浓度，预温孵时间有关 酶活性诱导：人肝酶活性诱导：人肝CYP1A2，2B6和和3A4人肝与待测药物共培养人肝与待测药物共培养72h,测定相应酶测定相应酶活性或基因表达，活性或基因表达，阳性对照阳性对照决策树决策树三、三、新的缓、控释制剂的临床前研究的内容与方法新的缓、控释制剂的临床前研究的内容与方法 实验动物的选择实验动物的选择 参比制剂的选择参比制剂的选择 给药的剂量和途径给药的剂量和途径 研究的内容和方法研究的内容和方法多剂量研究多剂量研究 单剂量研究单剂量研究