ACL系列血凝仪检测原理介绍及血栓止血临床基础课件.ppt

1、生产商：生产商：IL公司简介公司简介F始建于始建于 1959年年F处于全球实验室诊断领域的领先地位处于全球实验室诊断领域的领先地位F推出第一台血气分析仪推出第一台血气分析仪F最先推出火焰光度计最先推出火焰光度计F获得离心式分析技术的专利获得离心式分析技术的专利Milano OfficeIL:Instrumentation Laboratoryq销销售网络售网络:F欧洲、中东、拉丁美洲、太平洋地区总部在欧洲、中东、拉丁美洲、太平洋地区总部在Milano（意大利）意大利）F美国和加拿大总部在美国和加拿大总部在 Lexington（美国）美国）q从从1992年开始，年开始，BC与与IL结成战略联盟，

2、从产结成战略联盟，从产品和市场双方面合作，共同领导全球血液和流品和市场双方面合作，共同领导全球血液和流式细胞自动分析的发展。式细胞自动分析的发展。生产商：生产商：IL公司简介公司简介u1985年年 ACL810u1988年年 ACL100/200/300/300Ru1991年年 ACL1000/2000/3000/3000Plusu1995年年 ACL Futurau1996年年 ACL 6000u1997年年 ACL 7000u2000年年 ACL Advanceu2001年年 ACL 9000u2002年年 ACL 8000u2005年年 ACL TOP目前在市场上推出的目前在市场上推出的

3、ACL型号型号uACL 100uACL 200uACL 7000uACL 9000uACL AdvanceuACL TOPACL各型号的共同特点各型号的共同特点u光学凝固法光学凝固法:l常规检测：常规检测：PT/FIB,APTT,TTl特殊检测：因子，特殊检测：因子，FIB-Clauss，PC，PS，LAC，APC-R，口服抗凝药试验口服抗凝药试验l提供凝固反应曲线提供凝固反应曲线uFIB:两种检测方法两种检测方法lPT衍生衍生FIB法和法和FIB-Clauss法法u标准标准RS-232 接口，方便联网接口，方便联网u条形码扫描器，方便样品信息输入和实验室管理条形码扫描器，方便样品信息输入和实

4、验室管理u完美的仪器和仪器原厂试剂组合提供精确的结果完美的仪器和仪器原厂试剂组合提供精确的结果l完备的测试试剂、质控品、校正品组合完备的测试试剂、质控品、校正品组合l先进的基因重组试剂、合成试剂：先进的基因重组试剂、合成试剂：PT（基因重组、基因重组、WHO标标准）、准）、APTT（合成）合成）u检测动物标本结果可靠（检测动物标本结果可靠（ACL7000以上）以上）u各检测方法的检测项目各检测方法的检测项目l凝固法凝固法 PT,APTT,TT,FIB(PT-Based&FIB-Clauss),FactorsII,V,VII,X,VIII,IX,XI,XII,Protein C,Protein

5、S,APC-R,LAC,PCX,HPXl发色底物法发色底物法 Anti-thrombin,Heparin(普通普通&低分低分子子),PLG,Plasmin Inhibitor,Protein C l免疫比浊法免疫比浊法 D-Dimer,vWF Ag,vWF Act,Protein S,HS-CRPACL各型号的共同特点各型号的共同特点不同型号血凝仪检测原理介绍不同型号血凝仪检测原理介绍uACL 00/7000uACL 8/9/10000uACL FUTURA/ADVANCEuACL TOPACL 00/10000检测原理检测原理凝固法（散射比浊）凝固法（散射比浊）u凝固法：检测根据凝固法：检测

6、根据Fib的凝固形成颗粒，检测的凝固形成颗粒，检测900光散射值的增光散射值的增加值。信号经过软件设计的一系列数学运算法则连续监测凝固加值。信号经过软件设计的一系列数学运算法则连续监测凝固过程曲线，获得结果。过程曲线，获得结果。发色底物法发色底物法u通过物质的反应显色，检测吸光度变化值。通过物质的反应显色，检测吸光度变化值。免疫比浊法（透射比浊）免疫比浊法（透射比浊）u借助抗原抗体反应系统，检测反应终点吸光度借助抗原抗体反应系统，检测反应终点吸光度变化值；只表示含量，不反映所检物活性。变化值；只表示含量，不反映所检物活性。ACL 00/10000检测原理检测原理u凝固法（光散比浊检测）凝固法（

7、光散比浊检测）l波长：波长：660nm(ACL00/10000)u发色底物法（透射光比色检测）发色底物法（透射光比色检测）l波长：波长：405nm(ACL200以上仪器以上仪器)u免疫比浊法：免疫比浊法：（透射光比浊检测）（透射光比浊检测）l波长：波长：405nm(ACL200以上仪器以上仪器)凝凝固固法法发色底物和发色底物和免疫比浊法免疫比浊法ACL 00/10000检测原理检测原理 u离心式液体分配离心式液体分配系统系统：加入样品和加入样品和试剂后，反应盘试剂后，反应盘1200rpm旋转，使旋转，使其在其在瞬间充分混匀瞬间充分混匀，结果准确、精密，结果准确、精密度高；度高；ACL 00/1

8、0000检测原理检测原理u清洗缓冲液清洗缓冲液 Wash R Emulsion的作用：的作用：l清洗样本和试剂针内外表面；清洗样本和试剂针内外表面；l作为光学凝固（散射比浊法）中的检测参比作为光学凝固（散射比浊法）中的检测参比100l不能用其它自配的清洗液替代不能用其它自配的清洗液替代u反应盘反应盘Rotor：l20个独立反应杯；个独立反应杯；l每杯各有两个隔开的腔；每杯各有两个隔开的腔；l内圈装样本或第二试剂；内圈装样本或第二试剂；l外圈只装试剂；外圈只装试剂；l旋转过程，试剂和样本瞬间混匀；旋转过程，试剂和样本瞬间混匀；ACL ADVANCE检测原理检测原理u凝固法（透射比浊，凝固法（透射

9、比浊，880nm,180度角检测）度角检测）ACL ADVANCE检测原理检测原理u发色底物法：发色底物法：405nmACL ADVANCE检测原理检测原理u免疫比浊法：免疫比浊法：405nmACL TOP检测原理检测原理u凝固法（透射比浊，凝固法（透射比浊，671nm,180度角检测）度角检测）ACL TOP检测原理检测原理u发色底物法：发色底物法：405nmACL TOP检测原理检测原理u免疫比浊法：免疫比浊法：671nm或或405nm光学凝固法检测优点光学凝固法检测优点u直接测定，结果可靠直接测定，结果可靠u数据连续监测、本底扫描数据连续监测、本底扫描l提供凝固反应曲线，为实验室及临床提

10、供更多信提供凝固反应曲线，为实验室及临床提供更多信息息l去处黄疸血、高脂血本底，消除干扰去处黄疸血、高脂血本底，消除干扰l准确测定低纤维蛋白原样品准确测定低纤维蛋白原样品结果可靠结果可靠u光散检测原理光散检测原理l每次测试收集每次测试收集1100个数据点，连续平均数据处理方式，利用个数据点，连续平均数据处理方式，利用先进的第一微分和第二微分法则测定结果，稳定可靠，精密先进的第一微分和第二微分法则测定结果，稳定可靠，精密度高，重复性好度高，重复性好本底扫描，本底扫描，消除黄疸、消除黄疸、高血脂干扰高血脂干扰数据连续监测数据连续监测干扰因素干扰因素u游离血红蛋白游离血红蛋白1g/L,溶血到一定程度

11、溶血到一定程度,本身会本身会激活凝血因子激活凝血因子u甘油三酯甘油三酯7.7mmol/Lu胆红素胆红素256.5umol/L血栓止血临床基础血栓止血临床基础内因系外因系纤维蛋白凝固系活性化XII因子組織因子内皮細胞内皮細胞血管収縮血管収縮血管収縮血管収縮血管損傷血管損傷(出血出血)血小板血小板血小板血小板粘着放出凝集一次血栓内因系外因系纤维蛋白原線溶系活性化XII因子PA血液中包含的凝血因子血液中包含的凝血因子血凝瀑布学说血凝瀑布学说外源性凝血途径与外源性凝血途径与 PT PT是反映外是反映外源性凝血途径中源性凝血途径中II、V、VII、X因子因子水平的实验，水平的实验，PT只反映凝血因子只反

12、映凝血因子水平，并不反映水平，并不反映凝血因子是否活凝血因子是否活化。化。PT的的检测检测原理原理 in Blood in PlasmaPT 试剂试剂FibrinIIIExtrinsic System测测量凝血量凝血时间时间without组织组织因子因子Calcium(Ca2+)without正常范正常范围围10-14 secIX37癈癈Ca2+,PLCa2+,PLXIIIXIIXIXVIIIVIIVIVIIIIIIIVIXXIIIXIIXIXVIIIVIIVIVIIIIIIVIIIIIXVIIIBloodSamplingTrisodiumCitratePT INRu为了解决这一问题，目前国际

13、为了解决这一问题，目前国际上采用给予上采用给予PT试剂标定国际敏试剂标定国际敏感度指数感度指数(international sensitivity index,ISI）的方法的方法,并进以通过并进以通过相关公式计算出相关公式计算出:“国际标准化比值国际标准化比值”International Normalized Ratio,INR。PT-INR 口服抗凝药监测的重要指标口服抗凝药监测的重要指标据了解PT存在的主要问题在于INR!由于：所以INR不好可能原因有：病人PT或PT质控时间不对（可以通过以上几点检查）正常人PT时间（MNPT）不对试剂对应仪器的ISI值不对不适用不适用INR的三种情况包

14、括的三种情况包括uINR不适用于测定口服抗凝药初期的病人血浆，不适用于测定口服抗凝药初期的病人血浆，凝血因子凝血因子、的水平和活性在血浆中半寿的水平和活性在血浆中半寿期不同，所以在口服抗凝药初期这些因子的作用期不同，所以在口服抗凝药初期这些因子的作用与口服抗凝药稳定后与口服抗凝药稳定后PT延长中起的作用是不同的延长中起的作用是不同的uINR不适用于肝病不适用于肝病 凝血因子缺陷病人的血浆凝血因子缺陷病人的血浆uINR不适用于非抗凝治疗不适用于非抗凝治疗 而而PT延长的病人血浆。延长的病人血浆。维生素K依赖凝血因子口服华法令治疗机理和过程口服华法令治疗机理和过程u 华法令通过拮抗维生素华法令通过

15、拮抗维生素K的作用从而减少和阻止维生素的作用从而减少和阻止维生素K依赖的凝血因子依赖的凝血因子II、VII 、IX、X的合成，从而影响内源性凝血途径。的合成，从而影响内源性凝血途径。PT INR与华法林与华法林u抗栓机制：华法林抗栓机制：华法林 减少凝血酶原（减少凝血酶原（II）和和FX的作用的作用更重要更重要，减少减少FVII和和FIX相对较弱相对较弱。u华法林抗栓作用起效需要华法林抗栓作用起效需要6d，主要减少凝血酶原主要减少凝血酶原的生成（凝血酶原有较长的半寿期）。的生成（凝血酶原有较长的半寿期）。华法林抗凝作用起效需要华法林抗凝作用起效需要2d。PT INR与华法林与华法林华法林抗栓效

16、应的另一个提示华法林抗栓效应的另一个提示u血栓病人口服抗凝药治疗过渡中，肝素与华法血栓病人口服抗凝药治疗过渡中，肝素与华法林重叠直至林重叠直至PT INR延长至有效治疗范围，因延长至有效治疗范围，因为凝血酶原半寿期为为凝血酶原半寿期为6072h，故故重叠4d是必是必要的。要的。PT INR与华法林与华法林 WHOWHO的建议的建议u术前预防深静脉血栓术前预防深静脉血栓 2.02.5u髋关节和股骨骨折术前预防髋关节和股骨骨折术前预防 2.03.0u深静脉血栓或肺梗死治疗深静脉血栓或肺梗死治疗 2.03.0u短暂发作的局部缺血短暂发作的局部缺血 2.03.0u心肌梗死心肌梗死 3.04.5u动脉血

17、栓动脉血栓 3.04.5u心瓣膜置换或修复心瓣膜置换或修复 3.04.5PT INR与华法林与华法林 国内资料国内资料u术前预防深静脉血栓术前预防深静脉血栓 1.52.5u髋关节和股骨骨折术前预防髋关节和股骨骨折术前预防 2.02.5u深静脉血栓或肺梗死治疗深静脉血栓或肺梗死治疗 2.02.8u短暂发作的局部缺血短暂发作的局部缺血 2.02.8u心肌梗死心肌梗死 2.53.0u动脉血栓动脉血栓 2.53.0u心瓣膜置换或修复心瓣膜置换或修复 2.53.0活化部份凝血活酶时间APTT内源性凝血途径与内源性凝血途径与 APTTu是反映内源性凝是反映内源性凝血途径中血途径中VIII、IX、XI、XI

18、I因子水因子水平的实验，平的实验，APTT只反映因子水平只反映因子水平，并不反映凝血，并不反映凝血因子是否活化因子是否活化。APTT的的检测检测原理原理 in Blood in PlasmawithoutwithoutwithoutIXXIIIXIIXIXVIIIVIIVIVIIIIIIIXXIIIXIIXIXVIIIVIIVIVIIIIIIAPTT ReagentActivatorPLIntrinsic SystemMeasure Clotting TimeEllagic acid,silica etc.Calcium(Ca2+)Normal Range20-40 secCaCl2IVPho

19、spholipidFibrin37癈癈XIIIXXIVIIIXVIIICa2+,PLCa2+,PLBloodSamplingTrisodiumCitrate肝素与肝素与APTTu普通肝素通常采用普通肝素通常采用APTT监测，以判断疗效，监测，以判断疗效，该值一般应维持于正常值的该值一般应维持于正常值的1.52.5倍。倍。u不同设备与试剂不同设备与试剂APTT参考值略有不同。参考值略有不同。u即使即使APTT在治疗范围内，也可出现严重的出在治疗范围内，也可出现严重的出血并发症。血并发症。u最初最初2448小时内的小时内的APTT亚治疗量范围。亚治疗量范围。凝血因子凝血因子VII缺陷症缺陷症（遗传

20、性、获得性（遗传性、获得性）外源途径缺陷外源途径缺陷APTT(N)PT(A)APTT(N)PT(N)APTT(A)PT(N)APTT(A)PT(A)共同途径缺陷共同途径缺陷 凝血因子凝血因子I、II、V、X缺陷症缺陷症 （遗传性、获得性（遗传性、获得性）因子因子XIII定性定性实验阳性实验阳性内源途径缺陷内源途径缺陷 有出血症状有出血症状 无出血症状无出血症状 凝血因子凝血因子VIII、IX、XI缺陷症缺陷症 （遗传性、获得性（遗传性、获得性）凝血因子凝血因子XII、PK、HMWK缺陷症缺陷症 （遗传性、获得性（遗传性、获得性）凝血因子凝血因子XIIII缺陷症缺陷症（遗传性、获得性（遗传性、获

21、得性）FIB的的检测检测原理原理(Clauss方法方法)in Blood in PlasmawithoutwithoutwithoutIXXIIIXIIXIXVIIIVIIVIVIIIIIIIXXIIIXIIXIXVIIIVIIVIVIIIIIIThrombin ReagentFibrinMeasureClotting TimeThrombinNormal Range180-360 mg/dLCalculated forFibrinogen concentration37癈癈IIIBloodSamplingTrisodiumCitrate凝血酶时间凝血酶时间TT检测原理检测原理u试剂成分：试剂

22、成分：l浓缩牛凝血酶浓缩牛凝血酶l浓缩缓冲液：含浓缩缓冲液：含0.5mol/L氯化钙氯化钙l试剂配制：用试剂配制：用NCCLS II型或相同质量的去离子水按型或相同质量的去离子水按1:5(1+4)倍数按需稀释浓缩缓冲液，用来溶解凝血酶，用前混匀倍数按需稀释浓缩缓冲液，用来溶解凝血酶，用前混匀 u反应原理：反应原理：l在过量的纯化的牛凝血酶的存在下，样本中的纤维蛋白原被在过量的纯化的牛凝血酶的存在下，样本中的纤维蛋白原被转化为纤维蛋白，仪器检测凝固形成所需要的时间转化为纤维蛋白，仪器检测凝固形成所需要的时间 l类似于类似于Fib-C检测。检测。l凝血酶的含量低于凝血酶的含量低于Fib-C检测（检测（TT-5：3.0 UNIH/mL;Fib-C:17.5 UNIH/mL）l反应时间取决于共同途径的因子水平反应时间取决于共同途径的因子水平l丁香园论坛资料：丁香园论坛资料：http:/ u肝素抗凝治疗和溶栓治疗的监测肝素抗凝治疗和溶栓治疗的监测 u纤维蛋白或者纤维蛋白原降解产物（纤维蛋白或者纤维蛋白原降解产物（FDP）异）异常监测常监测u遗传性、获得性纤维蛋白原的数量或者质量异遗传性、获得性纤维蛋白原的数量或者质量异常监测常监测u纤溶亢进监测纤溶亢进监测谢谢谢谢