血流感染标本和呼吸道标本操作规范及临床意义培训讲义课件.ppt

1、血流感染标本和呼吸道标本操作规范及临床意义采集患者的血液或无菌体液标本采集患者的血液或无菌体液标本,送至微生物实验室送至微生物实验室培养检测培养检测.检测原本无菌的血液及体液中是否有细菌存在检测原本无菌的血液及体液中是否有细菌存在.如有细菌如有细菌,则极有可能为致病的细菌则极有可能为致病的细菌.进一步进行鉴定进一步进行鉴定/药敏试验药敏试验.医师开出医嘱医师开出医嘱护理人员收集送检样本护理人员收集送检样本实验室检测、分离并鉴定导致血流感染的微生物实验室检测、分离并鉴定导致血流感染的微生物三级报告：为临床医生提供抗菌药物敏感性试验结果三级报告：为临床医生提供抗菌药物敏感性试验结果采血时机不合适采

2、血时机不合适采血套数不够采血套数不够采血量不足采血量不足只做需氧培养，不同时做厌氧培养只做需氧培养，不同时做厌氧培养采血前或采血时正在使用抗生素治疗采血前或采血时正在使用抗生素治疗采血量(ml)与检出率的关系大部分临床意义的致病菌都在培养的前3天检出严重的局部感染(脑膜炎，心内膜炎，肺炎，肾盂肾炎，腹部术后感染，)基础成分：特殊蛋白胨、淀粉、氯化钠、琼脂粉、蒸馏水。敏感性（38%-100%）特异性（14%-100%）。,Foltzer M.怀疑患者有血流感染的症状有：采集患者的血液或无菌体液标本,送至微生物实验室培养检测.氧化酶阳性：假单胞菌属、弧菌属、气单胞菌属、产碱杆菌属、奈瑟菌属等。关于

3、夜班血培养的送检血平板可形成“卫星现象”。如有细菌,则极有可能为致病的细菌.溶血：不完全溶血，主要有草链、肺链（湿润、脐窝状、OP阳性）、粪肠、屎肠等。血平板：判读细菌在体内的基本生长情况，分离培养苛氧和非苛氧菌。白细胞：鳞状上皮细胞2.血平板：反映细菌在体内的生长情况，用于半定量的判断，观察是否存在溶血、判断优势菌。缺乏鳞状上皮细胞提示混合厌氧菌感染特殊患者才考虑厌氧培养。下呼吸道标本 Lower Respiratory Tract Specimens血流感染与血培养血流感染与血培养的规范实践的规范实践想采就采想采就采冷藏可能导致对温度敏感的耐瑟氏菌等死亡。实验室检测、分离并鉴定导致血流感染

4、的微生物在培养的前2天,检出率为94%不可以，常规血培养不宜从静脉导管或静脉留置装置中采集，检出污染或定植菌的可能性较大。成双革兰氏阳性球菌，短链=肺炎链球菌感染菌与污染菌不易区分支原体、衣原体与立克次体研究显示，国内常规痰标本中约半数存在唾液严重污染现象。接板、读板顺序：血平板、嗜血巧克力平板、麦康凯平板大肠菌群包括埃希菌属和肠杆菌科，发酵乳糖产酸，菌落颜色粉红或红色。关于各种血液标本的采集顺序溶血：不完全溶血，主要有草链、肺链（湿润、脐窝状、OP阳性）、粪肠、屎肠等。特殊成分：血红蛋白粉和NAD分别含X因子和V因子，嗜血杆菌生长所必须；6），3530min，使痰液均值化后备用。关于夜班血培

5、养的送检临床上约半数咳痰标本不合格！采血量(ml)与检出率的关系凝固酶阴性：表葡、溶葡、头葡等，致病力弱，需连续检出才能确定为致病菌。如有细菌,则极有可能为致病的细菌.采集患者的血液或无菌体液标本,送至微生物实验室培养检测.免疫抑制的病人也会出现中性粒细胞减少临床上约半数咳痰标本不合格！接板、读板顺序：血平板、嗜血巧克力平板、麦康凯平板下呼吸道咳出的痰，含鳞状上皮细胞少，白细胞较多。嗜血巧克力平板：分离培养苛氧菌，尤其适用与嗜血杆菌。凝固酶阳性：金葡、施氏葡、中间葡等采血前或采血时正在使用抗生素治疗采血量(ml)与检出率的关系培养瓶夜班未能及时送到检验科，存在室温即可，不能冷藏也不能放入35

6、的温箱。冷藏可能导致对温度敏感的耐瑟氏菌等死亡。痰培养：取脓性痰、粘液脓性痰支原体、衣原体与立克次体除非怀疑导管相关性血流感染，请参照导管相关性血流感染的采血方法。对于非持续性菌血症，同时或短时间内采集2-3套血培养，因为体内巨噬细胞吞噬系统会在1530min内清除掉进入人体内的细菌。因多部位同时发生污染的几率较小，便于对结果进判断万古霉素，抑制阳性菌生长。要求至少采两份标本，即40ml。实验室检测、分离并鉴定导致血流感染的微生物怀疑血流感染或脓毒症时，应常规行血培养。怀疑血流感染或脓毒症时，应常规行血培养。怀疑患者有血流感染的症状有：怀疑患者有血流感染的症状有：不明原因的发烧不明原因的发烧(

7、38)或体温过低或体温过低(36)白细胞增多（白细胞增多（10,000/ul），粒细胞减少（），粒细胞减少（1,000/ul）休克，寒颤，僵直休克，寒颤，僵直 严重的局部感染严重的局部感染(脑膜炎，心内膜炎，肺炎，肾盂肾炎，脑膜炎，心内膜炎，肺炎，肾盂肾炎，腹部术后感染，腹部术后感染，)心率异常加快心率异常加快 低血压或高血压低血压或高血压 呼吸频率加快呼吸频率加快呼吸道标本的涂片评估模式溶血：不完全溶血，主要有草链、肺链（湿润、脐窝状、OP阳性）、粪肠、屎肠等。台湾长庚医院BACTEC 9240 23台值得注意：嗜麦芽氧化酶阴性。免疫抑制的病人也会出现中性粒细胞减少关于夜班血培养的送检不明原

8、因的发烧(38)或体温过低(36)下呼吸道标本 Lower Respiratory Tract Specimens酵母菌样，酵母菌是一种很少引起肺炎的细菌，常由口腔污染 合格痰标本少量生长，但与涂片镜检结果一致(肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、卡他莫拉菌)；嗜血巧克力平板：分离培养苛氧菌，尤其适用与嗜血杆菌。因多部位同时发生污染的几率较小，便于对结果进判断革兰氏阴性双球菌=卡他莫拉菌3号胆盐和结晶紫，抑制阳性菌及真菌生长。支原体、衣原体与立克次体支原体、衣原体与立克次体咽痛、鼻涕、常常会发热。Bourbeau PP.合格痰标本少量生长，但与涂片镜检结果一致(肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、卡他莫拉菌)；不

9、明原因的发烧(38)或体温过低(36)2007;45:3546-3548特殊成分：血红蛋白粉和NAD分别含X因子和V因子，嗜血杆菌生长所必须；成双革兰氏阳性球菌，短链=肺炎链球菌血培养采血时机血培养采血时机细菌浓度细菌浓度体温体温03060时间(分钟)成人成人“一套一套”血培养应该包括需氧瓶和厌氧瓶各一个，血培养应该包括需氧瓶和厌氧瓶各一个，也叫也叫“一份一份”注意：一次穿刺采血，算注意：一次穿刺采血，算“一套一套”，采集第二套应从另，采集第二套应从另一个穿刺点获得。一个穿刺点获得。儿童一般只做需氧培养，但仍需从多个部位采集多次。儿童一般只做需氧培养，但仍需从多个部位采集多次。特殊患者才考虑厌

10、氧培养。特殊患者才考虑厌氧培养。Weinstein et al.Detection of Bloodstream Infections in Adults:How Many BloodCultures Are Needed J Clin Microbiol.2007;45:3546-3548采集采集1套无法判断是套无法判断是病原菌还是污染病原菌还是污染菌。菌。2 23 3套血培养，有助于污染的判断。套血培养，有助于污染的判断。每位患者每次采血最少每位患者每次采血最少2 2套，套，3 3套更好套更好初发患者，绝不能只采初发患者，绝不能只采1 1套标本套标本多个穿刺部位采血。因多部位同时发生污染的

11、几率较小，便于多个穿刺部位采血。因多部位同时发生污染的几率较小，便于对结果进判断对结果进判断关于标本采集间隔时间对于非持续性菌血症，同时或短时间内采集对于非持续性菌血症，同时或短时间内采集2-3套血培养，因为体套血培养，因为体内巨噬细胞吞噬系统会在内巨噬细胞吞噬系统会在1530min内清除掉进入人体内的细菌内清除掉进入人体内的细菌。可疑急性心内膜炎患者要立即取血作血培养，可疑急性心内膜炎患者要立即取血作血培养，30分钟内完成分钟内完成3套血套血培养的采集，采集后立即进行抗菌药的经验治疗。如果培养的采集，采集后立即进行抗菌药的经验治疗。如果24小时内小时内报告阴性，则继续采集报告阴性，则继续采集

12、2套血培养。套血培养。可疑的亚急性心内膜炎患者每间隔可疑的亚急性心内膜炎患者每间隔30分钟至分钟至1h采集采集1套，连续采套，连续采集集3套标本。如果套标本。如果24小时内报告阴性，则继续采集小时内报告阴性，则继续采集2套血培养。套血培养。血培养物每增加一毫升，真性菌血症血培养物每增加一毫升，真性菌血症成年人微生物的检出率增加成年人微生物的检出率增加3 但并非越多越好，超过一定数量的采血量会稀释培但并非越多越好，超过一定数量的采血量会稀释培养瓶内的肉汤，使肉汤无法有效中和血中的抑制物质养瓶内的肉汤，使肉汤无法有效中和血中的抑制物质（补体、抗体、抗生素）。所以血液与肉汤的最佳比例（补体、抗体、抗

13、生素）。所以血液与肉汤的最佳比例为为1：41：10关于采集血液量采血量是影响灵敏度最关键因素采血量是影响灵敏度最关键因素成人一份标本成人一份标本2个培养瓶（需氧厌氧），每瓶个培养瓶（需氧厌氧），每瓶810ml，共，共20ml；要求至少采两份标本，；要求至少采两份标本，即即40ml。儿童一般只需采集需氧瓶，在保证采集血量儿童一般只需采集需氧瓶，在保证采集血量1总血量下，一般为总血量下，一般为1-3ml采血量不足时应优先保证需氧瓶，因临床采血量不足时应优先保证需氧瓶，因临床90以上的感染为需氧菌或兼性需氧菌感染以上的感染为需氧菌或兼性需氧菌感染各种血液标本的采集顺序各种血液标本的采集顺序血培养对无

14、菌操作的要求比注射、采集生化、凝血等其它血培养对无菌操作的要求比注射、采集生化、凝血等其它标本要高。标本要高。所以要最先采集血培养标本。所以要最先采集血培养标本。污染率的指标是污染率的指标是 3%3%（100100份标本里只能有不到份标本里只能有不到3 3个标本出个标本出现污染）。现污染）。皮肤消毒程序：皮肤消毒程序：推荐使用碘町、洗必泰或碘伏作为皮肤消推荐使用碘町、洗必泰或碘伏作为皮肤消毒剂。毒剂。碘町作用碘町作用1min碘伏作用碘伏作用1.5-2min洗必泰作用时间与碘町一样（但不能用于洗必泰作用时间与碘町一样（但不能用于少于少于2个月婴儿皮肤消毒）个月婴儿皮肤消毒）培养瓶的消毒程序：培养

15、瓶的消毒程序：去掉培养瓶口的塑料瓶盖。去掉培养瓶口的塑料瓶盖。75%75%酒精消毒血培养瓶橡皮塞子酒精消毒血培养瓶橡皮塞子6060秒。秒。自然自然。将标本注入培养瓶内。将标本注入培养瓶内。5.5.颠倒混匀标本与肉汤，以避免血液凝集。颠倒混匀标本与肉汤，以避免血液凝集。培养瓶的储存温度关于未用培养瓶的储存温度 不需冷藏，更不能冷冻。保存在1525的室温即可，温度过低会导致对温度敏感的耐瑟氏菌等死亡。,Foltzer M.嗜血巧克力平板：分离培养苛氧菌，尤其适用与嗜血杆菌。Weinstein et al.怀疑患者有血流感染的症状有：注意：一次穿刺采血，算“一套”，采集第二套应从另一个穿刺点获得。采

16、血量(ml)与检出率的关系,Foltzer M.免疫抑制的病人也会出现中性粒细胞减少白细胞增多（10,000/ul），粒细胞减少（1,000/ul）鉴别诊断：流感：V+X因子；血平板可形成“卫星现象”。但并非越多越好，超过一定数量的采血量会稀释培养瓶内的肉汤，使肉汤无法有效中和血中的抑制物质（补体、抗体、抗生素）。因多部位同时发生污染的几率较小，便于对结果进判断可疑急性心内膜炎患者要立即取血作血培养，30分钟内完成3套血培养的采集，采集后立即进行抗菌药的经验治疗。痰涂片：平时处理痰标本就必须涂片，这是基本工作之一，不会因为院感和临床医生的要求而增加，也不会因为他们不要求，或者人手不足就不做。关

17、于各种血液标本的采集顺序分离出化脓性链球菌、无乳链球菌、产单核李斯特菌、脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌、其它假丝酵母菌和新型隐球菌时污染的可能性更低。呼吸道标本中未被染色的，有折射的杆菌=抗酸杆菌夜班血培养的送检夜班血培养的送检 “加入标本后的培养瓶夜班未能及时送到加入标本后的培养瓶夜班未能及时送到检验科，可以冷藏或放入检验科，可以冷藏或放入35的温箱。的温箱。”关于夜班血培养的送检关于夜班血培养的送检采血部位 关于从静脉留置装置直接采血关于从静脉留置装置直接采血不可以，常规血培养不宜从静脉导管或静脉留不可以，常规血培养不宜从静脉导管或静脉留置装置中采集，检出污染或定植菌的可能性较大。除置装置中采集

18、，检出污染或定植菌的可能性较大。除非怀疑导管相关性血流感染，请参照导管相关性血流非怀疑导管相关性血流感染，请参照导管相关性血流感染的采血方法。感染的采血方法。血培养标本的拒收瓶子上帖的标签错误或未帖标签。瓶子上帖的标签错误或未帖标签。血培养瓶打破的、损坏的或渗漏。血培养瓶打破的、损坏的或渗漏。血液凝固。血液凝固。推荐使用商品化的培养基使用添加抗菌药物吸附剂的血培养瓶有助于提高已接受抗菌药物治疗患者血培养的检出率，增加细菌的分离率和分离速度，但同时也会增加污染菌的检出率。血培养报阳时间Bourbeau PP.,Foltzer M.Routine incubation of BacT/ALERT

19、FA and FN blood culture bottles for more than 3 days may not be necessary.J Clin Microbiol.2005;43:2506-2509 血培养的危急报告制度1.初步报告 血培养阳性报警后，应立即抽取培养液进行涂片、革兰染色、显微镜镜检，初步药敏试验，并将结果向临床主管医生进行紧急报告。2.二级报告 阳性报警的血培养转种培养基培养1618小时后，观察培养基上菌落形态、革兰染色后菌体形态以及初步药敏结果，尽可能通知临床初步鉴定结果和某些耐药特征。3.最终（书面）报告 报告最终菌种鉴定及药敏试验结果菌种鉴定对判断血培养

20、污染的价值当分离出的微生物为金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌以及其他肠杆菌科细菌、铜绿假单胞菌、白色假丝酵母菌时，90%以上是血流感染病原菌。分离出化脓性链球菌、无乳链球菌、产单核李斯特菌、脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌、其它假丝酵母菌和新型隐球菌时污染的可能性更低。棒状杆菌、微球菌、气球菌、芽胞杆菌、丙酸杆菌、草绿色链球菌和凝固酶阴性葡萄球菌等很少是菌血症的病原菌，如重复检出才考虑为病原菌。如有细菌,则极有可能为致病的细菌.“培养瓶未使用时，需要冷藏或冷冻。痰培养：取脓性痰、粘液脓性痰因多部位同时发生污染的几率较小，便于对结果进判断采血量(ml)与检出率的关系成双革兰氏阳性球菌，短链=肺炎

21、链球菌咽痛、鼻涕、常常会发热。革兰阳性球菌：菌落较小、干燥、凸起、部分有特殊气味（葡萄球菌属）；特殊成分：脱纤维绵羊血，鉴别溶血反应和提供X因子（血红素）。触酶阳性：葡萄球菌属、李斯特菌属等。,Foltzer M.接板、读板顺序：血平板、嗜血巧克力平板、麦康凯平板血平板可形成“卫星现象”。当怀疑血流感染或脓毒症时，应常规行血培养。敏感性（38%-100%）特异性（14%-100%）。关于血培养套数与采血部位在培养的前2天,检出率为94%万古霉素，抑制阳性菌生长。les)/episode2-3 sets(4-6 bottles)/episode9,000-10,000 bottles/month

22、100,000 bottles/year如有细菌,则极有可能为致病的细菌.痰标本的正常菌群主要以阳性菌为主。颠倒混匀标本与肉汤，以避免血液凝集。所以血液与肉汤的最佳比例为1：41：10 合格痰标本少量生长，但与涂片镜检结果一致(肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、卡他莫拉菌)；采血前或采血时正在使用抗生素治疗实验室检测、分离并鉴定导致血流感染的微生物鉴别诊断：流感：V+X因子；关于采血套数及部位 合格痰标本少量生长，但与涂片镜检结果一致(肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、卡他莫拉菌)；基础成分：特殊蛋白胨、淀粉、氯化钠、琼脂粉、蒸馏水。特殊成分：血红蛋白粉和NAD分别含X因子和V因子，嗜血杆菌生长所必须；值得注

23、意：嗜麦芽氧化酶阴性。判断是否合格标本：白细胞：鳞状上皮细胞2.不需冷藏，更不能冷冻。不明原因的发烧(38)或体温过低(36)白细胞：鳞状上皮细胞2.胞内细菌 提示感染痰培养：取脓性痰、粘液脓性痰可疑的亚急性心内膜炎患者每间隔30分钟至1h采集1套，连续采集3套标本。大部分临床意义的致病菌都在培养的前3天检出在培养的前2天,检出率为94%上呼吸道感染：绝大部分呼吸道感染局限于口咽、鼻咽和鼻腔口咽、鼻咽和鼻腔部位；导致 咽痛、鼻涕、常常会发热。感染喉部、中耳、鼻窦炎、结膜炎或角膜炎。可能与严重疾病百日咳、流行性感冒、麻疹和传染性单核细胞增多症并存。自然咳痰自然咳痰诱导痰诱导痰 气管内吸取物气管内

24、吸取物支气管肺泡灌洗液支气管肺泡灌洗液保护性毛刷保护性毛刷支气管灌洗液支气管灌洗液 肺部组织肺部组织不需冷藏，更不能冷冻。,Foltzer M.台大医院BACTEC 9240 18台痰培养：取脓性痰、粘液脓性痰75%酒精消毒血培养瓶橡皮塞子60秒。关于夜班血培养的送检感染菌与污染菌不易区分麦康凯：用于检测大肠菌群和肠道致病菌。采血量(ml)与检出率的关系革兰阳性球菌：菌落较小、干燥、凸起、部分有特殊气味（葡萄球菌属）；要求至少采两份标本，即40ml。因多部位同时发生污染的几率较小，便于对结果进判断只做需氧培养，不同时做厌氧培养在培养的前2天,检出率为94%2005;43:2506-2509关于

25、未用培养瓶的储存温度不发酵乳糖，菌落颜色透明或半透明。但并非越多越好，超过一定数量的采血量会稀释培养瓶内的肉汤，使肉汤无法有效中和血中的抑制物质（补体、抗体、抗生素）。鉴别诊断：流感：V+X因子；触酶阳性：葡萄球菌属、李斯特菌属等。棒状杆菌、微球菌、气球菌、芽胞杆菌、丙酸杆菌、草绿色链球菌和凝固酶阴性葡萄球菌等很少是菌血症的病原菌，如重复检出才考虑为病原菌。病原体种类繁多而复杂使下呼吸道感染病原诊断成为难题使下呼吸道感染病原诊断成为难题细菌（包括放线菌与奴卡菌，厌氧菌与分枝杆菌）细菌（包括放线菌与奴卡菌，厌氧菌与分枝杆菌）真菌（包括肺孢子菌）真菌（包括肺孢子菌）病毒病毒支原体、衣原体与立克次体

26、支原体、衣原体与立克次体原虫原虫寄生虫寄生虫 咳痰途经口咽部不可避免地受到污染不可避免地受到污染唾液中口咽部定植菌的浓度可达唾液中口咽部定植菌的浓度可达108-109/ml。研究显示，国内常规痰标本中约半数存在唾液严重污染研究显示，国内常规痰标本中约半数存在唾液严重污染现象。现象。我国痰细菌培养现状标本送检率低标本送检率低苛养菌检出率极低苛养菌检出率极低结果重复性差结果重复性差报告速度慢报告速度慢感染菌与污染菌不易区分感染菌与污染菌不易区分药敏结果与治疗反应存在差距药敏结果与治疗反应存在差距咳痰标本的采集标本采集方法标本采集方法 医师或护士直视下采集标本医师或护士直视下采集标本 病人先漱口，去

27、除表面的菌群病人先漱口，去除表面的菌群 教育病人深咳，收集从下呼吸道咳出的痰液教育病人深咳，收集从下呼吸道咳出的痰液临床上约半数咳痰标本不合格！临床上约半数咳痰标本不合格！不可以，常规血培养不宜从静脉导管或静脉留置装置中采集，检出污染或定植菌的可能性较大。污染率的指标是 3%（100份标本里只能有不到3个标本出现污染）。咽痛、鼻涕、常常会发热。如有细菌,则极有可能为致病的细菌.特殊成分：乳糖和中性红，大肠菌群为粉红/红色，肠道致病菌为透明；凝固酶阳性：金葡、施氏葡、中间葡等凝固酶阴性：表葡、溶葡、头葡等，致病力弱，需连续检出才能确定为致病菌。合格痰标本少量生长，但与涂片镜检结果一致(肺炎链球菌

28、、流感嗜血杆菌、卡他莫拉菌)；所以血液与肉汤的最佳比例为1：41：10基础成分：特殊蛋白胨、淀粉、氯化钠、琼脂粉、蒸馏水。成人“一套”血培养应该包括需氧瓶和厌氧瓶各一个，也叫“一份”注意：一次穿刺采血，算“一套”，采集第二套应从另一个穿刺点获得。分离出化脓性链球菌、无乳链球菌、产单核李斯特菌、脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌、其它假丝酵母菌和新型隐球菌时污染的可能性更低。在培养的前2天,检出率为94%台大医院BACTEC 9240 18台吸入性肺炎标本革兰氏染色的典型形式，培养只会培养出正常菌群，所以革兰氏染色是用于诊断的方法。（优选）血流感染标本和呼吸道标本操作规范及临床意义三级报告：为临床医生提供

29、抗菌药物敏感性试验结果,Foltzer M.“每瓶采集多少血液无特殊要求。特殊成分：血红蛋白粉和NAD分别含X因子和V因子，嗜血杆菌生长所必须；敏感性（33%-100%）特异性（50%-100%）。痰标本的正确采集标本质控标本质控带血痰带血痰唾液唾液oror诱导痰诱导痰 (?)(?)脓痰脓痰粘液样痰粘液样痰关于血培养指征采血量(ml)与检出率的关系因多部位同时发生污染的几率较小，便于对结果进判断特殊成分：血红蛋白粉和NAD分别含X因子和V因子，嗜血杆菌生长所必须；白细胞：鳞状上皮细胞2.“何时采血进行血培养，无特殊时间要求。教育病人深咳，收集从下呼吸道咳出的痰液鉴别诊断：流感：V+X因子；氧化

30、酶阳性：假单胞菌属、弧菌属、气单胞菌属、产碱杆菌属、奈瑟菌属等。革兰阴性杆菌：菌落较大、湿润、扁平、部分有特殊气味（大肠、铜绿）；成双革兰氏阳性球菌，短链=肺炎链球菌关于采血套数及部位不明原因的发烧(38)或体温过低(36)特殊成分：血红蛋白粉和NAD分别含X因子和V因子，嗜血杆菌生长所必须；在培养的前2天,检出率为94%特殊成分：血红蛋白粉和NAD分别含X因子和V因子，嗜血杆菌生长所必须；采集1套无法判断是病原菌还是污染菌。关于未用培养瓶的储存温度颠倒混匀标本与肉汤，以避免血液凝集。“为减轻患者痛苦，只从一个穿刺部位采一份血液标本即可。如有细菌,则极有可能为致病的细菌.细胞学筛选标本细胞学筛

31、选标本n 合格标本合格标本 下呼吸道咳出的痰，含下呼吸道咳出的痰，含鳞状上皮细胞少，白细鳞状上皮细胞少，白细胞较胞较多多。白白细胞：鳞状细胞：鳞状上皮细胞上皮细胞2.5：1。细胞内细菌细胞内细菌胞内细菌胞内细菌 提示感染提示感染冷藏可能导致对温度敏感的耐瑟氏菌等死亡。革兰氏阴性杆菌大且肥厚=肺炎克雷伯菌或其他肠道菌怀疑患者有血流感染的症状有：,Foltzer M.推荐使用碘町、洗必泰或碘伏作为皮肤消毒剂。在培养的前2天,检出率为94%血培养是进行血流感染诊断的最佳手段关于各种血液标本的采集顺序保存在1525的室温即可，温度过低会导致对温度敏感的耐瑟氏菌等死亡。吸入性肺炎标本革兰氏染色的典型形式

32、，培养只会培养出正常菌群，所以革兰氏染色是用于诊断的方法。基础成分：特殊蛋白胨、淀粉、氯化钠、琼脂粉、蒸馏水。“何时采血进行血培养，无特殊时间要求。冷藏可能导致对温度敏感的耐瑟氏菌等死亡。污染率的指标是 3%（100份标本里只能有不到3个标本出现污染）。Weinstein et al.免疫抑制的病人也会出现中性粒细胞减少感染菌与污染菌不易区分临床上约半数咳痰标本不合格！柱状纤毛上皮细胞柱状纤毛上皮细胞肺泡巨噬细胞肺泡巨噬细胞滑石颗粒滑石颗粒淀粉样小体淀粉样小体见于迁延长时间的呼吸道疾病见于迁延长时间的呼吸道疾病弹性纤维弹性纤维库什曼螺旋体库什曼螺旋体呈链排列的革兰阳性球菌和革兰阴性球杆菌。缺乏

33、鳞状上呈链排列的革兰阳性球菌和革兰阴性球杆菌。缺乏鳞状上皮细胞提示混合厌氧菌感染皮细胞提示混合厌氧菌感染你看见多少种形态？你看见多少种形态？呼吸道标本中未被染色的，有折射的杆菌呼吸道标本中未被染色的，有折射的杆菌=抗酸杆菌抗酸杆菌呈链排列的革兰阳性球菌？或革兰阳性分枝杆菌？呈链排列的革兰阳性球菌？或革兰阳性分枝杆菌？肺中的结节吸出物，不规则肺中的结节吸出物，不规则“球菌球菌”，分叉，无短链，链的末端的呈尖状，都，分叉，无短链，链的末端的呈尖状，都证明是分枝状的革兰阳性杆菌，可能是放线菌或诺卡菌（通常来自脑或肺组织证明是分枝状的革兰阳性杆菌，可能是放线菌或诺卡菌（通常来自脑或肺组织的标本）的标本

34、）呼吸道标本的涂片评估模式呼吸道标本的涂片评估模式痰标本的培养常用培养基作用及成分平板的初步判读平板的初步判读细菌的初步鉴定细菌的初步鉴定胞内细菌 提示感染阳性报警的血培养转种培养基培养1618小时后，观察培养基上菌落形态、革兰染色后菌体形态以及初步药敏结果，尽可能通知临床初步鉴定结果和某些耐药特征。人工气道：气管内吸引，可避免口腔正常菌群的污染。痰培养：取脓性痰、粘液脓性痰前处理：用无菌盐水将痰洗涤3次，除去痰液表面的常居菌，加入等量的1%胰酶溶液（PH7.麦康凯：用于检测大肠菌群和肠道致病菌。PSB(聚苯乙烯-丁二烯共聚物):保护性毛刷采样获取下呼吸道分泌物进行培养。儿童一般只做需氧培养，

35、但仍需从多个部位采集多次。关于未用培养瓶的储存温度革兰氏阴性球杆菌（小）=流感嗜血杆菌感染菌与污染菌不易区分氧化酶阳性：假单胞菌属、弧菌属、气单胞菌属、产碱杆菌属、奈瑟菌属等。Detection of Bloodstream Infections in Adults:How Many很少有或没有中性粒细胞采血量(ml)与检出率的关系接板、读板顺序：血平板、嗜血巧克力平板、麦康凯平板（优选）血流感染标本和呼吸道标本操作规范及临床意义采血前或采血时正在使用抗生素治疗“消毒的重点是足够量的消毒剂。三级报告：为临床医生提供抗菌药物敏感性试验结果判断是否合格标本：白细胞：鳞状上皮细胞2.敏感性（33%-

36、100%）特异性（50%-100%）。许多不着色的有折射的杆状细菌痰培养：取脓性痰、粘液脓性痰痰标本的正常菌群主要以阳性菌为主。嗜血巧克力平板：分离培养苛氧菌，尤其适用与嗜血杆菌。呼吸道标本中未被染色的，有折射的杆菌=抗酸杆菌关于夜班血培养的送检可能是肺结核，抗酸杆菌不能被革兰氏染色所染色。保存在1525的室温即可，温度过低会导致对温度敏感的耐瑟氏菌等死亡。许多不着色的有折射的杆状细菌不需冷藏，更不能冷冻。合格痰标本少量生长，但与涂片镜检结果一致(肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、卡他莫拉菌)；报告临床医生“提示吸入性肺炎”临床上约半数咳痰标本不合格！合格痰标本少量生长，但与涂片镜检结果一致(肺炎链球

37、菌、流感嗜血杆菌、卡他莫拉菌)；嗜血巧克力平板：分离培养苛氧菌，尤其适用与嗜血杆菌。只做需氧培养，不同时做厌氧培养（优选）血流感染标本和呼吸道标本操作规范及临床意义判断是否合格标本：白细胞：鳞状上皮细胞2.下呼吸道标本 Lower Respiratory Tract Specimens麦康凯：用于检测大肠菌群和肠道致病菌。感染菌与污染菌不易区分 合格痰标本培养优势菌中度以上生长(+)，结合临床症状判断（+）；培养结果的判读有意义：有意义：合格痰标本培养优势菌中度以上生长合格痰标本培养优势菌中度以上生长(+)+)，结合临床症，结合临床症状判断（状判断（+）；）；合格痰标本少量生长，但与涂片镜检结果一致合格痰标本少量生长，但与涂片镜检结果一致(肺炎链球菌肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、卡他莫拉菌、流感嗜血杆菌、卡他莫拉菌)；3d3d内多次培养到相同细菌；内多次培养到相同细菌；涂片革兰染色镜检发现典型肺炎链球菌、流感嗜血杆菌之类涂片革兰染色镜检发现典型肺炎链球菌、流感嗜血杆菌之类的苛养菌，即使培养阴性，也有重要参考意义。的苛养菌，即使培养阴性，也有重要参考意义。