单个核细胞分离课件.ppt
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- 单个 细胞 分离 课件
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1、 单个核细胞的分离单个核细胞的分离实验目的 1熟悉免疫细胞分离的常用方法。2掌握外周血单个核细胞分离方法的原理、操作规程。免疫系统免疫系统 免疫器官免疫器官 免疫细胞免疫细胞 免疫分子免疫分子外周血细胞成分外周血细胞成分淋巴细胞淋巴细胞单核细胞单核细胞粒细胞粒细胞红细胞和血小板红细胞和血小板不同细胞密度不同不同细胞密度不同人的红细胞密度为人的红细胞密度为1.093 粒细胞密度为粒细胞密度为1.092 单个核细胞(淋巴细胞和单核细胞)的密度为单个核细胞(淋巴细胞和单核细胞)的密度为1.075-1.090 血小板:血小板:1.0301.035细胞分离基本原理细胞分离基本原理不同细胞密度不同不同细胞
2、密度不同不同细胞表面生物学特性不同不同细胞表面生物学特性不同不同细胞表面分化抗原不同不同细胞表面分化抗原不同人外周血单个核细胞(人外周血单个核细胞(peripheral blood peripheral blood mononuclear cellmononuclear cell,PBMCPBMC)包括淋巴细胞和单)包括淋巴细胞和单核细胞核细胞,是免疫学实验中常用的细胞群。是免疫学实验中常用的细胞群。【实验原理】人外周血单个核细胞的体积、形态和比重与外周血其他细胞不同。因此利用一种介于1.0751.090之间而近于等渗的聚蔗糖-泛影葡胺(ficoll-hypaque 比重比重 1.0770.0
3、01)混合分离液作密度梯度离心,离心后不同比重的血细胞在分离液中呈梯度分布。从而分离出PBMC。Ficoll分层液分层液 聚蔗糖聚蔗糖-泛影葡胺泛影葡胺:商品名为商品名为Ficoll,其密度为其密度为1.0770.001。主要用于分离外周血中的单个核细胞,是一主要用于分离外周血中的单个核细胞,是一种单次差速密度梯度离心的分离法。种单次差速密度梯度离心的分离法。其主要成分其主要成分:2份浓度为浓度为6、密度为密度为1.020 g/L聚蔗糖聚蔗糖(商品名为商品名为Ficoll)与与1份浓度为浓度为34、密度为密度为1.200 g/L泛影葡胺水溶液混合。泛影葡胺水溶液混合。用用1.0771.0770
4、.0010.001的分层液可将细胞分离的分层液可将细胞分离 密度梯度离心密度梯度离心(FicollFicoll)离心离心试剂与器材试剂与器材 1.标本标本 外周静脉血加外周静脉血加EDTA-K2抗凝,或抗凝,或1000U/ml肝素抗凝血。肝素抗凝血。2.淋巴细胞分离液(聚蔗糖淋巴细胞分离液(聚蔗糖-泛影葡胺,比重泛影葡胺,比重(1.0770.001)有商品供应。)有商品供应。3.Hanks液液 4.台盼蓝染液台盼蓝染液 5.器材器材 水平式离心机、显微镜、细胞计数板等。水平式离心机、显微镜、细胞计数板等。操作方法操作方法 1.取静脉血放入抗凝管,摇匀,先作白细胞计数,然取静脉血放入抗凝管,摇匀
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