病理室常用试剂配制方法课件.ppt

1、病理室常用试剂配制方法病理常用试剂及染液的配制 1.苏木素配制方法 2.伊红配制方法 3.脱钙液配制方法 4.盐酸酒精配制方法 5.福尔马林配制方法但要注意加入氧化剂的量不能太多，不要使苏木精分子全部氧化变成苏木红，否则，苏木精染液的染色力减弱甚至失效。1盐酸酒精(即由1ml 37浓盐酸加上99ml1 70酒精配制而成,其实际浓度应该是0.在病理实验制作切片时，我们会经常碰到一些含钙组织，而且钙十分坚硬。但是这些强酸对组织形态会产生不良影响，脱钙作用强对组织破坏性大。氧化汞、碘酸钠作为苏木精的氧化剂，使无染色力的苏木精氧化后转变成有染色力的苏木红。因此，固定的组织愈新鲜愈好，固定组织时，应使用

2、足量的固定液。木素染液有效期3个月。但当加入二价或三价的金属盐如铝、铁盐后，染料分子就能与这些金属盐的离子结合形成色淀。我们常用的脱钙液配制方法是，先将10%福尔马林10ml倒入80ml蒸馏水中，再加入盐酸10ml即可。氧化后，产生的碘化钠是无害的，染液的稳定性好。同时又可增加胞核的选择性染色，使胞核染色质显示得清晰细致。A液苏木素5g充分溶于无水乙醇50ml；醋酸(aceticacid)又名乙酸病理室常用试剂配制方法51g溶于95%酒精100ml中，用玻璃棒研碎溶解后，每100ml加冰醋酸一滴。苏木精染色液的配制 石蜡切片苏木精伊红（HE）染色技术是病理、解剖学、组织胚胎学、法医学和生物学等

3、领域最基本的技术操作。对于苏木精，应该有一个全面的了解，才能对常规的HE染色灵活掌握。苏木精，又称苏木素。苏木精若存放过久或接触空气，颜色可慢慢加深，用其染液就不理想；它易溶于乙醇、乙二醇和甘油，微溶于水；它本身不是一种染料，没有染色性能，需要经过氧化和媒染后，才成为一种很好的细胞核染料。人工氧化是指在配制苏木精染液时加入一定量的氧化剂如氧化汞、碘酸钠等可立即使苏木精氧化成苏木红。但要注意加入氧化剂的量不能太多，不要使苏木精分子全部氧化变成苏木红，否则，苏木精染液的染色力减弱甚至失效。苏木精染色液的配制 苏木精氧化剂中首选碘酸钠。其优点是在室温下易溶于水，不需煮沸就能放氧。氧化后，产生的碘化钠

4、是无害的，染液的稳定性好。而氧化汞需要在苏木精染液煮沸时加入才能放氧，当开始放氧时又要立即把染液置入冷水中终止放氧。随后苏木精染液每天都会在液面形成一层金属膜，需要把染液过滤后才能用以染色，而汞盐也是一种毒性物质。苏木精染色液的配制 苏木精的氧化与下列因素有关苏木精染液PH值。染液偏碱性氧化快，中性时稍慢，酸性时很慢，所以加酸时的苏木精染液可延缓氧化。氧化剂的量。加入人工氧化剂后苏木精可立即被氧化成熟可用。自然氧化和供氧量有关。如靠近阳光、染液通风、经常摇动等可加速氧化。氧化时苏木精液的温度。用碘酸钠等作氧化剂时，在常温下加入即可，而用氧化汞作氧化剂时，需把苏木精液煮沸时加入才能放氧。苏木精染

5、色液的配制 苏木精的媒染 苏木精被氧化成苏木红，为弱酸性，染色浅淡。但当加入二价或三价的金属盐如铝、铁盐后，染料分子就能与这些金属盐的离子结合形成色淀。这种色淀具有阳电荷，和带负电荷的DNA极性吸着而完成染色。这些二价或三价的金属盐就称为媒染剂。苏木精染色液的配制 配制苏木精染液所需试剂的作用 氧化汞、碘酸钠作为苏木精的氧化剂，使无染色力的苏木精氧化后转变成有染色力的苏木红。硫酸铝钾、硫酸铝铵和硫酸铝作为媒染剂，其三价铝离子与苏木红结合形成蓝紫色的色淀与细胞核内核酸的磷酸基牢固结合。无水乙醇较快溶解苏木精，并可抑制霉菌生长。苏木精染色液的配制 配制苏木精染液所需试剂的作用 甘油作为稳定剂，延缓

6、苏木精染液蒸发，防止苏木精过度氧化，延长苏木精液的使用期。冰醋酸可抵销氧化剂的氧化，使苏木精和苏木红保持均衡。同时又可增加胞核的选择性染色，使胞核染色质显示得清晰细致。苏木精染色液的配制 改良LillieMayen苏木素染液的配制 A液苏木素5g充分溶于无水乙醇50ml；B液硫酸铝钾50g溶于蒸馏水650ml；稍加热待完全溶解后把二者混合,再依次加 入碘酸钠0.5g、甘油300ml和冰乙酸20ml,苏 木素染液有效期3个月。苏木精染色液的配制 苏木精染色液的配制 苏木精染液配制是否理想，可从以下几方面检测将几滴苏木精染液滴入一小盘自来水内，滴入的瞬间由红色转为紫色再转为紫蓝色慢慢扩散，则该苏木

7、精液配制得好；若在扩散中仍保持红色，则为未足够成熟或陈旧的苏木精染液。取一块滤纸滴入苏木精染液两滴，苏木精在滤纸上扩散后不久将呈一紫酱色的圆斑，在圆斑的周边最后呈深紫色，这是好的苏木精液。若周边不呈深紫色，说明该染液未够成熟或没有配好。理想的方法还是在实际操作中染一张淋巴结组织切片，在镜下观察其染色效果。苏木精染色液的配制 伊红染色液的配制 伊红Y是一种化学合成的酸性染料，在水中离解成带负电荷的阴离子，与蛋白质的氨基正电荷的阳离子结合使胞浆染色，细胞浆、红细胞、肌肉、结缔组织、嗜伊红颗粒等被染成不同程度的红色或粉红色，与蓝色的细胞核形成鲜明对比。伊红是细胞浆的良好染料。木素染液有效期3个月。苏

8、木精若存放过久或接触空气，颜色可慢慢加深，用其染液就不理想；乙醇(alcohol)；冰醋酸可抵销氧化剂的氧化，使苏木精和苏木红保持均衡。病理常用试剂及染液的配制乙醇(alcohol)；木素染液有效期3个月。加入人工氧化剂后苏木精可立即被氧化成熟可用。伊红染色液有效期3个月。此液久存自行分解，形成的白色沉淀为副醛(三聚甲醛或多聚甲醛)。用于脱钙的试剂很多，脱钙剂包括有机酸、无机酸、乙二胺四乙酸（EDTA）除此之外还有电解脱钙法。日常工作中用于组织固定的10%福尔马林，是由甲醛原液与蒸馏水1:9混合配制而成，实际浓度含甲醛为4。先将伊红0.51g溶于95%酒精100ml中，用玻璃棒研碎溶解后，每1

9、00ml加冰醋酸一滴。用乙醇性伊红液染细胞浆后，可不经水洗直接用85%酒精脱水。伊红染色液有效期3个月。伊红染色液的配制 在病理实验制作切片时，我们会经常碰到一些含钙组织，而且钙十分坚硬。加入人工氧化剂后苏木精可立即被氧化成熟可用。在病理实验制作切片时，我们会经常碰到一些含钙组织，而且钙十分坚硬。51g溶于95%酒精100ml中，用玻璃棒研碎溶解后，每100ml加冰醋酸一滴。自然氧化和供氧量有关。木素染液有效期3个月。加入人工氧化剂后苏木精可立即被氧化成熟可用。5g、甘油300ml和冰乙酸20ml,苏3.氧化时苏木精液的温度。同时又可增加胞核的选择性染色，使胞核染色质显示得清晰细致。病理室常用

10、试剂配制方法随后苏木精染液每天都会在液面形成一层金属膜，需要把染液过滤后才能用以染色，而汞盐也是一种毒性物质。强有机酸，如硝酸和盐酸可用于密皮质骨的脱钙，在短时间内可除去大量的钙。如靠近阳光、染液通风、经常摇动等可加速氧化。脱钙液的配制 在病理实验制作切片时，我们会经常碰到一些含钙组织，而且钙十分坚硬。由于组织中的钙和石蜡之间的密度不同，含钙的组织一般不能直接制作切片。因此，脱钙是制作骨组织切片的重要环节 用于脱钙的试剂很多，脱钙剂包括有机酸、无机酸、乙二胺四乙酸（EDTA）除此之外还有电解脱钙法。强有机酸，如硝酸和盐酸可用于密皮质骨的脱钙，在短时间内可除去大量的钙。但是这些强酸对组织形态会产

11、生不良影响，脱钙作用强对组织破坏性大。脱钙液的配制 我们常用的脱钙液配制方法是，先将10%福尔马林10ml倒入80ml蒸馏水中，再加入盐酸10ml即可。脱钙液的有效期3个月。脱钙液的配制 我们常用的脱钙液配制方法是，先将10%福尔马林10ml倒入80ml蒸馏水中，再加入盐酸10ml即可。盐酸酒精的配制方法是，用滴定管配合吸耳苏木精若存放过久或接触空气，颜色可慢慢加深，用其染液就不理想；这种色淀具有阳电荷，和带负电荷的DNA极性吸着而完成染色。1盐酸酒精(即由1ml 37浓盐酸加上99ml1 70酒精配制而成,其实际浓度应该是0.球转移盐酸1ml至99ml 70%乙醇中混匀即可。我们常用的脱钙液

12、配制方法是，先将10%福尔马林10ml倒入80ml蒸馏水中，再加入盐酸10ml即可。醋酸(aceticacid)又名乙酸1盐酸酒精(即由1ml 37浓盐酸加上99ml1 70酒精配制而成,其实际浓度应该是0.它易溶于乙醇、乙二醇和甘油，微溶于水；对于苏木精，应该有一个全面的了解，才能对常规的HE染色灵活掌握。苏木精若存放过久或接触空气，颜色可慢慢加深，用其染液就不理想；盐酸酒精的配制 1盐酸酒精(即由1ml 37浓盐酸加上99ml1 70酒精配制而成,其实际浓度应该是0.37)的分化作用,主要是依靠盐酸在水中电离出H+,改变组织表面的电荷,使过染和吸附的苏木素染料从组织中脱离,达到其分化目的。

13、37)的分化作用,主要是依靠盐酸在水中电离出H+,改变组织表面的电荷,使过染和吸附的苏木素染料从组织中脱离,达到其分化目的。石蜡切片苏木精伊红（HE）染色技术是病理、解剖学、组织胚胎学、法医学和生物学等领域最基本的技术操作。理想的方法还是在实际操作中染一张淋巴结组织切片，在镜下观察其染色效果。伊红染色液有效期3个月。病理常用试剂及染液的配制木素染液有效期3个月。随后苏木精染液每天都会在液面形成一层金属膜，需要把染液过滤后才能用以染色，而汞盐也是一种毒性物质。木素染液有效期3个月。苏木精若存放过久或接触空气，颜色可慢慢加深，用其染液就不理想；B液硫酸铝钾50g溶于蒸馏水650ml；配制苏木精染液

14、所需试剂的作用醋酸(aceticacid)又名乙酸 盐酸酒精的配制方法是，用滴定管配合吸耳 球转移盐酸1ml至99ml 70%乙醇中混匀即可。1%盐酸酒精有效期3个月。盐酸酒精的配制日常工作中用于组织固定的10%福尔马林，是由甲醛原液与蒸馏水1:9混合配制而成，实际浓度含甲醛为4。乙醇(alcohol)；在病理实验制作切片时，我们会经常碰到一些含钙组织，而且钙十分坚硬。苏木精若存放过久或接触空气，颜色可慢慢加深，用其染液就不理想；苏木精若存放过久或接触空气，颜色可慢慢加深，用其染液就不理想；改良LillieMayen苏木素染液的配制木素染液有效期3个月。伊红Y是一种化学合成的酸性染料，在水中离

15、解成带负电荷的阴离子，与蛋白质的氨基正电荷的阳离子结合使胞浆染色，细胞浆、红细胞、肌肉、结缔组织、嗜伊红颗粒等被染成不同程度的红色或粉红色，与蓝色的细胞核形成鲜明对比。1%盐酸酒精有效期3个月。因此，固定的组织愈新鲜愈好，固定组织时，应使用足量的固定液。醋酸(aceticacid)又名乙酸37)的分化作用,主要是依靠盐酸在水中电离出H+,改变组织表面的电荷,使过染和吸附的苏木素染料从组织中脱离,达到其分化目的。福尔马林的配制 固定的目的是在于尽量使组织和细胞保持与生活时相仿的成分和形态，迅速防止组织、细胞的死后变化，防止自溶与腐败，使细胞内的蛋白质、脂肪、糖、酶等各种成分转变成不溶性物质，使组

16、织中的各种物质沉淀和凝固起来。因此，固定的组织愈新鲜愈好，固定组织时，应使用足量的固定液。固定液的种类很多，分为单纯固定液和混合固定液。常用单纯固定液 1.甲醛(formaldehyde）；2.乙醇(alcohol)；3.醋酸(aceticacid)又名乙酸 福尔马林的配制 甲醛为非沉淀性固定剂，是一种约有40重量溶于水的气体，易挥发，市售的为40的甲醛水溶液，也称为福尔马林原液(formalin)。此液久存自行分解，形成的白色沉淀为副醛(三聚甲醛或多聚甲醛)。福尔马林的配制固定的目的是在于尽量使组织和细胞保持与生活时相仿的成分和形态，迅速防止组织、细胞的死后变化，防止自溶与腐败，使细胞内的蛋

17、白质、脂肪、糖、酶等各种成分转变成不溶性物质，使组织中的各种物质沉淀和凝固起来。A液苏木素5g充分溶于无水乙醇50ml；1盐酸酒精(即由1ml 37浓盐酸加上99ml1 70酒精配制而成,其实际浓度应该是0.稍加热待完全溶解后把二者混合,再依次加苏木精的氧化与下列因素有关苏木精若存放过久或接触空气，颜色可慢慢加深，用其染液就不理想；在病理实验制作切片时，我们会经常碰到一些含钙组织，而且钙十分坚硬。如靠近阳光、染液通风、经常摇动等可加速氧化。这种色淀具有阳电荷，和带负电荷的DNA极性吸着而完成染色。木素染液有效期3个月。染液偏碱性氧化快，中性时稍慢，酸性时很慢，所以加酸时的苏木精染液可延缓氧化。

18、但当加入二价或三价的金属盐如铝、铁盐后，染料分子就能与这些金属盐的离子结合形成色淀。乙醇(alcohol)；A液苏木素5g充分溶于无水乙醇50ml；但当加入二价或三价的金属盐如铝、铁盐后，染料分子就能与这些金属盐的离子结合形成色淀。51g溶于95%酒精100ml中，用玻璃棒研碎溶解后，每100ml加冰醋酸一滴。苏木精若存放过久或接触空气，颜色可慢慢加深，用其染液就不理想；5g、甘油300ml和冰乙酸20ml,苏苏木精若存放过久或接触空气，颜色可慢慢加深，用其染液就不理想；但是这些强酸对组织形态会产生不良影响，脱钙作用强对组织破坏性大。B液硫酸铝钾50g溶于蒸馏水650ml；此液久存自行分解，形成的白色沉淀为副醛(三聚甲醛或多聚甲醛)。配制苏木精染液所需试剂的作用37)的分化作用,主要是依靠盐酸在水中电离出H+,改变组织表面的电荷,使过染和吸附的苏木素染料从组织中脱离,达到其分化目的。日常工作中用于组织固定的10%福尔马林，是由甲醛原液与蒸馏水1:9混合配制而成，实际浓度含甲醛为4。其固定液渗透能力很强，固定均匀，对组织收缩小。福尔马林的配制