血浆循环icroRNA提取检测及其在冠心病的表达课件.ppt
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- 关 键 词:
- 血浆 循环 icroRNA 提取 检测 及其 冠心病 表达 课件
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1、血浆循环血浆循环MicroRNAMicroRNA提取检测及其在冠心病的表达提取检测及其在冠心病的表达 郑志伟郑志伟 劳海燕劳海燕 余细勇余细勇 林秋雄林秋雄 朱杰宁朱杰宁 王玲王玲 孙硕孙硕 陈纪言陈纪言 钟诗龙钟诗龙 广东省人民医院医学研究中心,广东省心血管病研究所广东省人民医院医学研究中心,广东省心血管病研究所讲述目录讲述目录简述血浆循环简述血浆循环miRNA提取检测提取检测的方法的方法采用前述建立的方法,在采用前述建立的方法,在25例冠例冠心病患者和心病患者和30例健康对照中检测例健康对照中检测miRNA的表达情况。的表达情况。在细胞实验进一步探讨在细胞实验进一步探讨miRNA的作用机制
2、的作用机制 研究背景MicroRNAMicroRNA是生物体内长度约为是生物体内长度约为20202323个核苷酸的非编个核苷酸的非编码小码小RNARNA,通过与靶,通过与靶mRNAmRNA的互补配对而在转录后水的互补配对而在转录后水平上对基因的表达进行调控。平上对基因的表达进行调控。最近研究发现血液循环中也存在最近研究发现血液循环中也存在miRNAmiRNA,有希望作为,有希望作为疾病无创诊断或者疾病预后的生物标志物。疾病无创诊断或者疾病预后的生物标志物。Solexa Whole Genome SequencingSolexa Whole Genome Sequencing miRNAs(21
3、-23nt)were most abundant sequences in serum RNAsChen et al.2008 Cell Res.miRNA差异?差异?疾病疾病预后,转归预后,转归血浆循环血浆循环miRNA的表达的表达 预测预测?生物标记物?生物标记物?我们的设想我们的设想我们的研究工作我们的研究工作研究血浆中存在的循环研究血浆中存在的循环miRNA,建立其提取检,建立其提取检测的方法,并且检测血测的方法,并且检测血浆浆miRNA在冠心病人中在冠心病人中的表达情况,寻找疾病的表达情况,寻找疾病发生发展或者影响预后发生发展或者影响预后的生物标记物。的生物标记物。血浆血浆miRNA
4、提取检测基本流程提取检测基本流程血浆循环血浆循环miRNAmiRNA提取方法提取方法血浆血浆miRNA 的提取的提取第四步第四步晾干,加无晾干,加无RNAase水进行溶解,检测浓水进行溶解,检测浓度,保存度,保存第一步第一步ProteinK 消化,消化,Trizol LS和氯仿对和氯仿对血浆进行提取血浆进行提取第三步第三步离心,取得离心,取得RNA沉淀沉淀,70%乙醇洗涤乙醇洗涤第二步第二步异丙醇和核酸共沉淀异丙醇和核酸共沉淀剂对前述水相进行沉剂对前述水相进行沉淀淀血浆循环血浆循环miRNA的检测原理的检测原理实验结果实验结果二、二、miRNA提取方法学的考察(一)提取方法学的考察(一)1、采
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